Цитогенетичні методи дослідження - практичні навички педіатра
Відео: Практичні навички ТДМУ 2016 6 курс
Відео: Методи інструментального огляду ЛОР органів
З цитогенетичних методів для клінічної практики велике значення мають дослідження каріотипу і визначення статевого хроматину.
Дослідження каріотипу. Каріотип вивчають в культурі клітин, вирощеної in vitro. Для стимуляції переходу лейкоцитів в мітотичний стан застосовують фитогемагглютинин (2 краплі на 8-10 см3 периферичної крові, що вводиться в культуру). У фазі мітотичної активності клітин для фіксації хромосом матеріал обробляють колхіцином (в концентрації 50 * 10-9 М). Подальша обробка матеріалу гипотоническим розчином викликає набухання області ядра і сприяє розкидання хромосом в цитоплазмі, що полегшує вивчення їх числа і структури при мікроскопії. Каріотип досліджується зазвичай в спеціалізованій цитогенетичної лабораторії.
Визначення статевого хроматину. Статевий хроматин - це хроматиновой тільце в формі трикутника або полулуния, що знаходиться в ядрах різних типів клітин. Підстава трикутника або полулуния частіше розташовується на ядерній мембрані, а вершина або опуклість звернена до центру ядра. У осіб жіночої статі в клітинах епітелію слизової оболонки рота хроматин виявляється в 20-70% ядер, тоді як у чоловіків - від 0 до 5%.
Вважають, що статевий хроматин являє собою одну з Х-хромосом, що знаходиться у відносно неактивному стані (тільце Барра).
Мал. 17. Статевий хроматин (тільце Барра) позначений стрілкою.
Статевий хроматин легко виявляється при забарвленні будь-яким з основних ядерних барвнику. Його можна виявити в тканинах організму, клітинах шкіри, слизової оболонки рота, волосяних цибулин, крові та ін.
Найчастіше статевий хроматин визначають в клітинах слизової оболонки щоки. Для цього металевим шпателем роблять зіскрібок з внутрішньої поверхні щоки і отриманий клітинний матеріал тонким рівномірним шаром наносять на предметне скло. Для забарвлення мазка використовують одну краплю 1,5 або 2% розчину оцтовокислого ацетоорсеіна. Препарат накривають покривним склом, обережно фільтрувальної папером видаляють надлишок фарби, і через 2-3 хвилин препарат готовий для микроскопирования.
Для приготування розчину барвника беруть 1,5 або 1 г орсеїном і розчиняють в 45 мл крижаної оцтової кислоти. Розчин нагрівають до появи парів і додають 55 мл дистильованої води, після чого охолоджують і фільтрують.
Відео: Дослідження дихальних рухів
При відсутності орсеїном А. М. Захаров запропонував використовувати барвники тіозіновой групи: метиленовийсиній, АЗУР 1. Для забарвлення 20-50 мг одного із зазначених барвників розчиняють в 10 мл дистильованої води. Фарбування проводиться 2-3 краплями розчину.
Підрахунок статевогохроматину виробляють під мікроскопом марки МБІ-3 або МБІ-6 з імерсійними об`єктивами. Підраховують не менше 100 ядер, у яких рівні контури, гладка оболонка і статевої хроматин прилягає до ядерної оболонці (рис. 17).
Дослідження статевогохроматину (Х-хромосом) допомагає в діагностиці таких хромосомних аномалій за статевими хромосомами, як синдроми Шерешевського-Тернера
(45 ХО), Клайнфельтера (47 XXY), трисомія X (47 XXX). Виявлене при дослідженні число статевогохроматину в ядрі клітини дозволяє судити про кількість Х-хромосом, яких завжди на одиницю більше, ніж виявлених тілець хроматину.
