Лабораторна діагностика герпесу - відомості про герпетичної інфекції

Для діагностики герпетичної інфекції використовуються всі лабораторні реакції - від цитологічних досліджень до молекулярно-біологічних методів.
Матеріалом для виділення вірусу з метою діагностики герпетичної інфекції може служити вміст герпетичних пухирців, зіскрібки з рогової оболонки і рідини з передньої камери ока, кров, слина, сеча, спинномозкова рідина фекалії шматочки тканини мозку, печінки, нирок, селезінки, легенів лімфатичні вузли, взяті на біо- або аутопсії.

Інфекційний матеріал можна довго зберігати при -70 ° С, тоді як при температурі -20 ° С він швидко інактивується. Віруссодержащего тканини можуть бути збережені більше 6 місяців при 4 ° С, якщо вони знаходяться в 50% розчині гліцерину.
Існує цілий ряд спеціальних методів для виявлення вірусних антигенів, специфічних антитіл і вірусіндуцірованная морфологічно змінених клітин.
Найбільш доступним і технічно нескладним є цитологічний метод, який дозволяє вивчити морфологічні зміни в клітинах, інфікованих вірусом простого герпесу. Ефективність методу залежить від отримання достатньої кількості клітин для дослідження. Наявність внутріядерних включень, характерних для репродукції вірусу герпесу, служить підтвердженням діагнозу. Слід пам`ятати, що внутрішньоядерні включення виявляються тільки після негайної фіксації мазків зіскрібка в абсолютному спирті з подальшим забарвленням за Романовським-Гімзою. Морфологічні зміни, індуковані вірусом простого герпесу, можна також виявити в зрізах тканин інфікованих органів. Характерним для герпетичної інфекції є: наявність багатоядерних клітин, внутріядерних включень і в деяких випадках геморагії. При генералізованої формі захворювання багатоядерні клітини з еозинофільними включеннями знаходять в зонах некротизованихтканин різних органів (мозок, печінка, нирки, надниркові залози, епітелій бронхів і трахеї).

Відео: Діагностика генітального герпесу

Метод імунофлуоресценції - є методом експрес-діагностики герпетичної інфекції і дозволяє протягом 1-2 годин визначати наявність герпесвірусних антигенів в клінічному матеріалі (зішкріб з шкіри і слизових оболонок, зрізи біопсірованной органів). Ідентифікація антигенів вірусу простого герпесу може бути виконана в різних модифікаціях методу імунофлуоресценції - прямий, непрямий, із застосуванням міченого комплементу.

З серологічних методів ідентифікації найбільш часто використовують реакцію зв`язування комплементу (РСК), особливо в мікромодіфікаціі її постановки. Мікрометоди використовують і для виявлення вірусу простого герпесу в реакціях нейтралізації, пасивної гемаглютинації і в інших серологічних тестах. Чутливість перерахованих методик різна.
В даний час одним з найбільш чутливих методів діагностики герпетичної інфекції є метод імуноферментного аналізу (ІФА), що дозволяє виявляти, в залежності від виду біологічного матеріалу, як вірусспеціфіческой антигени, так і вірусспеціфіческой антитіла класу IgM, IgG.

Відео: Діагностика ВІЛ: ІФА, ПЛР, експрес-тест на ВІЛ

Метод ЛІФА - лантанідних ІФА з використанням моноантітел до вірусу простого герпесу, мічених іонами європію "Eu". Від методу ІФА відрізняється тим, що для індикації результатів використовують флуоресціюючий барвник. Останній, кон`югований з антитілами, використовується в другій фазі реакції, порушується коротким спалахом світла, після чого в рідкій фазі слідом за короткою затримкою відзначається специфічна флуоресценція. Після сорбції антитіл на планшети аналіз методом ЛІФА займає лише 15-20 хвилин.
Метод молекулярної гібридизації нуклеїнових кислот для детекції вірусної ДНК заснований на взаємодії клонованих в бактеріальних клітинах вірусних генних зондів, з оригінальними фрагментами ДНК і застосуванням після радіоізотопного мічення зондів для ідентифікації вірусних геномів в клінічному матеріалі. Результати аналізу отримують протягом - 1-2 днів.
Для виділення вірусу герпесу використовують різні об`єкти з метою зараження: 6-8 грамів білих мишей (в мозок), на ХАО 12 денних курячих ембріонів і різноманітні клітинні культури (перещеплюваних культури: нирки мавп, людини, кролика, курячі та людські фібробласти). Дуже чутливим і специфічним для вірусу простого герпесу є метод зараження на скаріфіцірованную рогівку кролика. Для виділення вірусу рекомендується використовувати одномоментно 2-3 методу (таблиця Схема виділення і ідентифікація вірусу простого герпесу).