Визначення специфічної реактивності - практичні навички педіатра
В основі взаємодії реакції антиген - антитіло лежить висока взаємна специфічність. Кожне антитіло вступає в реакцію тільки з таким антигеном, який викликав його освіту. Специфічна реактивність є біологічну перебудову організму у відповідь на повторне введення антигену.
Багато антигени є алергенами, т. Е. Речовинами, здатними при вступі в реакцію антиген - антитіло викликати змінену реактивність організму алергію. Алергеном, що володіють антигенними властивостями, можуть стати мікробні і вірусні антигени, антибіотики та інші лікарські речовини, сироваткові і тканинні білки, окремі хімічні елементи (йод, бром).
Розрізняють алергічні реакції негайного й уповільненого типів. Реакції негайного типу проявляються через кілька хвилин після повторного введення в сенсибілізований організм відповідного алергену. До них відносять анафілаксію, сироваткову хворобу, сінну лихоманку, вазомоторний риніт, атопічний дерматит і ідіосинкразію (харчову і лікарську). Алергічна реакція негайного типу певну роль грає при таких захворюваннях у дітей, як бронхіальна астма, ревматизм, гострий гломерулонефрит, геморагічний васкуліт та ін. Реакції сповільненого типу, що розвиваються через 24-48 год після повторного введення алергену в раніше сенсибілізований організм, мають місце при деяких бактеріальних інфекціях (туберкульоз, бруцельоз, туляремія та ін.), грибкових і паразитарних захворюваннях, контактний дерматит. Одним з методів виявлення алергічних реакцій негайного та уповільненого типів є кожноаллергіческіе проби. У механізмі реакції гіперчутливості уповільненої типу головну роль відіграють лімфоїдні клітини.
Шкірно-алергічні проби. У період сенсибілізації організму специфічні антитіла (реагіни) фіксуються в шкірі. Якщо потім на шкіру нанести відповідний алерген, то відбувається специфічна реакція антиген - антитіло з вивільненням гістаміну і утворенням на поверхні шкіри через 15-20 хвилин почервоніння і пухиря. Цей механізм лежить в основі шкірних проб для виявлення реакції гіперчутливості негайного типу. Прикладом може служити проба на чутливість до пеніциліну.
Скаріфікаціонние проби більш чутливі, ніж перкутанні (краплинні), досить специфічні і в порівнянні з внутрішньошкірним пробами рідше дають хибнопозитивні результати. Постановка їх практично безпечна. Одночасно можна проводити до 15 проб з різними алергенами, що дозволяє отримати багату інформацію про сенсібілізірованіе організму дитини.
Після обробки шкіри внутрішньої поверхні передпліччя 70% спиртом на неї наносять краплю алергену, через яку пером Дженнера виробляють поверхневу подряпину. Якщо одночасно пробу ставлять з декількома алергенами, то для кожного з них необхідно використовувати окремий скарифікатор. Результати враховують при порівнянні реакції з контролем, позначаючи вираженість плюсами. Реакція слабоположітельная (+), гіперемія і набряк - среднеположітельная (+ +), гіперемія, набряк і везикули - різко позитивна (_ [__] - гіперемія з псевдоподиями і пухир діаметром більше 10 мм - більше різкопозитивна (+ + + +).
Внутрішньошкірні алергічні проби в 100 разів чутливіші, ніж скаріфікаціонние. Зазвичай вони використовуються для виявлення гіперчутливості уповільненої типу до бактеріальних алергенів. Внутрішньошкірні алергічні проби застосовують тільки після скаріфікаціонних проб. Недолік їх - у небезпеці розвитку генералізованих реакцій і появи шоку.
Протипоказання для постановки шкірних проб: 1) період загострення основного захворювання (бронхіальна астма та ін,) - 2) гострі інтеркурентних і інфекційні захворювання-3) гостра стадія ревматізма- 4) туберкульоз в період обостренія- 5) психічні захворювання в період обостренія- 6 ) декомпенсированное стан при захворюваннях серцево-судинної системи, печінки, нирок і кровотворної системи.
Прикладом внутрішньошкірної проби може служити реакція Манту, широко застосовувана в педіатричній практиці.
Внутрішкірна туберкулінова проба Манту. для
виявлення гиперергических реакцій на туберкулін з 1975 р в нашій країні застосовується єдина туберкулінова проба Манту з 2 ТО туберкуліну (туберкуліновими одиницями). З цією метою використовується стандартний вітчизняний туберкулін Линникова - ППД Л. Препарат випускається у формі готових до споживання розчинів у флаконах місткістю 5 мл (50 доз) і 3 мл (30 доз). Одна доза 2 ТО міститься в 0,1 мл розчину. Препарат повинен зберігатися в затемненому місці при температурі від 0 до +4 ° С. В таких умовах термін придатності його 12 місяців.
Внутрішню поверхню передпліччя обробляють 70% спиртом і осушують ватою. Тонку коротку стерильну голку зрізом вгору вводять в поверхневий шар шкіри, а через неї з окремого для кожної дитини Однограмовий туберкулінового шприца - 0,1 мл (1 дозу) розчину туберкуліну. На місці введення туберкуліну утворюється невеликий щільний інфільтрат білого кольору. При виконанні маніпуляції важливо дотримуватися стерильність.
Результат реакції Манту враховують через 72 год. Лінійкою вимірюють і реєструють поперечний по відношенню до осі руки розмір папули. Реакція вважається позитивною при інфільтраті від 5 мм і більше, сумнівною при 2-4 мм і негативною при відсутності інфільтрату та гіперемії або наявності папули як реакції на укол діаметром не більше 1 мм. Можливі гіперергічні реакції, коли діаметр інфільтрату досягає 17 мм і більше або якщо на місці ін`єкції відбулися везікулонекротіческіе зміни з лімфаденітом регіонарних лімфатичних вузлів або без нього.
Метод розеткоутворення для визначення Т- і 11- лімфоцитів в периферичної крові. В останні десятиліття активно вивчався клітинний і гуморальний імунітет і багато наукові розробки впроваджені в клінічну практику. Серед Т-лімфоцитів були відкриті супресори, хелпери, кілери, клітини антителозависимой цітотоксічності- серед В лімфоцитів виявлено специфічні відмінності по мембранним імуноглобулінів.
В основу методу визначення Т- і В-лімфоцитів покладено принцип, згідно з яким поверхневі рецептори, специфічні для різних субпопуляцій лімфоцитів, виявляються тим, що пов`язують введені в субстрат еритроцити барана нативні або навантажені антитілами до цих рецепторів, внаслідок чого навколо лимфоцита утворюється розетка. При аналізі враховуються тільки ті розетки, в яких до лімфоцити приєдналися 3-5 еритроцитів. Розеткоутворення посилюється при обробці еритроцитів нейрамінідазою.
Т-лімфоцити мають рецептори для еритроцитів барана.
В-лімфоцити виявляють по їх здатності утворювати розетки з баранячими еритроцитами, навантаженими антитілами в середовищі комплементу. Розеткоутворення in vitro відбувається також після обробки сенсибілізованих лімфоцитів танніновой кислотою і фіксації на їх поверхні туберкуліну, пеніциліну або інших алергенів.
При тяжкому перебігу ряду хронічних захворювань показник спонтанного розеткоутворення, що характеризує функціональний стан Т-лімфоцитів, знижений. При гиперсенсибилизации показник специфічного розеткоутворення, що характеризує В-систему лімфоцитів, часто підвищено.
Визначення кількості імуноглобулінів у крові. Кількісне визначення імуноглобулінів в крові має діагностичне значення при вроджених імуно дефіцитних станах, мієломної хвороби і деяких синдромах з гіперпродукцією одного або декількох класів імуноглобулінів (хвороба Вальденстрема і ін.). При багатьох захворюваннях цей показник важливий для диференціальної діагностики і прогнозу. Рівень вмісту імуноглобулінів допомагає судити про активність патологічного процесу і стадії захворювання.
Кількісне визначення імуноглобулінів в крові частіше виробляють методом простої радіальної дифузії по Манчіні. Детально цей метод викладено Д. В. Стефані і Ю. Є. Вельтіщева (1977). Наводимо основні принципи кількісного визначення.
У агарових гелі з моноспеціфіческой сироваткою роблять лунки, які заповнюють декількома разведениями антигену з відомою концентрацією. Сюди ж вводять досліджувану сироватку. Стандартний антиген, який представляє собою імуноглобулін, дифундує в гелі і вступає у взаємодію з антисироваткою. В результаті реакції, яка відбувається між антигеном і антитілом сироватки, навколо лунки утворюється кільце преципітації. Діаметр такого кільця прямо пропорційний концентрації антигену. При побудові графіка залежності квадрата діаметра кільця від концентрації антигену отримують пряму лінію. Для визначення кількості імуноглобулінів вимірюють діаметр кільця досліджуваної сироватки і за графіком з`ясовують концентрацію антигену. Результат враховують через 24 год для імуноглобулінів G і А, а через 48 год - для імуноглобуліну М. Метод дозволяє визначити концентрацію імуноглобулінів до 0,003 мг / мл, при цьому помилка зазвичай не перевищує 10%.
Дослідження секреторних імуноглобулінів ускладнюється тим, що їх кількість в секретах значно менше, ніж в сироватці крові. Для виявлення секреторних імуноглобулінів методом простої радіальної імунодифузії вдаються до зменшення концентрації диспергує в агарі сироватки. Крім того, вживаються заходи до окремого обліку імуноглобуліну А, який може бути присутнім в досліджуваному секреті. Дані про кількісний вміст секреторних імуноглобулінів в слині, назальному секреті, сечі здорових дітей в залежності від віку призводить Д. Ф. Стефані (1979).
Реакція Кумбса. Призначена для виявлення антиеритроцитарних антитіл. Застосовують реакції Кумбса двох видів - пряму і непряму. Пряма реакція дозволяє визначити фіксовані на поверхні еритроцитів неповні (одновалентні) антитіла, непряма виявляє неповні антитіла, що знаходяться у вільному стані в плазмі.
Пряма реакція Кумбса позитивна при аутоімунних формах гемолітичної анемії, тромбоцитопенія. Однак при великому руйнуванні еритроцитів в період гемолітичного кризу реакція може бути негативною.
У разі постановки непрямий проби Кумбса для виявлення неповних антитіл, які перебувають у вільному стані в плазмі, спочатку виробляють фіксацію неповних антитіл сироватки на еритроцити.
