Краснуха

О. Г. Анджапарідзе,
Г. І. ЧЕРВОНСЬКИЙ
краснуха
Москва Медицина 1975

Нерідко можна почути і навіть зустріти в медичній літературі термін «корова краснуха». Однак зв`язок краснухи з кором не має ніякої наукової основи і обумовлена деяким подібністю клінічних проявів цих двох дитячих інфекцій, а, головним чином, психологічними причинами, які, мабуть, походять від тих далеких часів, коли між цими захворюваннями не робили відмінностей. Краснуха - абсолютно самостійна нозологічна одиниця, яка відрізняється від кору клінічним перебігом, характером ускладнень, епідеміологією і тим більше етіологією: віруси краснухи і кору відносяться до різних таксономічних груп. «Скарлатинозна» краснуха має ще менше відношення до розглянутого захворювання і позначає так звану «четверту інфекційну хворобу», яка швидше за все є атипової формою скарлатини.
Немає єдності і в міжнародній термінології. Краснуху називають «німецький кір», «епідемічна розеола» і т. Д. Тому засідання Регіонального бюро ВООЗ з профілактики краснухи, що проходило в Будапешті в 1972 р, рекомендувало як офіційної назви цієї хвороби термін «краснуха».
Протягом півтора століть краснуха була відома лікарям як одне з «найшкідливіших» дитячих захворювань. Однак за останні 30 років цю точку зору довелося докорінно переглянути. Після того як в 1941 р з Австралії прийшла звістка про те, що краснуха здатна викликати вроджені каліцтва, вона стала однією з важливих наукових медичних проблем. Вивченню проблеми сприяли величезні епідемії краснухи, що спостерігалися в останню чверть століття і залишили після себе десятки тисяч дітей з вродженими каліцтвами. Ці епідемії дозволили також отримати основи знань з клініці, вірусології, епідеміології і патогенезу вродженої та набутої краснухи.       
Класична тріада вродженої краснухи глухота, катаракта і пороки серця - були доповнені великим списком всіляких аномалій розвитку. Виявилося, що краснуха представляє небезпеку для плода не тільки в першому триместрі вагітності, як вважали раніше, а й у другому, і навіть в третьому триместрі. При захворюванні матері в перші два місяці вагітності небезпека ураження плода наближається до 100%. Серологічні обстеження показали, що у всіх частинах світу серед жінок дітородного віку є сприйнятливі контингенти, які можуть захворіти на краснуху.

Все це спонукало дослідників шукати шляхи імунопрофілактики краснухи. За останні роки розроблено кілька живих вакцин проти краснухи, деякі з яких отримали ліцензії. Справжній етап характеризується першими спробами проведення масової вакцинації в окремих країнах. Накопичені відомості були всебічно розглянуті на кількох міжнародних конференціях і симпозіумах.

глава I
ВІРУС КРАСНУХИ

Спроби класифікувати вірус краснухи почалися відразу після виділення та ідентифікації вірусу в 1962 р і тривають до теперішнього часу, так як до сих пір остаточно не встановлено тип організації вірусного капсида. Вірус краснухи вже тричі перекочовував з однієї таксономічної групи в іншу.
Спочатку вірус відносили до міксовірусів. Підставою для цього були дані про те, що вірус краснухи є РНК-содержащім- чутливість вірусу до обробки ефіром, яка свідчить про зміст ліпідів в зовнішній оболонці, і розміри віріона, які в початкових вимірах за допомогою мембранних фільтрів і електронної мікроскопії становили 120-280 ммк .
У міру накопичення відомостей по морфології і структурі дослідники все більше схилялися до думки помістити вірус краснухи в групу арбовирусов (Holmes е. А., 1969). Сферична форма віріона, розміри його і нуклеоида і репродукція в цитоплазмі чутливих клітин роблять цей вірус дуже схожим на віруси лісів Семлики і Сіндбіс, які відносяться до арбовіруси групи А.
З 1970 р вірус краснухи разом з більшістю ербовірусов групи А і В потрапляє в таксономічну групу «тогавирусов», представники якої характеризуються розмірами близько 70 ммк в діаметрі, наявністю РНК, упакованої в капсид ізометричної організації, і оболонкою, яка містить ліпіди.

ХАРАКТЕРИСТИКА віріони

Морфологія і структура. В останні роки за допомогою електронномікроскопічних досліджень, що використовують техніку негативного контрастування, вдалося отримати досить чітке уявлення про морфологічну структуру вірусу краснухи (М. та ін., 1973- Holmes е. А., 1969- Horzinek е. А.)
Типовий вирион краснухи має сферичну форму і діаметр 60-70 ммк. Деякий плеоморфізм і відмінності в розмірах залежать від техніки приготування препаратів. Віріон складається з зовнішньої оболонки нуклеотиду, що має діаметр 30-35 ммк. Іноді в центрі нуклеоида виявляється менш електронноплотний зона. Зовнішня оболонка віріона складається з базальної мембрани, яка у більшій частині віріонів із зовнішнього боку покрита невеликими виступами завдовжки 5-8 ммк. Цю оболонку вірус набуває, отпочковиваясь від оболонки чутливої клітини або від оболонки вакуолі, що формується в цитоплазмі. За даними М. Б. Корольова та співавторів (1973) базальнамембрана складається з трьох шарів і морфологічно не відрізняється від мембрани вакуолі. Horzinek і ін. (1971) спробували дослідити тонку будову нуклеокапсида. Використовуючи техніку негативного контрастування, автори на поверхні сферичного капсида спостерігали кільцеподібні морфологічні одиниці діаметром 11 + 1 ммк. Будова і форма нуклеокапсида нагадували такі у вірусу Сіндбіс, капсид якого має форму ікосаедра. Це дало підставу зробити висновок про изометрическом будові капсида вірусу краснухи і віднести його до таксономической групі тогавирусов.
Фізико-хімічна характеристика. У культурі клітин, інфікованих вірусом краснухи, визначаються вірусні частинки і дрібні вірус-специфічні компоненти, звані розчинними антигенами або S-антигенами (Schmidt, Lennet, 1969- Vaheri, Vesikari, 1971). Вірусні частинки, крім інфекційності, мають також гемагглютинирующей (ГА) і комплементсвязивающіе (КС) активністю. Розчинна антиген проявляє в основному комплементсвязивающіе активність. Вважається, що розчинний антиген є субодиниці вірусу, з тих чи інших причин не увійшли до складу віріона. Крім названих антигенів, в нативних препаратах інфікованих вірусом краснухи клітин за допомогою методу иммунодиффузии виявляли в залежності від використаної системи клітин два або три преципитирующих антигену (Salmi, 1970 Booth, Norrby, 1973). Все це говорить про складне білковому складі вірусу краснухи.
При вивченні заражених культур методом рівноважного центрифугування в градієнтах щільності сахарози, цитрату калію і сірчанокислого цезію було знайдено, що плавуча щільність віріона краснухи становить 1,18-1,21 г / см3. ГА-і КС-антигени (так звані великі частки) визначалися в тій же фракції, що і «інфекційний вірус», і, отже, мали ту ж плавучу щільність (1,18-1,21 г / см3). Розчинна КС-антиген мав плавучу щільність 1,08- 1,11 г / см3 (Schmidt, Lennet, 1969). За даними Vaheri і Vesikari (1971), плавуча щільність розчинної антигену в градієнті сахарози становить 1,16-1,24 г / см3, а константа седиментації 3,5-4S.
Ці автори повідомили ще про один вид антигенної активності, яка виникає ними в реакції агрегації тромбоцитів (РАТ), яка властива як інфекційного вірусу, так і розчинного антигену. У подальшому викладі цей вид антигенної активності позначений АТ-активність, або АТ-антиген.
Обробка детергентами (твін-80 і ефір, додецил-сульфат натрію, нонідет Р40) руйнує інфекційність вірусу, і віріон розпадається на окремі структурні компоненти
РНК. При обробці очищеного вірусу 2% розчином додецилсульфату натрію вдалося ізолювати інфекційну РНК, що має константу седиментації. При центрифугуванні в градієнті сірчанокислого цезію виділена РНК мала плавучу щільність 1,634 г / см3 і була чутлива до дії панкреатичної рибонуклеази, що говорить про її одноцепочечной структурі. Відносна молекулярна маса віріонів РНК склала Зх106 дальтон. Ізольована РНК в дослідах з чутливими клітинами володіла инфекционностью, хоча і в багато разів меншою, ніж нативний вірус (отримана з вірусу в титрі 109 БОЮ, РНК мала інфекційність тільки 103 БОЮ).
Білки. Відомості щодо структурних білків вірусу краснухи обмежені поодинокими роботами. Віріон, зруйнований детергентами, розпадається на білки, що несуть різну антигенну активність і входять або до складу РНП, або в зовнішню ліпопротеїнову оболонку. Обробка твіном-80 і ефіром збільшує титр ГА-антигену в 4-16 разів і дозволяє виявити субодиниці ГА-антигену, що мають розміри близько 25 ммк і константу седиментації 100S (Magnusson, 1969). При обробці нонідет Р40 і подальшому градиентном центрифугировании структурні компоненти віріона краснухи виявлялися в двох фракціях (Vaheri, Vesikari, 1971). Одна фракція містила РНП з константою седиментації 150S, яка має КС- і АТ-активністю. У другій, «повільної», фракції виявляли ГА-КС- і АТ-активність.
Досліджуючи вірус краснухи, попередньо обробленої додецилсульфатом натрію і 2-меркаптоетанолом, методом електрофорезу в поліакриламідному гелі, Vaheri і Hovi (1972) показали, що до складу віріона входять по крайней мере 3 різних структурних білка, позначених авторами VP1, VP2 і VP3. Відносна молекулярна маса цих компонентів становила 62 500, 47 500 і 35 000 дальтон відповідно. При градієнтному центрифугировании було показано, що найменший білок VP3 є структурним компонентом нуклеопротеида з константою седиментації 150S, а два інших - VP1 і VP2 - виявлялися у фракції, відповідної оболонці вірусу. Дослідження за допомогою адсорбції - елюції на формалінізірованних еритроцитах виявило, що гемагглютинирующих функцію з найбільшою ймовірністю несе великий структурний білок VP1, що входить в оболонку віріона. За допомогою радіоактивної мітки встановлено, що VP1 і частково VP2 є глікопротеінамі- VP3 містить велику кількість аргініну, але бідний лізином.
Відносна молекулярна маса двох головних поліпептидів вірусу краснухи-VP1 і VP3 - дуже схожа з відносною молекулярною масою відповідних поліпептидів арбовирусов групи А.
Liebhaber і Gross (1972), застосувавши трохи іншу техніку електрофорезу в поліакриламідному гелі, отримали 3 великі електрофоретичні зони, що містять 8 поліпептидів. Два великих поліпептиду були гликопротеинами з відносною молекулярною масою 60 000 і 63 000 дальтон- два інших, що не містять карбогідратів, мали відносну молекулярну масу 29 000 і 32 000 дальтон- інші чотири компоненти були також гликопротеинами з відносною молекулярною масою 47 000, 52 000, 54 000 і 56 000 дальтон.

СТІЙКІСТЬ До фізичних і хімічних впливів

Дія температури. Вірус краснухи термолабилен (Parkman е. А., 1969). Інактивація вірусу у великій мірі залежить від складу середовища культивування. Наявність в середовищі білка (сироватка, альбумін) значно підвищує стійкість до високої температури. При низькій температурі (-20 ° або -70 °) інфекційні властивості вірусу зберігаються кілька років. ГА-і особливо КС-активність більш стійкі до підвищення температури, ніж інфекційність. При 4 ° титри КС-антигену зберігалися протягом декількох тижнів. Титри ГА-антигену в нативних препаратах швидко знижуються. Термостабільність ГА-антигену різко підвищується при обробці вірусу твіном-80 і ефіром. Отриманий таким чином ГА-антиген зберігається при кімнатній температурі без втрати активності протягом декількох тижнів, а при низькій температурі - роки.
Дія pH. Оптимальним для збереження інфекційності вірусу краснухи є інтервал pH від 6,8 до 8,1. Інфекційність руйнувалася при значеннях рН-З, 5 і рН ^ 9,5. Приблизно те ж спостерігалося відносно ГА-активності. КС-активність більш резистентна до змін pH.
Дія органічних розчинників. Вірус краснухи інактивується під дією ефіру, хлороформу, дезоксіхолатов натрію, фреону і т. Д., Що говорить про те, що віріон краснухи містить ліпіди. Обробка ефіром і хлороформом приводила також до втрати більшої частини КС-активності та повної втрати ГА-активності. Однак додавання невеликих кількостей твін-80 викликає різке збільшення титру ГА-антигену.
Інші впливу. Відзначено, що формалін і (3-пропілактон руйнують інфекційність вірусу, але не впливають істотно на КС-активність і імуногенні властивості. Обробка вірусу трипсином інактивувати ГА і КС-активність.
Вірусу краснухи, як і багатьом іншим вірусам, властива внутрішня інактивація під дією світла (Booth, Stern, 1972). Ступінь інактивації залежить від тривалості впливу світла і значно зменшується при наявності в культуральному середовищі сироватки. Світлочутливість вірусу краснухи помітно підвищувалася при додаванні в середу профлавіна, особливо при лужному значенні pH. У инактивированного таким чином вірусу зберігалася антигенная активність.