Лабораторні тести - діагностика алергічних захворювань

Відео: Діагностика ектіми: ознаки (біль, температура) та лабораторна діагностика

Відео: Лабораторні тести. Помилки при проведенні та інтерпретації

IV. ЛАБОРАТОРНІ ТЕСТИ

ПРІСТ - прямий радіоіммуносорбентний тест
Тест для визначення загального IgE в сироватці крові. Використовують техніку, при якій нерозчинні Імуносорбенти з "пришитими" антіIgЕ-антитілами протягом 16 годин инкубируют або зі стандартом, або з досліджуваної сироваткою. Потім незв`язані IgE-антитіла сироватки видаляють відмиванням, після чого протягом 2-4 годин инкубируют з міченими 125J aнтіIgE-антитілами. Незв`язані 125J антіIgЕ антитіла знову видаляють відмиванням. За пов`язаної радіоактивності визначають кількість загального Ig E.
Радіоактивне мічення ізотопом 131J, а останнім часом все частіше 125J - це багаторазово перевірений і надійний метод. Однак через те, що необхідні в цьому випадку реагенти небезпечні для здоров`я і нестабільні в результаті радіоактивного розпаду, були запропоновані й інші типи міток.
Успішно застосовують ферменти, зокрема пероксидазу і фосфотазу, які при додаванні до реагує компонентів відповідного безбарвного субстрату, званого хромогеном, впливають на останній з утворенням забарвлених продуктів реакції. На використанні ферментів заснований, зокрема, метод визначення антитіл, а іноді і антигенів, званий ELISA (від англ. Enzyme linked immunosorbent assay) - твердофазний імуноферментний аналіз - ІФА.
Прямий метод виявлення специфічних Ig Е-антитіл:
Радіоаллергосорбентний тест (PACT)
Використовують для кількісної оцінки антигенспецифических Ig Е-антитіл.
Принцип методу: вміст специфічних Ig Е антитіл в сироватці можна встановити, використовуючи їх здатність зв`язуватися з антигеном (алергеном), що знаходяться на нерозчинному сорбенте-носії. Якщо у використовуваній сироватці містяться відповідні антитіла, то після інкубації вони взаємодіють з алергенами.
Незв`язані антитіла сироватки видаляють шляхом відмивання і залишився комплекс инкубируют з Ig Е-антитілами, міченими 125J.
У тому випадку, якщо раніше (на 1 етапі реакції) відбулося зв`язування реагинов з алергенами, то молекули 125J aнтіIgE взаємодіють з цими реагинами. Незв`язані 125J aнтіIg E видаляють відмиванням.
Кількість антигенспецифических антитіл визначають по пов`язаної радіоактивності, використовуючи відповідні стандарти.
Переваги PACT в порівнянні з шкірними пробами:
хворий витрачає менше часу на дослідження- на результати не впливають прийняті лікарські препарати-виконання тесту не пов`язане з ризиком розвитку у хворого анафілаксіі- є можливість кількісної оцінки.
Недоліки PACT: чи не виявляє інших антитіл-реагинов, крім IgE.
Примітка:
PACT добре корелює з іншими пробами, особливо провокаційними. У порівнянні з внутрішньошкірним пробами PACT є менш чутливим, але більш специфічним, тобто практично не дає хибнопозитивних результатів PACT кращий у дітей до 5 років, у яких шкірні проби непрактичні, у хворих екземою, яким вони протипоказані і при патологічному дермографізму, коли результати проб хибнопозитивні.
Імуноферментний аналіз (ІФА)
ІФА може бути використаний для кількісної оцінки загального Ig E в сироватці крові. Метод заснований на принципі "сандвіча". До сорбованих на твердій фазі антіIgE-антитіл додають випробувану пробу сироватки, інкубують, відмивають. Потім сюди ж вносять кон`югат антіIgЕ-антитіл з ферментом в розрахунку на те, що цей кон`югат може зв`язатися з другим вільним активним центром IgE-антитіл, які перебувають у складі імунних комплексів на твердій фазі. Потім стадії інкубації і відмивання, після чого вносять субстрат (хромоген), відповідний використаному ферменту. Про перетворення субстрату свідчить зміна кольору в лунці або в пробірці з твердою фазою, причому фарбування відбувається тільки при наявності в складі сендвіч-комплексів на твердій фазі, а відповідно і в досліджуваній сироватці крові імуноглобуліну E. Інтенсивність кольорової реакції оцінюють спектрофотометрически щодо позитивної та негативної контрольних проб.

Відео: Діагностика алергії у дітей. Алергоцентр, алерголог, аналіз на алергени в Одесі. Гермедтех

V. ЛІТЕРАТУРА

1. Приватна алергологія // Під ред. Адо А.Д. М .: Медицина, 1976. -512 с.
2. Цибулькин В Н. Провокаційні проби при алергічних захворюваннях. Методичні рекомендації для лікарів-курсантів // Казань, 1984 - 19 з
3. Ліберман Ф, Кроуффорд Л. Лікування хворих на алергію. - Переклад з англійської // М .:
Медицина, 1986 - 392 з
4. Зисельсон АТ Поліноз у дітей // Л. Медицина, 1989 - 160 с.
5. Соколова Т С, Рошаль Н І Алергічні захворювання // Л. Медицина, 1990 -160 с.
6. Клінічна імунологія та алергологія // Під. ред Л. Йегера. М .: Медицина, 1990. - с.
7. До А Лебедєв, І.Д.Понякіна. Іммунограмма в клінічній практиці // М .: Наука, 1990. - 224