Виявлення аргірофільних волокон, елементів нервової системи - основи гістології
Виявлення аргірофільних (ретикулінові) волокон (фіксація -15% формалін)
Ретикулінові волокна імпрегніруются сріблом (сама назва «аргірофільні» говорить про спорідненість цих волокон до солей срібла). Після сріблення ретикулінові волокна набувають чорний або коричнево-чорний колір.
Для успіху імпрегнації при всіх способах сріблення зрізів необхідно точно дотримуватися прописи, а також чистоту реактивів і посуду. Необхідно мати окрему скляний посуд для імпрегнації. Кожен стаканчик або піпетку треба використовувати тільки для одних і тих же розчинів. Металеві прилади при сріблення вживати не можна.
Перед роботою посуд ретельно обробляють сумішшю біхромату калію з сірчаною кислотою, промивають в проточній воді протягом 1 год і обполіскують дистильованою водою. Після роботи посуд також ретельно миють і обполіскують дистильованою водою. Особливо уважно слід звертатися зі скляною паличкою для перенесення зрізів, якщо для кожного розчину немає спеціальної палички. Зберігати таку паличку треба в дистильованої воді і перед вживанням витирати і обполіскувати чистою дистильованою водою. Кристалічний нітрат срібла повинен бути абсолютно білим (срібло рожевого, сірого і чорного кольору непридатне до вживання).
Для приготування розчинів завжди користуються свіжої дистильованою водою.
робочі розчини
Розчин аміакати срібла. До знаходяться в посуді з притертою пробкою 10 мл 10% розчину нітрату срібла додають 2 мл 10% гідроксиду калію. В результаті утворюється темно-бурий осад гідрату оксиду срібла. Потім до цієї суміші, одночасно збовтуючи, додають по краплях концентрований розчин аміаку до тих пір, поки осад не зникне. Потім додаванням дистильованої води обсяг розчину подвоюють, фільтрують.
Розчин перманганату калію 1%.
Розчин метабісульфіту калію 2-3%.
Розчин железоаммоніевие квасцов 2% (придатні тільки прозорі лілові кристали).
Крім того, необхідно мати 10% розчин формаліну, 0,1% розчин хлориду золота, 1% розчин тіосульфату натрію.
техніка імпрегнації
Зрізи звільняють від парафіну, поміщають на 1-2 хв в розчин перманганату калію, а потім 5 хв промивають у водопровідній воді. Після цього зрізи переносять на 1 хв в розчин метабісульфіту калію (для знебарвлення) і потім знову промивають у проточній водопровідній воді протягом 5-10 хв.
Далі необхідно потримати зрізи 1 хв в 2 ° / о розчині железоаммоніевие квасцов і потім протягом 3-5 хв промити спочатку в водопровідній воді, а потім в двох порціях дистильованої води по кілька хв. Зрізи переносять в розчин аміакати срібла на 1 хв, після чого дуже швидко обполіскують дистильованою водою.
Потім зрізи на 5 хв поміщають в розчин формаліну, який розбавляють водопровідною водою в співвідношенні 1: 9, промивають водопровідною водою протягом 5 хв.
Після промивання зрізи відразу занурюють в розчин хлориду золота на 10 хв. Далі обполіскують їх дистильованою водою і для відновлення срібла занурюють на 1 хв в розчин метабісульфіту калію.
Наступна маніпуляція - приміщення зрізів в 1 ° 7о розчин тіосульфату натрію на 1 хв (не довше ніж!) Для фіксації. Після цього треба докладно вивчити промивання водопровідною водою. Проводять зрізи через спирти, ксилол і укладають в бальзам.
Результат. Ретикулінові волокна набувають інтенсивно чорний колір, колагенові коричневий або чорний, ядра клітин - коричневий колір.
Виявлення елементів нервової системи
Для виявлення елементів центральної і периферичної нервової системи зазвичай застосовують різні способи імпрегнації (сріблом, золотом, осмієм). Фарбувати тіла нервових клітин і їх відростки можна і метиленовим синім. Всі ці методи мають суттєвий недолік, що є емпіричними. Тому лаборанту завжди треба бути готовим до того, що навіть при строгому дотриманні всіх умов імпрегнації вона часто не дає бажаного результату. Тут мають значення багато факторів, які іноді важко врахувати (якість фіксації, реакція і якість води, властивості нервової тканини і т. Д.).
Існує багато модифікацій імпрегнації нервових клітин і волокон. Найбільш поширеним є метод Більшовского - Грос.
Фарбування хроматофільной речовини в цитоплазмі нервових клітин (грудочки Нісль) виробляють за методом, запропонованим Нісль. Мозкових оболонки нервових волокон забарвлюють за методом Шпільмейєра або осміруют. Елементи глії виявляють спеціальними методами:
1) методом Кахала (виявлення макрогліі) - 2) методом Білецького (виявлення мікроглії).
Крім зазначених методів, завжди треба паралельно фарбувати зрізи для оглядових цілей гематоксилин- еозином, що дозволяє побачити взаємовідносини нервових елементів з навколишніми тканинами. Нервові клітини можуть бути пофарбовані і іншими методами, вживаними в гістологічної техніки.
