Додаток - криптоспоридіоз і віл-інфекція
Відео: ВІЛ - вихід є !!! Зміцнення імунітету Трансфер фактором!
Лабораторна діагностика криптоспоридіозу
I. Що підлягають обстеженню контингенти:
1. Хворі з довгостроково зберігається синдромом.
2. Пацієнти інфекційних кишкових стаціонарів.
3. Хворі на ВІЛ-інфекцію з ознаками кишкової дисфункції.
4. Особи, які контактували з хворими криптоспоридіоз і раніше перехворіли (реконвалесценти).
II. Досліджувані матеріали:
1. Фекалії хворих.
2. Блювота.
3. Сльози і лаважной рідини (при підозрі на криптоспоридіоз органів дихання).
Фекалії збирають в суху чисту добре укупорену тару і доставляють в лабораторію. Ооцисти зберігаються в калі порівняно довго. Якщо передбачається тривале зберігання матеріалу, то використовують консерванти (10% формалін, рідина Барбагалло, 2,5% розчин біхромату калію). Консервант змішують з фекаліями в співвідношенні 2: 1 і добре перемішують. Зберігають в холодильнику при + 4 ° С. Ооцисти в 2,5% розчині біхромату калію зберігають життєздатність протягом року.
У клінічно маніфестних випадках криптоспоридіозу в забарвлених мазках фекалій виявляється значна кількість ооцист. При обстеженні контактних осіб та реконвалесцентів, т. Е. При свідомо низькою концентрації ооцист у фекаліях, використовуються методи збагачення - флотація і седиментация.
III. Приготування і забарвлення мазків фекалій:
На предметне скло наносять невелику кількість фекалій і рівномірно розмазують тонким шаром. При необхідності до грудочки фекалій можна додати 1-2 краплі фізіологічного розчину. Мазок висушують на повітрі і фіксують в суміші Нікіфорова (суміш рівних частин ефіру і 96 ° етилового спирту) протягом 10-15 хвилин, після чого знову висушують на повітрі і забарвлюють, потім піддають мікроскопії.
I. Фарбування карболовим фуксином за Цілем-Нільсеном:
Фіксування мазок швидко провести 3-5 разів над полум`ям пальника. Фарбувати розчином карболфуксіна 5-20 хвилин. Склад розчину: фуксин основний - 2 г, 96 ° етиловий спирт-12 мл, фенол - 5 мл, дистильована вода - до 100мл (фуксин розчинити в спирті, фенол-з воді, потім злити разом).
Промити мазок водопровідною водою, знебарвити 7% (5-10%) розчином сірчаної кислоти протягом 20-60 сек. промити в воді і підфарбувати протягом 5 хв 5% розчином малахітового зеленого в 10% етиловому спирті або 0,2% водним розчином метиленового синього. Промити в воді, ретельно висушити на повітрі і досліджувати під мікроскопом з иммерсией.
Результати. Ооцисти криптоспоридий фарбуються в різні відтінки яскраво-червоного кольору і мають вигляд округлих утворень діаметром до 5 мкм. Всередині деяких ооцист вдається розглянути подовжені спорозоїти. Супутня мікрофлора забарвлюється в зелений колір.
Примітки: У червоний колір можуть фарбуватися краплі жироподібних речовин і гранули детриту. Навіть при випадковому схожості за розмірами ці освіти легко відрізнити від ооцист криптоспоридий по відсутності у них виразною оболонки і будь-якого структурованого вмісту всередині. У сумнівних випадках серійні мазки слід забарвити іншим методом. При необхідності можна зменшити концентрацію малахітового зеленого (підбирається досвідченим шляхом). Фарбування за Цілем-Нільсеном можна виробляти і без попередньої фіксації мазків.
Відео: Міжнародний день боротьби з ВІЛ інфекцією та СНІД. Рязань 01.12.2014. ЦЕ ЦІКАВО
Даний метод вважається одним з найбільш інформативних і надійних для виявлення ооцист криптоспоридий.
Фарба не вицвітає багато місяців.
2. Фарбування сафранін по Кестеру.
Мазок, висушений на повітрі, фіксувати в суміші Нікіфорова, знову висушити при кімнатній температурі, фіксувати над полум`ям пальника. Фарбувати в розчині сафраніну 5 хв. (Водний насичений розчин сафраніну - 2 частини, 5,6% розчин КОН - 5 частин). Після ополіскування водою диференціювати 10 сек. в 0,1% розчині сірчаної кислоти, пробути у воді і фарбувати в 5% розчині малахітового зеленого (див. вище) 10-15 сек. Промити в воді, ретельно висушити на повітрі і досліджувати під мікроскопом з иммерсией.
Результати: Ооцисти криптоспоридий фарбуються в блідо-рожевий колір і добре виділяються на зеленому тлі. Інші мікроорганізми не фарбуються сафранін.
Примітка: Цей метод вважається одним з найбільш точних при виявленні ооцист криптоспоридий, дозволяючи найбільш чітко бачити внутрішнє, вміст ооцист (спорозопти). Фарба нестабільна, препарати швидко вицвітають і непридатні для тривалого зберігання.
3. Фарбування АЗУР-еозином за Романовським-Гімзою.
Цей широко поширений метод фарбування мазків крові може бути успішно застосований і при виявленні ооцист кріптоспородій. У ряді випадків він досить інформативний, оскільки при адекватній попередній підготовці мазка барвник проникає всередину ооцисти і забарвлює спорозоїти.
Мазок, фіксований сумішшю Никифорова і ретельно висушений на повітрі, швидко узгодить над полум`ям пальника (3-5 швидких рухів). Фарбувати 10% розчином барвника від 10 до 35-40 хв. Ретельно промити в воді (краще в проточній водопровідній), висушити на повітрі (можна в струмені холодного повітря під феном) і досліджувати під мікроскопом з иммерсионной системою.
Відео: Препарати для лікування ВІЛ-інфікованих в ЮКО постачають за планом
результати: Ооцисти криптоспоридий мають вигляд нефарбованих або слабоокрашенних округлих утворень діаметром до 5 мкм. Всередині деяких ооцист вдається розглянути блідо-блакитні подовжені і злегка зігнуті тільця (спорозоїти) з червоними гранулами всередині. Спорозоїти розташовуються по периферії ооцисти, залишаючи її центральну частину порожній.
Примітка. Ідентифікація ооцист утруднена в зв`язку з тим, що інші мікроорганізми кишечника також забарвлюються АЗУР-еозином, причому значно інтенсивніше ооцист. У зв`язку з цим необхідно робити тонкі мазки, в яких накладення мікрофлори не "екранує» б останні від спостерігача. Пофарбовані препарати не вицвітають протягом багатьох місяців, придатні для тривалого зберігання.
