Діагностика токсоплазмозу

Для діагностики токсоплазмозу необхідно виділити Т. Gondii з крові або інших біологічних рідин або виявити тахізоіти в секретах або препаратах тканин і біологічних рідин, цисти - в плаценті або тканинах плода або новонародженого, а також характерні гістологічні зміни лімфатичних вузлів. Також інформативні серологічні дослідження.

Культуральний і мікроскопічний методи діагностики токсоплазмозу

Біорідини, лейкоцити або біоптати вносять в культури клітин або заражають ними мишей. Біорідини необхідно обробляти і вводити тварині негайно, хоча Т. Gondii була виділена з тканин і крові, які зберігалися при температурі 4 ° С протягом ночі. Заморожування або обробка формаліном вбивають Т. gondii. Перитонеальну рідину миші досліджують на тахізоіти через 6-10 діб після зараження або раніше, якщо тварина загинула. Якщо миша залишається живий 6 тижнів і в крові у неї виявляються антитіла, досліджують головний мозок миші на цисти. Якщо цист не виявлено, тканини даної миші вводять інший миші.

При мікроскопічному дослідженні культури клітин, в яку була внесена Т. gondii, виявляються загиблі і живі клітини, а також безліч позаклітинних тахізоітов. Виділення токсоплазми з крові або інших біорідин свідчить про гостру інфекцію. Виділення токсоплазми з поперечносмугастих м`язів, тканин легенів, головного мозку, очі (отриманих прижиттєво або при аутопсії) плода та новонародженого зазвичай не дозволяє відрізнити гостру хворобу від перенесеної.

Діагноз гострої інфекції можна поставити за наявністю тахізоітов в біоптатах, аспіратах кісткового мозку або біологічних рідинах, таких як СМЖ або амніотична рідина. У звичайних препаратах тахізоітов зазвичай важко виявити, тому часто потрібні иммунофлюоресцентное або імунопероксидазному фарбування. Тканинні цисти підтверджують діагноз токсоплазмозу, проте не дозволяють відрізнити гостру патологію від хронічної, але наявність безлічі цист свідчить про недавню гострої інфекції. Цисти в тканинах плаценти або новонародженого підтверджують діагноз вродженого токсоплазмозу. Характерна гістологічна картина високоспецифічні для токсоплазмозного лімфаденіту.

Серологічні методи діагностики токсоплазмозу

Для підтвердження діагнозу вродженого або гострого набутого токсоплазмозу може знадобитися цілий ряд серологічних методик. У кожній лабораторії, яка займається серологічними дослідженнями, повинні бути підтверджені результати її досліджень, які ставлять діагноз інфекції в певних клінічних умовах, і забезпечений адекватний контроль якості, перш ніж почнеться лікування. Результати серологічних досліджень, які використовуються в якості основи для лікування, повинні бути підтверджені в спеціалізованій лабораторії.

Реакція Сейбіна-Фельдма начувствітельна і спеціфічна- в ній переважно визначаються антитіла IgG. Результати повинні виражатися в МО / мл, заснованих на міжнародних стандартних препаратах, що надаються ВООЗ.

Метод непрямої імунофлюоресценції з IgG виявляє ті ж антитіла, що і реакція Себіна-Фельдмана, титри в обох реакціях паралельні. Дані антитіла зазвичай з`являються через 1-2 тижні. після зараження, через 6-8 тижнів. досягають високого титру (gt; 1: 1000), потім знижуються протягом місяців. Низькі титри (1: 4-1: 64) зазвичай зберігаються довічно. Титр антитіл не відповідає тяжкості захворювання. Приблизно 50% наборів для визначення антитіл до Т. Gondii методом непрямої імунофлюоресценції неправильно стандартизована і може давати значне число хибнопозитивних і помилково негативні результати.

У наборі для реакції аглютинації (Bio-Merieux, Ліон, Франція), що продається в Європі, для виявлення антитіл IgM використовуються Цілісні паразити, консервовані формаліном. Даний тест точний, простий у використанні і недорогий.

Метод непрямої імунофлюоресценції з IgM інформативний в діагностиці гострого токсоплазмозу у старших дітей, оскільки антитіла IgM з`являються раніше (часто до 5-го дня від початку інфекції) і зникають швидше, ніж антитіла IgG. Найчастіше титр антитіл, визначений цим методом, швидко наростає (від 1:50 до 1: 1000), а через кілька тижнів падає (1:10 або 1:20) або реакція стає негативною. Однак у окремих хворих низькі титри зберігаються до кількох років. При природженому токсоплазмозі метод непрямої імунофлюоресценції виявляє антитіла IgM на момент народження лише приблизно у 25% дітей. Антитіла IgM часто відсутні в сироватці крові при гострому токсоплазмозі на тлі імунодефіциту, крім того, дані антитіла відсутні у більшості хворих з активним токсоплазмозом, що вразила лише очі.

ELISA з методом «подвійного сендвіча» - більш чутливий і специфічний метод виявлення антитіл IgM, ніж метод непрямої імунофлюоресценції. У старших дітей рівень антитіл проти Т. Gondii 2 і більше (показник однієї із спеціалізованих лабораторій- кожна лабораторія повинна виробити свої власні норми) з великою ймовірністю вказує на нещодавнє зараження. ELISAна IgM виявляє приблизно 75% немовлят з вродженим токсоплазмозом. ELISA, на відміну від методу імунофлюоресценції, не дає хибнопозитивних результатів при ревматоїдному факторі, а також помилково негативні результати від високих титрів материнських антитіл IgG в сироватці. Результати, отримані за допомогою наявних у продажу наборів, повинні інтерпретуватися з обережністю через високу частоти помилково негативні результати. Необхідно також переконатися, що даний набір стандартизований для застосування в певних клінічних умовах (наприклад, у новонароджених). При природженому токсоплазмозі у плода та новонародженого, а також при гострому токсоплазмозі у вагітних ELISA на IgA більш чутливий, ніж ELISA на IgM.

У методі аглютинації іммуносорбентафіксація IgM хворого на твердій поверхні поєднується з використанням фіксованих формаліном Т. Gondii або покритих антигеном частинок латексу. Результат читається як в реакції аглютинації. Аглютинація імуносорбенту не дає хибнопозитивних результатів і антинуклеарних антитіл. Антитіла до Т. Gondii класу IgM виявляються методом імунофлюоресценції швидше, ніж ELISA. Метод аглютинації імуносорбенту перевершує по чутливості ELISA на IgM і може виявляти антитіла IgM раніше і протягом більш тривалого часу, ніж ELISA. В даний час визначення IgM методом аглютинації імуносорбенту - кращий спосіб діагностики вродженого токсоплазмозу. При природженому токсоплазмозі, гострому придбаному токсоплазмозі також інформативно визначення антитіл IgE за допомогою ELISA або методу аглютинації імуносорбенту.

У методі диференціальної аглютинації титри антитіл проти тахізоітов, фіксованих формаліном (антиген HS), порівнюються з титрами антитіл проти тахізоітов, фіксованих ацетоном або метанолом (антиген АС), - це дозволяє розрізнити недавню і давню інфекцію у дорослих і дітей старшого віку. Даний метод особливо підходить для підтвердження недавно перенесеного токсоплазмозу у вагітних, оскільки титри антитіл IgM і IgA, певні ELISA і методом аглютинації імуносорбенту, метуть довго залишатися підвищеними (у дорослих і дітей старшого віку - до декількох років).

Щоб довести, що гостра інфекція почалася не більше 12-16 тижнів. тому, використовується проба на авідність (висока авідність свідчить про вищезгадану давності).

Відео: Пренатальна діагностика, токсоплазмоз

В реакції непрямої гемаглютинації визначаються антитіла до Т. gondii, що відрізняються від виявлених методом імунофлюоресценції і реакцією Сейбіна-Фельдмана. Ці антитіла можуть зберігатися роками. Однак реакцію непрямої гемаглютинації не слід використовувати у грудних дітей з підозрою на вроджений токсоплазмоз і для масового обстеження жінок на токсоплазмоз, набутий під час вагітності, оскільки на ранніх стадіях дана реакція може довго залишатися негативною.

Щодо більш високий титр антитіл до Т. Gondii в рідкої вологи або СМЖ вказує на місцеве утворення антитіл під час активного токсоплазмозу очі або ЦНС.

Антиген Т. Gondii виявляється тільки під час гострого токсоплазмоза- в сироватці крові здорових і хронічних хворих його немає. Антиген присутній в сироватці, амніотичної рідини та спинномозковій рідині незначного числа немовлят з вродженим токсоплазмозом.

Вроджену інфекцію можна діагностувати за допомогою порівняльного вестерн-иммуноблоттинга сироваток матері і дитини. Якщо в сироватці матері і сироватці дитини містяться антитіла, що реагують з різними антигенами Т. gondii, це дозволяє припустити вроджений токсоплазмоз.

Іммунофільтраціоний аналіз, в якому використовуються мембрани з мікропорами, дозволяє одночасно вивчити специфічність антитіл за допомогою иммунопреципитации і охарактеризувати ізотипи антитіл за допомогою іммунофільтраціі з антитілами, міченими ферментом. Даний метод може виявити 85% випадків вродженого токсоплазмозу в перші дні життя. Вивчення даного методу триває.

ПЛР використовується, щоб ампліфікувати ДНК Т. gondii, яку потім виявляють за допомогою ДНК-зондів. Визначення в амніотичної рідини повторюваного гена Т. Gondii - В1 служить найкращим методом діагностики вродженого токсоплазмозу у плоду. Чутливість і специфічність даного методу при аналізі амніотичної рідини, отриманої на 18-му тижні вагітності і пізніше, складають близько 95%. Для діагностики токсоплазмозу очей при змінювалася ПЛР з рідиною склоподібного тіла.

Реакція бласттрансформації лімфоцитів у відповідь на антигени Т. Gondii використовувалася для діагностики вродженого токсоплазмозу у випадках коли інші методи дослідження давали негативний результат, а підозра на токсоплазмоз зберігалося. Але негативний результат не дозволяє виключити токсоплазмоз, оскільки багато інфіковані новонароджені не реагують на антигени Т. gondii.

набутий токсоплазмоз

Доказами недавньої інфекції служать сероконверсия (поява антитіл IgG), якщо виключено введення антитіл при переліваніі- послідовне (у двох пробірках) підвищення титру антитіл до Т. Gondii класу IgG, якщо сироватки були взяті з інтервалом в 3 тижні. і досліджувалися паралельно-присутність антитіл до Т. Gondii класу IgM.

токсоплазмоз очей

Відео: Як лікувати токсоплазмоз народний спосіб

У хворих з активним токсоплазмозним хоріоретінітом титр антитіл IgG зазвичай становить від 1: 4 до 1:64. Правильна діагностика можлива, якщо ураження сітківки характерне, а результати серологічних досліджень позитивні. Для діагностики токсоплазмозу очей застосовувалася ПЛР з рідиною склоподібного тіла, проте цей метод використовувався рідко через небезпек, пов`язаних з отриманням матеріалу.

Токсоплазмоз на тлі порушень імунітету

Відео: Токсоплазмоз діагностика і лікування

У цих хворих титр антитіл IgG може бути низьким, а антитіла IgM нерідко відсутні. Діагностиці дисемінованого токсоплазмозу допомагає виявлення антигенів Т. Gondii в сироватці, крові та спинномозковій рідині.

У хворих на СНІД діагностично значущим є дозвіл вогнищ в ЦНС під час лікування ex juvantibus піриметаміном і сульфадіазоном. При відсутності реакції на лікування ex juvantibus, а також для виключення інших захворювань застосовувалася біопсія головного мозку.

природжений токсоплазмоз

Для пренатальної діагностики застосовується УЗД плода, яке повторюють кожні 2 тижні., а також ПЛР з амніотичної рідиною. Крім того, Т. Gondii можна виділити з плаценти.

При природженому токсоплазмозі кращі методи діагностики серологічні. Для постановки Діагнозу необхідне збереження або наростання титрів в реакції Сейбіна-Фельдмана, методі імунофлюоресценції або виявлення IgM за допомогою ELISA або аглютинації імуносорбенту. Період напіввиведення IgM складає 3-5 діб, отже, якщо мало місце проникнення цих антитіл через плаценту, їх рівень в сироватці крові дитини істотно знизиться протягом 1-2 тижнів. Пасивно придбані антитіла IgG зникають лише через кілька місяців або рік залежно від величини початкового титру. Синтез антитіл до Т. Gondii зазвичай стає показовим до 3-го місяця життя, якщо дитина не отримує лікування. У лікувалися дітей синтез може затримуватися до 9-го місяця життя або, зрідка, його може не бути. Коли у дитини починається синтез специфічних антитіл, токсоплазмоз можна підтвердити серологічно навіть без виявлення антитіл IgM. Діагноз ставлять по зростанню відносини титру специфічних антитіл до загальної кількості IgG- якщо ж дане відношення знижується, значить, специфічні антитіла були материнськими.

Якщо при народженні запідозрений вроджений токсоплазмоз, необхідно провести фізикальне обследованіе- офтальмологічне та неврологічне дослідження-КТ голови-спробувати виділити Т. Gondii з плаценти і лейкоцитів дитини (використовується пуповинна кров і лейкоконцентрате) - визначити титр антитіл до Т. Gondii класів IgG, IgM, IgA і IgE в сироватці крові-визначити загальну кількість IgM і IgG в сиворотке- виконати люмбальна пункція з визначенням в спинномозковій рідині кількості клітин, глюкози, білка, антитіл до Т. Gondii класів IgG та IgM і загальної кількості IgG- досліджувати спинномозкову рідину на геном Т. gondii методом ПЛР і виконати біологічну пробу з СМЖ на мишах. Наявність в спинномозковій рідині антитіл до Т. gondii класу IgG (якщо СМЖ не забруднена кров`ю) або місцеве утворення антитіл в спинномозковій рідині антитіл до Т. Gondii класу IgG підтверджують діагноз вродженого токсоплазмозу.

Диференціальна діагностика. Симптоми, схожі з проявами вродженого токсоплазмозу, властиві багатьом хворобам перинатального періоду, особливо вродженої ЦМВ-інфекції. Ні внутрішньочерепні кальцинати, ні хориоретинит не є патогномонічними. Серологічні критерії вродженого токсоплазмозу є менш ніж у 50% дітей з хоріоретінітом до 5 років причини більшості інших випадків невідомі. Клінічна картина у новонародженого також може відповідати сепсису, серозного менінгіту, сифілісу або гемолітичної хвороби.