Антигенна структура - краснуха
Відео: Вірус гепатиту А
Відео: Клебсієли
Як уже згадувалося в розділі «Характеристика віріона», в культурі клітин, зараженої вірусом краснухи, визначаються інфекційні вірусні частинки, які мають одночасно ГА і КС-активністю (так звані V-антигени), і «розчинна» антиген ( «S»), має тільки КС-активність. Крім того, за допомогою методу иммунодиффузии можна виявити два або три преципитирующих антигену. Описано також антиген, який виявляється в реакції агрегації тромбоцитів (PAT) (Vaheri, Vesikari, 1971). Специфічний антиген вірусу краснухи можна виявити також методом імунофлуоресценції (Brown е. А., 1964).
До теперішнього часу за допомогою наявних методів не вдалося виявити скільки-небудь значних антигенних відмінностей між штамами вірусу краснухи різного походження. Можна припустити, що вірус краснухи, подібно вірусу кору, в природних умовах зустрічається в вигляді одного серотипу.
Зупинимося детальніше на описі КС- і ГА-антигенів, так як ці антигени мають найбільше значення в практиці вивчення інфекції, спричиненої вірусом краснухи.
Комплементсвязивающіе антиген. У культурах інфікованих клітин КС-антиген виявляється у вигляді пов`язаного з вирионом V-антигену з плавучої щільністю в градієнті сахарози, що дорівнює 1,19-1,21 г / см3, і у вигляді «розчинної» антигену, що має плавучу щільність 1,08- 1,11 г / см3 (Schmidt, Lennet, 1969).
КС-активність вірусу краснухи вперше виявили Sever та ін. (1965) при культивуванні в первинній культурі нирки зеленої мавпи і клітинах RK13. Антиген в титрах 4-8 одиниць виявляли в 30% суспензії клітин, концентрованої в 200 раз на 2-3-й день після зараження. Для отримання антигену використовували і інші культури клітин: LLC-MK2, GMK.-AH-1, Vero. В останній культурі клітин за допомогою концентрації надосадової рідини вдавалося отримати антиген в титрах 8-64 одиниці. В. В. Чеботарьов і О. Т. Оганесян (1970) отримували КС-антиген шляхом триразового заморожування і відтавання культур клітин нирки зеленої мавпи, інфікованої вірусом краснухи. В подальшому автори застосовували екстрацію шляхом впливу ультразвуком протягом 15 хв і отримували антиген в дуже високому титрі (В. В. Чеботарьов, В. П. Моісеєв, 1971).
Доброю культурою для отримання КС-антигену виявилися клітини ВНК21, які використовувалися як в монослойной, так і в суспензійний культурах (Halonen е. А., 1967а). Максимальні титри антигену отримували при посіві клітин, заражених вірусом з множинністю 0,01-1 на клітку.
КС-антиген без істотного зниження титру зберігається протягом 12 міс при температурі 4 ° - нагрівання до 56 ° інактивує антиген протягом години-при -70 ° антиген може зберігатися кілька років. Обробка формаліном (1: 2000) або УФ-променями, руйнуючи інфекційність, не знижує титру антигену.
Гемагглютинирующих антиген. ГА-антиген вперше отриманий Stewart і ін. В 1967 р Попередні цьому невдачі при отриманні антигену були обумовлені тим, що сироватки тварин, що додаються в культуральну рідину, містили речовини, що пригнічують гемаглютинацію вірусу краснухи. У більш пізніх дослідженнях встановили, що цей термостабільний інгібітор гемаглютинації є р-ліпопротеїдом (Chang, Weinstein, 1972), який можна видалити з
сироватки за допомогою відповідної обробки. Stewart і ін. (1967) використовували підтримуючу середу, що містить фетальну сироватку великої рогатої худоби, оброблену каоліном. Замість сироватки, обробленої каоліном, можна використовувати також розчин альбуміну великої рогатої худоби. Іншим суттєвим моментом при отриманні ГА-антигену є застосування високої множинності зараження (0,5-1,0 на клітку), що призводить до інтенсивного розмноження вірусу і швидкого збільшення титрів.
Досить ефективним виявилося застосування суспензійний культур. Воно дозволяє отримувати великі кількості антигену. Stewart і ін. (1967) отримували антиген на клітинах ВНК21, які до сих пір є найбільш зручною культурою для приготування антигену, хоча з цією метою використовуються також деякі інші системи клітин.
Важливим етапом в приготуванні ГА-антигену є обробка віруссодержащего матеріалу твіном-80 і ефіром по Norrby (1962), в результаті якої істотно підвищуються титри, S крім того, антиген, набуває термостабільність.
Halonen і ін. (1967b) домагалися отримання високих титрів ГА-антигену, екстрагуючись вірус з суспензії клітин шляхом обробки протягом 30 год при температурі 35 ° Алкалинова буферним розчином (pH 9,0) і подальшим впливом ультразвуком протягом 30-60 хв.
У нашій лабораторії Р. Г. Десятскова (Р. Г. Десятскова, Е. Ф. Опочинська, 1973) отримала ГА-антиген, використовуючи монослойного культуру клітин ВНК21 13S і штам Sp-2 вірусу краснухи, адаптований до даної культури (Furukawa е. а., 1967). Істотними моментами при отриманні антигену були застосування високої множинності зараження, використання в підтримуючої середовищі сироватки теляти, обробленої каоліном, і обробка твіном-80 і ефіром. Титр вірусу в культуральної рідини до обробки становив 8- 64 едініци- після, обробки титри антигену збільшувалися в 4-32 рази.
Вірус краснухи аглютинативна еритроцити багатьох видів птахів і ссавців- голубів, курей, гусей, індиків, японських перепілок, щурів, кроликів, овець, свиней, собак, кішок, мавп і людини з групою крові О (Е. А. Куліш і ін., 1973- Schmidt е. а., 1971).
За останніми даними, обробка еритроцитів трипсином призводить до 2-4-кратного підвищення чутливості еритроцитів до гемагглютинирующих дії вірусу краснухи (Е. А. Куліш і ін., 1973). На думку дослідників це пов`язано з руйнуванням інгібіторів аглютинації білкової природи, що знаходяться на поверхні еритроцитів, що призводить до демаскування прихованих небілкових еритроцитарних рецепторів.
Гемаглютинін в нативних препаратах вірусу краснухи дуже термолабілен- обробка твіном-80 і ефіром різко збільшує стійкість антигену до зовнішніх впливів. При температурі -20-70 ° оброблений антиген може зберігатися роками.
