Дослідження ліпідного обміну - практичні навички педіатра

Фізіологічна роль ліпідів багатогранна. Вони утворюють ліпідну матрицю структурних елементів клітин і їх органел, беруть участь в енергетичному обміні, служать вихідним матеріалом для синтезу стероїдних гормонів, з`єднань, що володіють властивостями вітаміну D, грають важливу роль в згортанні крові, імунологічних процесах, травленні. Похідними ліпідів (поліенових кислот) є простогландини - з`єднання, що характеризуються високою біологічною активністю і виконують в організмі різні функції.
Головні ліпідні компоненти крові: фосфоліпіди, вільний і ефіросвязанного (ефіри холестерину) холестерини, тригліцериди (нейтральні ліпіди), неестеріфіцірованних жирні кислоти, ряд продуктів проміжного обміну.
Плазмові ліпіди первинно в воді нерозчинні. Вони транспортуються в крові у вигляді ліпопротеїдів. Ці агрегати складаються зі специфічних апопротеинов і представників класу ліпідів: тригліцеридів, холестерину, ефіру холестерину і фосфоліпідів.
Для оцінки стану ліпідного обміну в клініці визначають загальні ліпіди і окремі ліпідні фракції крові, ліпопротеїди сироватки (плазми), кетонові тіла в крові і сечі, активність панкреатичної і постгепариновую (липопротеиновой) ліпази, а також лецетін- холестерин-ацілтрансферази, проводять навантажувальні проби жирами , вуглеводами, пробу з ліпоідолом, вивчають ліпідний спектр калу, використовують ізотопні методи дослідження.
Для визначення загальних ліпідів сироватки крові широко застосовується метод, розроблений Целнер і Кірш (1962). Заснований цей метод на реакції ліпідів з так званим сульфо-фосфованіліновим реактивом. Метод високо чутливий, технічно простий, дає досить відтворювані результати. Найбільш зручним варіантом з існуючих методів, заснованих на сульфо-фосфованіліновой реакції, є модифікація, розроблена Ю А. Баришниковим, Ю. Є. Вельтіщева і ін. (1966).
Визначення загальних ліпідів в сироватці за допомогою сульфофо-сфованіліновой реакції. В основі методу лежить кольорова реакція продуктів розпаду ненасичених ліпідів з сульфо-фосфованіліновим реактивом.
До 0,01 мл сироватки додають 0,4 мл концентрованої сірчаної кислоти і ставлять на водяну баню при 100 ° С на 20 хв. Після охолодження до суміші додають 1,6 мл фосфорно-ванілінова реактиву (0,6% розчин ваніліну в концентрованої фосфорної кислоти в співвідношенні 1: 4) і струшують. Через годину пробу фотометрируют на ФЕК при зеленому світлофільтрі в 3 мм кюветі проти контролю (0,01 мл дистильованої води, обробленої так само, як і сироватка).

Табл. 50. Ліпідні фракції сироватки крові у дітей.

Вміст загальних ліпідів розраховують за калібрувальним графіком, отриманого зі стандартними розчинами триолеином, або визначають за формулою

де С - концентрація стандартного розчину, г / л.
Якщо реакцію з триолеином прийняти за 100%, то рівні кількості інших ліпідів складуть: холестерин - 91% екстінціі, лінолева кислота - 77,5, фосфоліпіди - 53,7 і стеаринова кислота - 19%.
Рівень загальних ліпідів в пуповинної крові найнижчий. Протягом перших тижнів життя вміст ліпідів в сироватці крові швидко підвищується і коливається від 5,99 до 6,82 г / л (табл. 50).
Підвищення ліпідів в сироватці крові (гіперліпемія) спостерігається при цукровому діабеті, панкреатитах, гострих і хронічних гепатитах, ожирінні, гострих і хронічних нефритах з набряками, ексудативному діатезі, токсікозах- зниження (гіполіпемія) - при гіпотрофії, гіпертиреозі, діареях, гострому некрозі печінки.

Визначення загального холестерину

Загальний холестерин є сумою вільного і естеріфіцірованний холестерину. Як уніфікованих затверджені прямий метод Ілька, заснований на реакції Лібермана - Бурхарда, і прямий метод, заснований на реакції Златкіс - Зака. Найбільш широко використовується метод Ілька. В основі цього методу лежить наступний принцип: холестерин в присутності оцтового ангідриду і суміші оцтової та сірчаної кислот дає зелене забарвлення.
Техніка визначення така. До 2,1 мл реактиву Лібермана- Бурхарда (1 частина крижаної оцтової кислоти, 5 частин оцтового ангідриду і 1 частина концентрованої сірчаної кислоти) повільно по стінці пробірки додають 0,1 мл сироватки крові. Пробірку енергійно струшують 10-12 разів, потім термостатируют 20 хвилин при 37 ° С і колориметрируют проти реактиву Лібермана - Бурх Арда на ФЕК при червоному світлофільтрі в 5 мм кюветі. Зміст загального холестерину розраховують за калібрувальним графіком, побудованим за разведениям стандартного розчину холестерину. Нормальні значення холестерину у дітей коливаються від 2,67 до 4,61 ммоль / л (див. Табл. 50).
Гіперхолестеринемія часто спостерігається при нефротичному синдромі, мікседемі, цукровому діабеті, глікогенній хворобі, атеросклерозі, ксантоматоз, захворюваннях печінки і жовчних шляхів, особливо при порушеннях відтоку жовчі.
Важливе значення для диференціальної діагностики застійної і паренхіматозної жовтяниці має дослідження фракцій холестерину. При механічних жовтяниці зростає рівень або одного вільного холестерину, або вільного і етерифікованих. Для гепатитів характерно зниження ефірів холестерину, пропорційне ступеня порушення функції печінки. Збільшення ефірів холестерину в динаміці хвороби говорить про поліпшення процесу, зменшення - про погіршення. У нормі коефіцієнт етерифікації холестерину (відношення ефірів холестерину до загального холестерину) у дітей становить 0,6-0,8. При ураженні паренхіми печінки він може зменшуватися до 0,4-0,2 і навіть 0,15.
Гіпохолестеринемія спостерігається при важких паренхіматозних ураженнях печінки, печінковій комі, хворобі Аддісона, гострих панкреатитах, розладах харчування, вроджених гемолітичних анеміях та ін.
Визначення загальних фосфоліпідів в сироватці крові. Зміст фосфоліпідів визначають по концентрації ліпідного фосфору, на частку якого припадає 4% відносної молекулярної маси (метод блюр).
Як уніфікованого запропонований метод визначення загальних фосфоліпідів сироватки за змістом загального фосфору в липопротеидах, загрожених трихлороцтової кислотою (В Г. Колб, В. С. Камишніков, 1976). Метод заснований на наступному принципі: фосфоліпіди осідають трихлороцтової кислотою (разом з білками крові), в отриманому осаді визначається вміст фосфору.
Нормальні значення фосфоліпідів в сироватці крові у дітей коливаються від 0,79 ммоль / л у новонароджених до 2,21 ммоль / л у дітей старшого віку (див. Табл. 50).
Підвищення вмісту фосфоліпідів в сироватці крові може спостерігатися в початковому періоді гепатиту, при застійної жовтяниці, хронічному нефриті, важкій формі цукрового діабету, портальному цирозі, есенціальною Гіперліпемія, постгеморагічних анеміях, На типі гиперлипопротеидемий. Зниження концентрації фосфоліпідів відзначається при ураженнях печінки - вірусному і токсичному гепатиті в розпал захворювання, постнекротіческом цирозі і особливо жирової дистрофії печінки, при атеросклерозі, різних формах анемій, гострих гарячкових станах, аліментарної дистрофії, гіпотиреозі та ін.
Тонкошарова хроматографія ліпідів. Проводиться на тонкому шарі силікагелю - найбільш ефективний високочутливий метод, застосування якого дозволяє одномоментно досліджувати ліпідний спектр в дуже малих обсягах крові. Для кількісної оцінки хроматограми ліпідів використовуються два способи: 1) виявлення ліпідних фракцій на пластині, їх ідентифікація, видалення разом з сорбентом і рідинне елюювання. Кількісне визначення витягнутих фракцій можна проводити за допомогою специфічних і неспецифічних хімічних реакцій- 2) пряма денситометрія на пластині ліпідних фракцій, забарвлених фосфорномолібденовой кислотою (Л. А. Ахрем, А. І. Кузнецов, 1965). Розроблено метод визначення ліпідного спектра крові (В. С. Данильчик, 1977). Для визначення 10-11 ліпідних фракцій досить 0,02 мл проби (плазми або еритроцитів), яку можна взяти з пальця.
Лабораторні методи визначення ліпопротеїдів. Найбільш простий і доступний турбодіметріческій метод визначення (3-ліпопротеїдів по Бруштейн і Самай. Принцип заснований на здатності p-ліпопротеїдів сироватки крові осідати під впливом кальцію в присутності гепарину при тій чи іншій реакції середовища (В. Г. Колб, В. С. Камишніков , 1976).