Методичні аспекти діагностики урогенітального хламідіозу

Матеріалом для дослідження на присутність хламідій в зразках можуть бути зіскрібки епітеліальних клітин з уретри і цервікального каналу, секрет передміхурової залози, еякулят, сеча, зіскрібки з кон`юнктиви ока та задньої стінки глотки.

Забір досліджуваного матеріалу проводиться в пластикові стерильні пробірки типу «Еппендорф» одноразовим стерильним зондом, на одному кінці якого знаходиться ватний тампон, або синтетичні ворсинки, що володіють підвищеними сорбційними властивостями, або спеціальною щіточкою cervex-brush або voba-brush. З огляду на особливості тропізму хламідій до циліндричного епітелію, забір матеріалу беруть на глибині 1,5-2 см. У жінок в цервікальному каналі та уретрі, у чоловіків в передній уретрі, ближче до човноподібної ямці на глибині 3-4 см у чоловіків. Зішкріб епітеліальних клітин з заборонених місць поміщають в пробірку, заповнену стерильним фізіологічним розчином. Біологічний матеріал поміщають до дослідження в холодильник при температурі + 4 ° С

Методика забору епітеліального зіскрібка з уретри чоловіків. Головку статевого члена в області зовнішнього отвору уретри обробляють ватним тампоном, змоченим в фізіологічному розчині. При наявності рясних виділень перша крапля, яка містить слиз і лейкоцити видаляється. При мізерних виділеннях або їх відсутностей проводять масаж уретри. Потім звільняється головка статевого члена від крайньої плоті методом зсуву останньої в сторону кореня статевого члена. Пацієнт сам фіксує руками статевий орган в області вінцевої борозни 1-м і 3-м пальцями, витягаючи член злегка вперед, а вказівними пальцями злегка розводить губки уретри. Така фіксація статевого члена дозволяє з найменшою травматизацією ввести зонд в уретру. Далі вводять зонд на глибину 3-4 см і обертальними рухами збирають епітелій зі слизової уретри.

Після забору матеріалу зонд опускають в пластикову пробірку, що містить 300 мкл стерильного фізіологічного розчину, ретельно перемішують, залишки рідини на зонді віджимають об стінки пробірки, зонд витягують і викидають в контейнер з дезинфікуючим розчином.

Методика забору секрету передміхурової залози.

при заборі секрету простати рекомендується статеве утримання протягом 2-х діб до дослідження. Забір соку простати проводиться відразу після сечовипускання і видалення останньої краплі сечі з каналу сухою стерильною серветкою. Головка статевого члена звільняється від крайньої плоті. Забір секрету виконується за класичною методикою з допомогою трансректального масажу залози. Пацієнт приймає колінно-ліктьове положення. Вказівний палець правої руки в рукавичці або презервативі, змащеному вазеліном вводитися в ампулу прямої кишки, пацієнт при цьому натуживается як при акті дефекації. Досягнувши пальцем передміхурової залози, лікар пропонує пацієнту розслабитися. У такому положенні проводиться масаж залози: по черзі натискаючи на ліву і праву частки залози протягом 5-10 секунд, виконуючи рух по вісімці 2-3 рази. Цього достатньо для відходження секрету залози. При відсутності краплі з каналу, робилося додатково два або три масажних руху в глибині промежини біля кореня статевого члена, уникаючи при цьому масажувати саму уретру. Такий спосіб забору виключає контамінацію секрету передміхурової залози уретральним вмістом. Після закінчення масажу передміхурової залози сік у вигляді вільно стікала краплі збирають в одноразову пробірку типу "Еппендорф ».

Забір першої порції ранкової сечі. Достаточно інформативним є дослідження у чоловіків осаду першої порції ранкової мочіметодом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР), особливо в разі утруднення в зборі секрету передміхурової залози. Для аналізу відбирається перша порція ранкової сечі в кількості 10-50 мл в спеціальний флакон або пробірку без консервирующего розчину і доставляється в лабораторію. До дослідження зразок зберігається в холодильнику при температурі + 4 ° С не більше 12 годин.

забір еякуляту. Попередньо пацієнт утримується від статевих контактів протягом 4-х діб. Необхідно вимити руки, головку статевого члена обробити стерильним фізіологічним розчином. Еякулят отримують методом мастурбації. Безпосередньо перед еякуляцією крайня плоть (при її наявності) пережимається, в результаті чого сперма заповнює порожнину препуціума. Еякулят «масажними» рухами перемішують при закритому отворі препуціального мішка (чим забезпечується гомогенність досліджуваного матеріалу) і в кількості 0,1 - 0,5 мл (в залежності від використаного набору для виділення ДНК) поміщають в одноразову пробірку типу "Еппендорф". Забір еякуляту для дослідження на УГИ доцільний при хронічних епідидимітах, патоспермії, а також при відсутності можливості забору секрету простати (оскільки останній є одним з компонентів сперми).

Самим інформативним матеріалом при обстеженні на хламідії чоловіків з урогенітальною патологією виявилася саме сперма, а не секрет простати і не уретра. Цей матеріал інтегрує компоненти практично з усіх чоловічої статевої системи: передміхурової залози, канальців яєчка, сім`яних пухирців, купферови залоз і т.д. Проходячи (в момент еякуляції) з високою швидкістю по уретрі, сперма «змиває» клітини призматичного епітелію, перш за все пошкоджені, уражені хламідіозом. Навіть невеликої кількості таких клітин при високій чутливості ПЛР досить для отримання позитивного результату.

Забір біологічного матеріалу з уретри у жінок. Жінки утримуються від сечовипускання протягом 3-х годин перед взяттям зразка. При наявності рясних виділень, зовнішній отвір уретри необхідно обробити тампоном, змоченим стерильним фізіологічним розчином. Одноразовий зонд вводять в уретру на глибину 2 см, з огляду на меншу протяжність уретрального каналу у жінок, в порівнянні з чоловіками. Обертовими рухами зонда протягом 3-5 секунд збирають уретральний епітелій і поміщають в одноразову пробірку типу «Еппендорф», ретельно змивають матеріал з зонда протягом 15 секунд. Далі віджимають рідина з зонда об стінку пробірки, зонд видаляють і дезінфікують. Пробірку закривають.

Забір біологічного матеріалу з цервікального каналу жінок. З екзоцервікса ватним тампоном і пінцетом видаляють слиз, а потім беруть матеріал. Зонд вводять в ендоцервікальную канал на глибину 1,5 см. І обертальними рухами протягом 3-5 секунд, уникаючи контакту з вагінальними поверхнями, виробляють зішкріб з усією поверхні шийки матки, цервікального каналу, захоплюючи зони трансформації.

Зонд поміщають в пробірку, ретельно змивають матеріал протягом 15 секунд, віджимають рідина з зонда об стінку пробірки, надлишок слизу видаляють зондом, зонд дезінфікують. Пробірку закривають.

Забір матеріалу з задньої стінки глотки. Обертовими рухами зонда по слизової задньої стінки глотки протягом 3-5 секунд збирають матеріал зондом і поміщають його в пробірку, ретельно змиваючи матеріал протягом 15 секунд, віджимають рідина з зонда об стінку пробірки, зонд видаляють і дезінфікують. Пробірку закривають.

Забір зразків першої порції ранкової сечі (ППУМ). Збирають першу порцію ранкової сечі в чисту пластиковий посуд в кількості 10 -50 мл і доставляють в лабораторію.

Дослідження показали, що сечу можна використовувати для виявлення С. trachomatis ампліфікаціонних методами навіть через 1 тиждень після її зберігання при кімнатній температурі. Проте, краще до моменту доставки в лабораторію зберігати сечу в холодильнику при + 4 ° С.

Забір матеріалу з кон`юнктиви. Зішкріб епітелію з кон`юнктиви верхньої і нижньої повіки беруть одноразовими зондами. Можливе використання затупленого очного пінцета або ложки Фолькмана.
З огляду на особливості біологічного розвитку C.trachomatis, а саме те, що вони розмножуються всередині клітин циліндричного і плоского епітелію, а також особливості технології проведення полімеразної ланцюгової реакції, розроблені

загальні вимоги до якості біологічного матеріалу для дослідження їх методом ПЛР:

1. Біологічний матеріал зі слизових повинен містити якомога більше епітеліальних клітин. Відсутність епітелію в зразку може викликати помилково негативні результати. Оптимальним для персистенції і розмноження збудників ІПСШ є певні ділянки циліндричного епітелію сечостатевих шляхів (передня уретра на глибині 2,5-4 см у чоловіків і слизова оболонка цервікального каналу матки 1,5 см у жінок).

2. Зразки, отримані разом з зондом в пробірці, з присутністю великої кількості слизу і крові не бажані для тестування. Важливим моментом при заборі матеріалу є очищення слизової від рясних виділень (слизової пробки в цервікальному каналі та уретрі у жінок, виділень різного характеру в уретрі чоловіків). Недостатнє видалення слизу і домішки крові в зразку можуть викликати пригнічення полімеразної ланцюгової реакції, що призведе до зниження чутливості методу або навіть помилково негативні результати.