Фарбування жирів і ліпідів, виявлення заліза - основи гістології

Термін «ліпіди» збірний. Їм позначають всі жироподібні речовини, що екстрагуються розчинниками жирів (бензин, ефір, хлороформ та ін.).
В основі методів фарбування лежать чисто фізичні процеси. Суть їх полягає в тому, що речовини, фарбувальні жири, добре в них розчиняються і тому легко переходять з розчину в ліпіди.
Фарбування Суданом III. Є найбільш поширеним методом виявлення жиру.
Приготування розчину барвника. У 100 мл гарячого 70% спирту засипають 0,2-0,3 г порошку Судану III, кілька разів збовтують і ставлять в термостат (при 58 ° С) на кілька годин, потім охолоджують і фільтрують.
Метод. 1. Заморожені зрізи (зі свіжої або фіксованого у формаліні тканини) на кілька хвилин переносять з води в 50% спирт.

1. Поміщають в спиртовий розчин барвника на 15-30 хв (бюкси слід закривати, так як випаровування спирту призводить до випадання опадів барвника).
2. Швидко споліскують в 50% спирті.
3. Промивають в дистильованої воді.
4. Підфарбовують ядра кислим гемалауном.
5. Промивають і укладають в желатин або гліцерин-желатин (зневоднення в спиртах екстрагує жири).

результат. Жирові речовини інтенсивно оранжевого кольору, ядра -сині. Препарати вицвітають порівняно скоро, тому відкладати дослідження не рекомендується.
Забарвлення шарлахом. Барвники: в суміш з 50мл ацетону і 50 мл 70% спирту засипають 0,2-0,3 г шарлаха. Добре закривають і збовтують. Отриманий розчин перед вживанням фільтрують.
Метод. 1. Заморожені зрізи зі свіжої або фіксованого у формаліні тканини поміщають в 50% спирт на 2-4 хв.

1. Фарбують в розчині барвника 2-3 хв.
2. Швидко споліскують в 70% спирті.
3. Промивають у воді.
4. Підфарбовують ядра кислим гемалауном.
5. Промивають у воді і укладають в гліцерин або гліцерин-желатин.

Результат. Жирові речовини оранжево-червоні, ядра - сині.

Виявлення заліза методом з утворенням турнбулевої синього

Залізо може перебувати в тканинах як у вільному вигляді (неорганічне), так і в хімічній зв`язку з молекулами органічних речовин (гемоглобін еритроцитів). Гистохимическое дослідження тканин на вміст заліза виробляють при вивченні пігментного обміну, особливо при захворюваннях, пов`язаних з гемолітичними процесами в крові.
Метод заснований на хімічній реакції між сульфідом заліза і гексациано-Феррата калію, в результаті якої утворюється турнбулевої синій. Реакція специфічна, надійна, препарати стійкі.
Метод (фіксація формаліном, абсолютним спиртом, зрізи заморожені, парафінові, целлоідіновие).

1. Помістити зрізи з дистильованої води в 10% розчин сульфіду амонію на 1-24 год.
2. Ретельно відмити в декількох працях дистильованої води.
3. Помістити в свежеприготовленную суміш з рівних частин 20% розчину гексациано-феррата (3) калію і 1% розчину хлористоводневої кислоти на 10-20 хв.
4. Ретельно прополоскати в дистильованої воді.
5. Підфарбувати ядра карміном.
6. Промити, збезводнити, просветлить, укласти в бальзам.

Результат. Ділянки, що містять залізо, пофарбовані в інтенсивно-синій колір, ядра червоні.
Примітка. Необхідно виключити застосування в процесі роботи металевих предметів. Посуд слід ретельно промити слабкою хлористоводневою кислотою, а потім дистильованою водою, отриманої зі скляного апарату (щоб виключити сліди металу). Розчин сульфіду амонію повинен мати чистий жовтий колір і зберігатися не довше ніж 2-3 тижнів в добре закривається посуді. При доступі повітря з`являється коричнево-жовте забарвлення, яке свідчить про інактивації розчину.