Методи дослідження обміну білків - практичні навички педіатра
Показники загального білка плазми крові і його окремих фракцій мають важливе значення в діагностиці багатьох захворювань.
Визначення загального білка сироватки крові. Може здійснюватися за допомогою ряду методів (азотометріческіе, гравіметричні, нефелометрические, Рефрактометричні, спектрофотометричні та ін.). З колориметрических способів біуретова реакція найбільш специфічний, досить чутливий, точний і практично доступний. Цей метод представлений в якості уніфікованого для визначення загального білка в сироватці крові. Заснований він на такому принципі: білки реагують в лужному середовищі з міді сульфатом, утворюючи з`єднання, пофарбовані у фіолетовий колір.
Техніка визначення загального білка така. До 5 мл робочого розчину біуретового реактиву (4,5 г сегнетової солі розчиняють в 40 мл 0,2 н. NaOH, додають 1,5 г C11SO4 • 5Н2О і 0,5 г К1 і доливають до 100 мл 0,2 н. NaOH ) додають 0,1 мл сироватки крові. Через 30 хвилин пробу колориметрируют на ФЕК в 10 мм кюветі при зеленому світлофільтрі проти контролю. Для приготування контролю до 5 мл біуретового реактиву додають 0,1 мл 0,9% NaCl. Розрахунок ведуть за калібрувальним графіком.
Нормальна концентрація загального білка у дорослих коливається від 62 до 82 г / л. Дані по віковим групам у дітей представлені в табл. 49.
Таб.г. 49. Зміст білкових фракцій у відсотках від загальної кількості білка (середні дані) по віковим групам (по Ю. Є. Вельтіщева, 1979)
Найбільш частими причинами розвитку гіпопротеінеміп є недостатнє надходження білків в організм з їжею (білкове голодування), значні втрати білка і пригнічення процесів біосинтезу білків крові.
Недостатнє надходження білків в організм спостерігається при порушеннях діяльності шлунково-кишкового тракту (звуження стравоходу, пілороспазм і пілоростеноз, пухлини, запальні процеси шлунково-кишкового тракту та ін.), Малому вмісті білка в раціоні або незбалансованому амінокислотним складом і ін
До втрат білка організмом ведуть захворювання нирок, що протікають з протеїнурією, гострі і хронічні кровотечі, великі ексудати і випоти в серозні порожнини, опіки та ін.
Гипопротеинемия, пов`язана зі зниженням біосинтезу білка в печінці, зустрічається при хронічних гепатитах, інтоксикаціях, цирозах, тривалих гнійних процесах, злоякісних утвореннях і ін.
Гіперпротеїнемія-явище порівняно рідке. Спостерігається при ексікоз, нецукровому діабеті, непрохідності кишечника, генерализованном перитоніті, мієломної хвороби (стійка до 120 г / л).
Методи визначення білкових фракцій в сироватці крові. Дослідження кількісних стосунках між окремими білковими фракціями має важливе діагностичне значення, так як дозволяє диференціювати окремі види гіпо- та гіперпротеїнемії, а також ряд захворювань, що не супроводжуються зміною змісту загального білка.
Для фракціонування білків плазми використовуються висолювання нейтральними солями, електрофоретичної фракціонування, імунологічні і седиментаційних методи, преціпітірованіе етиловим спиртом при низькій температурі, хроматографія, гельфільтраціі. Найбільш часто з них застосовуються електрофоретичні методи, засновані на різній швидкості пересування білків в електричному полі в залежності від їх електричного заряду і інших фізичних і хімічних властивостей.
Широке поширення отримали методи електрофорезу на папері і гелях - агаровом, крохмальної і інших, особливо на поліакриламідному гелі, за допомогою якого можна отримати близько 30 фракцій білка. Найчастіше почали застосовувати електрофорез на плівках ацетату целюлози. Однак в клініко-діагностичних лабораторіях використовується переважно метод електрофорезу на папері (В. Г. Колб, В. С. Камишніков, 1976). В основі цього методу лежить наступний принцип: під впливом постійного електричного поля білки сироватки, що володіють електричним зарядом, рухаються по змоченою буферним розчином папері зі швидкістю, яка залежить від величини заряду і молекулярної маси. Білки сироватки крові при цьому поділяються на п`ять фракції: альбуміни і глобуліни а1, а2, в, у.
Нормальне співвідношення альбумінів і глобулінів (альбумін-глобуліновий коефіцієнт) дорівнює приблизно 2: 1. Процентне співвідношення окремих фракцій білків у дорослих і дітей в залежності від віку представлено в табл. 49. Загальна кількість білка і білкових фракцій в крові змінюється при різних захворюваннях у дітей.
У дорослих і дітей старшого віку виділяють наступні типи електрофореграм: I) гострого запального процесу-2) підгострого хронічного воспаленія- 3) нефротичного сімптомокомплекса- 4) злоякісних новообразованіі- 5) гепатітов- 6) цирозу печінки-7) механічної желтухі- 8) у - і р-глобулінових плазмацітом.
У першому типі відзначається зниження рівня альбумінів і підвищення a1, а2-глобулінів, а в більш пізніх стадіях і у-глобулінов- в другому - помірне зменшення фракцій альбумінів і виражене збільшення а2, у-глобулінових фракцій- в третьому - значне зменшення альбумінів, підвищення а-глобулінів при помірному зниженні у-глобулінов- в четвертому - зниження альбумінів і значне збільшення всіх глобулінових фракцій- в п`ятому - помірне зменшення альбумінів і збільшення у-і (3-глобулінов- в шостому - зниження альбумінів при сильному збільшенні у-глобулінової фракції, основа якої расшірено- в сьомому - зменшення альбумінів і помірне збільшення СС2-, Р- і у-глобулінов- в восьмому - загальний білок різко підвищений, альбуміни і більшість глобулінів знижені, в залежності від виду більше збільшені у-або в-гло - булинь.
У грудних дітей спостерігається фізіологічна недостатність біосинтезу у-глобулінів. Тому при інфекційних захворюваннях у них в- і а2 глобуліни підвищуються більш значно, ніж у дітей старшого віку і дорослих. Постійне підвищення у-глобулінів у дітей раннього віку може свідчити про септичномустані.
