Виділення хламідій - хламідійна інфекція в акушерстві та гінекології
Відео: Хламідіоз у жінок симптоми
Виділення хламідій в культурі клітин
Для взяття матеріалу використовуються спеціально призначені тампони - окремо для уретри і цервікального каналу. Матеріал поміщається в пробірку з транспортним середовищем. Пробірки та середовища, не призначені для транспортування зразків, можуть бути токсичними для клітин, а це може привести до помилково негативні результати. Транспортне середовище можна зберігати при кімнатній температурі 1 день, при 4 ° С -місяць, при -20 ° С - 4 місяці.
Взятий матеріал слід зберігати при 4-6 ° С і протягом 24 годин направити в лабораторію, обклавши проби льодом. Дослідження вимагає збереження живих хламідій, тому важливо дотримуватися температурного режиму доставки матеріалу.
Використовуються клітинні лінії McCoy, L-929, HeLa-920. Лінії клітин пересівають зазвичай через 5-7 днів, на 3-4 добу змінюють середу. Клітини зі скла знімають розчином версія або трипсину (0,02% і 0,25% відповідно). Суспензію клітин для вирощування моношару на покривному склі готують густотою 2,0x10 і вносять її в плоскодонні пробірки з поміщеним на дно покривним склом. Можна застосовувати для цієї мети пластикові мікропанелі з плоскодонними лунками. Моношар формують у вертикальному положенні пробірок при 37 ° С протягом 24 годин.
Після видалення живильного середовища вирощені клітини заражають інфекційним матеріалом з транспортної середовища в обсязі 0,5 мл і центрифугують в центрифузі з горизонтальним ротором при 2500 об. / Хв протягом 1 години. Після цього інокулят видаляють, в пробірки або лунки вносять підтримуючу середу 199 з 5% сироватки великої рогатої худоби або сироватки плодів корів, 5% розчину глюкози. 0,9-1,0 мкг / мл циклогексаміду, а також антибіотики (100 мкг / мл гентаміцину, 100 мкг / мл ванкомицина і 25 мкг / мл амфотерицину В).
Через 48 годин після зараження покривні скла з монослоем витягують з пробірок, підсушують на повітрі і фіксують в холодному ацетоні. Подальші дії повністю відповідають обробці препаратів для пряма імунофлюоресценція.
Перегляд препаратів в люмінесцентному мікроскопі дає можливість побачити яскраво-зелені внутрішньоклітинні мікроколонії хламідій на помаранчевому тлі цитоплазми.
При малій кількості елементарні тільця в досліджуваному матеріалі термін інкубації заражених культур збільшують до 3-5 днів, в деяких випадках роблять пасажі, т. Е. Зараження свіжих культур рідкою фазою і клітинами первинної культури. Діагностичні лабораторії рідко використовують пасажі через надмірне затягування у видачі відповіді.
метод виділення С. trachomatis в культурах клітин високо чутливий і специфічний, тільки він дозволяє виявити життєздатних збудників. Однак і цей метод в 10-15% випадків може дати хибно-негативний відповідь.
Результат аналізу видається через 5-7 днів. Варіанти видачі відповіді при культуральної діагностики: "Культуральним методом виділені С. trachomatis", "культуральним методом С. trachomatis не виділені", "Дослідження повторити через цитопатичної дії".
