Дослідження регуляції щитовидної залози - дослідження функції щитовидної залози
Зміст |
---|
Дослідження функції щитовидної залози |
Дослідження регуляції щитовидної залози |
Дослідження функції щитовидної залози in vivo |
Отримання зображення структури щитовидної железиo |
Визначення концентрації тиреотропного гормону в сироватці крові
Перше визначення концентрації сироваткового тиреотропного гормону (ТТГ), проведене Odell і співр. в 1965 році, було великим кроком в оцінці функції щитовидної залози, так як в результаті було показано, що пацієнти з первинним гипотиреоидизмом мали підвищений сироватковий рівень ТТГ. Можливість вимірювання ТТГ привела до фактичного подолання громіздкість і часто хворобливості тесту стимуляції ТТГ, який використовувався раніше для діагностики гіпотиреоїдизму. Хоча ранні способи визначення ТТГ радіоімунологічними методиками дозволяли визначити підвищений сироватковий рівень ТТГ у пацієнтів з первинним гипотиреоидизмом, вони були часто незручні для точного вимірювання ТТГ у еутиреоїдних і гіпертиреоїдних людей. Протягом декількох років були розроблені більш чутливі методи оцінки ТТГ і більшість еутиреоїдних людей мали визначається рівень ТТГ, так що до початку 70-х років сироватковий ТТГ став стандартом для диференціювання гіпотиреоїдних від еутиреоїдних пацієнтів. Функціональна чутливість таких ранніх оцінок, проте, не дозволяла диференціювати гіпер- і еутіреоідізм. Наступні методи, які отримали розвиток в 70-х роках, проте, були більш чувствітельни- еутиреоїдних люди рідко мали рівень ТТГ нижче нормального і фактично всі гіпертиреоїдних пацієнти мали знижену концентрацію ТТГ. Незважаючи на ці досягнення в оцінці рівня ТТГ, їх клінічна значимість була обмежена, так як вони були дуже складні і вимагали великих затрат часу. Будучи відносно чутливими, вони не були доступними для широкого загалу для клініцистів.
В останні роки розроблені неізотопних іммунометріческіе методи оцінки ТТГ, що використовують хемілюмінесцентні мітки. Ці нові методи мають функціональну чутливість 0,01 мед / л, що в 10 разів вище, ніж попередні найчутливіші методи визначення ТТГ верб 100 раз вище, ніж методи РІА. Методи визначення ТТГ з чутливістю 0,01 мед / л називаються методами третього покоління і все більша кількість комерційних наборів і клінічних лабораторій використовує цей метод.
Клінічне використання визначення ТТГ
Діагностика первинного гіпотиреоїдизму.
Наявність підвищеного рівня ТТГ є підтвердженням діагнозу первинного гіпотиреоїдизму. Ступінь гіпертиреоїдизму оцінюється по сироваткового рівня Т4. Рівні ТТГ також підвищені у пацієнтів з субклиническими формами гіпотиреоїдизму, при якому сироватковий рівень загального Т4 нормальний або прикордонно низький.
Оцінка раціональності проведення замісної терапії тиреоїдними засобами.
Метою лікування первинного гіпотиреоїдизму левотироксином є нормалізація сироваткових рівнів Т4 і ТТГ. За допомогою існуючих методів оцінки рівня ТТГ можна поставити діагноз передозування левотироксина, оскільки концентрація ТТГ при цьому буде низька. Це має клінічне додаток, так як встановлено, що у пацієнтів зі зниженим сироватковим ТТГ навіть в присутності нормального сироваткового рівня Т4 може спостерігатися демінералізація кісток. Цьому особливо схильні жінки в постменопаузі. Хронічна передозування левотироксина може супроводжуватися серцевими розладами, включаючи суправентрикулярні аритмії і вентрікулярную септальних гіпертрофію.
Оцінка супрессии рівня ТТГ при раку щитовидної залози. Тиреоїд-супрессивная терапія є частиною рутинного лікування пацієнтів з високодиференційований (папиллярной або фолікулярної) карциномою щитовидної залози, так як зростання таких пухлин може бути ТТГ-залежним. Лікування левотироксином знижує рівень ТТГ і в той же час дозволяє уникнути розвитку клінічного гіпертиреоїдизму. Використання методів визначення рівня ТТГ третього покоління зробило цю задачу більш простий, ніж раніше, так як до цього супрессия ТТГ могла бути підтверджена тільки відсутністю сироваткової ТТГ-реакції на призначення екзогенного тіротропін-рилізинг гормону (ТРГ). За деякими винятками, знижені рівні ТТГ при використанні методів третього покоління корелюють з відсутністю реакцій на дію ТТГ.
Оцінка супресивної терапії вузлового зоба.
Вимірювання рівнів ТТГ продуктивно у пацієнтів з солітарні або мультінодулярним зобом, у яких іноді застосовується гормональна терапія тиреоїдними засобами. Незважаючи на те, що ефективність левотіроксіновой супрессии доброякісного зоба не є загальновизнаною, вона ще широко застосовується. Отже, необхідно мати точну оцінку рівнів ТТГ для уникнення передозування.
Діагностика субклінічного гіпертиреоїдизму.
Пацієнти з нечисленними або стертими симптомами гіпертиреоїдизму, з нормальними або прикордонно підвищеними рівнями загального Т4 та загального Т3 та зі зниженими рівнями сироваткового ТТГ мають субклінічний гіпертиреоїдизм. До розвитку чутливих методів оцінки ТТГ такі випадки не діагностували. Такі люди, особливо після 60-річного віку, мають в 4 рази більший ризик розвитку серцевих аритмій, особливо фібриляції передсердь.
тиреоглобулін
Радіоімунного методи дослідження в даний час є рутинними і загальноприйнятими при визначенні концентрації тиреоглобуліну в сироватці крові. Використовувані методи є високо специфічними і в залежності від чутливості дозволяють визначити наявність тиреоглобуліну в сироватці крові у 90% здорових людей в стані еутіреоідізма. При використанні антисироватки в високих розведеннях практично не спостерігається перехресного реагування з йодтироніни або йодтірозінов. Однак, результати, одержувані при аналізі сироватки, що містить аутоантитіла до тиреоглобуліну, неточні і використання даного методу в цих випадках обмежена. Таким чином, інтерпретація результатів дослідження вимагає попереднього скринінгу присутності аутоантитіл до тиреоглобуліну. Наявність антитіл до тіреопероксідазе не впливає на визначення рівнів тиреоглобуліну методами радіоімунного аналізу.
Концентрація тиреоглобуліну в сироватці дорослої людини в нормі становить від менш ніж 1 до 25 нг / мл (менше 1,5-38 пмоль / л) і в середньому 5-10 нг / мл. Рівень тиреоглобуліну підвищується в сироватці пацієнтів практично з усіма типами порушень функції щитовидної залози, обмежуючи таким чином його використання в якості диференціального діагностичного тесту. Його найбільша клінічна значимість проявляється при обстеженні пацієнтів з високодиференційований (папиллярной або фолікулярної) карциномою щитовидної залози. Підвищений або прогресивно наростаючий сироватковий рівень тиреоглобуліну (особливо після хірургічного лікування) наводить на думку про персистенції пухлини або відновлення її зростання. Концентрація тиреоглобуліну може бути визначена за допомогою радіоімунного методів або іммунометріческіе. Хоча антитиреоїдні антитіла можуть впливати на точність оцінки концентрації тиреоглобуліну у 10% пацієнтів, у таких людей вимір як рівня тиреоглобуліну, так і антитіл до нього, може бути використано для отримання інформації про перебіг пухлинного процесу.
сироватковий кальцитонін
Кальцитонин являє собою поліпептид, що секретується парафоллікулярнимі (С) клітинами щитовидної залози. Сироватковий рівень кальцитоніну підвищується у пацієнтів з медулярної карциномою щитовидної залози (МКЩ). Рівень кальцитоніну визначається у пацієнтів з діагностованою МКЩ і служить як допоміжний метод для скринінгового дослідження членів сім`ї пацієнтів з МКЩ.
Різні біохімічні та фізіологічні зміни, пов`язані з дією тиреоїдних гормонів на периферичні тканини
Тиреоїдні гормони впливають на функцію клітин в різних периферичних тканинах. Підвищена або знижена функція щитовидної залози може привести до дефіциту або надлишку сироваткового вмісту тиреоїдних гормонів, що може викликати зміну великого числа показників, що використовуються при діагностиці ряду захворювань, в тому числі, безпосередньо не пов`язаних з дисфункцією щитовидної залози. Знання показників, на які можуть впливати тиреоїднігормони, також важливо при інтерпретації даних лабораторних досліджень (див. Табл. 7).
Табл. 7. Зміни деяких біохімічних і фізіологічних показників, пов`язані з дефіцитом або надлишком тиреоїдних гормонів.
* У дитячому віці, ** у новонароджених
Відео: Гіпертиреоз (підвищена функція щитовидної залози)
Антитіла при аутоімунних захворюваннях щитовидної залози
Антитіла до структур щитовидної залози
Чутки, які антитиреоїдні антитіла, особливо до мікросомальної фракції (Антимікросомальні, АМА) і до тиреоглобуліну (АТгА), зазвичай присутні у пацієнтів з аутоімунними захворюваннями щитовидної залози. До недавнього часу для вимірювання рівня антитіл використовувалася методика гемаглютинації, однак зараз використовуються набагато більш чутливі імунологічні методики. З появою імунологічних методів термін антитіла до тіреопероксідазе (анти- ТПО) був замінений на АМА. АМА визначаються більш ніж у 90% пацієнтів з хронічними аутоімунними захворюваннями щитовидної залози і майже у 100% людей з тиреоїдитом Хашимото, більше 80% пацієнтів з хворобою Грейвса мають позитивні титри. Хоча АТгА більш специфічні, ніж АМА, їх визначення менш чутливо і, отже, не так значимо в діагностиці аутоімунних захворювань щитовидної залози. Підвищені рівні АМА також часто позитивні при безлічі інших органоспецифічних аутоімунних захворювань, наприклад, таких як системний червоний вовчак, ревматоїдний артрит, аутоімунна пернициозная анемія, синдром Шегрена, інсулінозалежний цукровий діабет і хвороба Аддісона. Крім того, підвищені рівні АМА спостерігаються у прямих родичів людей з аутоімунними захворюваннями щитовидної залози. Позитивні титри антитіл спостерігаються при постнатальному тиреоїдиті. Низькі титри антитіл виникають транзиторно у деяких пацієнтів після підгострого тиреоїдиту. Чи не спостерігається збільшення тиреоїдних аутоантитіл у пацієнтів з мультінодулярним зобом, аденомою щитовидної залози або вторинним гипотиреоидизмом. Показано, що у деяких пацієнтів з тиреоїдитом Хашимото і невизначених тиреоїдними антитілами в сироватці лімфоцити внутріорганной локалізації продукують антитіла до тіреопероксідазе.
Відео: Щитовидна залоза - функції, регуляція роботи, захворювання
тиреостимулюючого антитіла
Аутоімунний патогенез хвороби Грейвса був вперше запідозрений в середині 50-х років, коли введення сироватки пацієнтів з хворобою Грейвса щурам призводило до збільшення поглинання радіоактивного йоду щитовидною залозою щурів. З тих пір застосовується термін «тривало діючий стимулятор щитовидної залози», ДДСЩ. Пізніше ДДСЩ був охарактеризований як імуноглобулін з константою седиментації 7S, а в останні роки розроблено кілька методів визначення ДДСЩ або тіреостімулірующіх антитіл. Широко використовуються 2 типи методів - залежний від продукції цАМФ і інший - радіоізотопний метод, який базується на інгібіторних властивості імуноглобуліну щодо зв`язування ТТГ. Оцінка продукції цАМФ опосередковується тіреостімулірующіх імуноглобуліном, і він визначаємо у 90-95% гіпертиреоїдних пацієнтів з хворобою Грейвса. За допомогою іншого методу (залежного від пригнічення ТТГ-зв`язування) визначаються як стимулюючі, так і блокуючі антитіла. Вони визначаються у 85% пацієнтів з хворобою Грейвса.
Визначення концентрації імуноглобулінів, що пов`язують ТТГ-рецептори тиреоцитов
Найбільш ранні методики використовували різні модифікації біологічної проби на мишах з Маккензі. Патологічний гамма глобулін з біологічними властивостями ТТГ має досить тривалу активність in vivo, тому отримав назву ДДСЩ. Метод дозволяє оцінити ДДСЩ-індуковане звільнення тиреоїдних гормонів з щитоподібної залози миші, попередньо мічених радіоактивним йодом. Присутність ДДСЩ в сироватці крові є патогномонічним ознакою для хвороби Грейвса. Однак, в залежності від чутливості методу, різний відсоток пацієнтів a priori має позитивну реакцію на ДДСЩ. ДДСЩ може бути виявлений в сироватці пацієнтів з хворобою Грейвса навіть при відсутності тиреотоксикозу. Хоча це більш характерно для пацієнтів з аутоімунною офтальмопатією, особливо що супроводжується претібіальной мікседемою, ДДСЩ не викликає цих ускладнень і його рівень не корелює з їхньою вагою або тривалістю. ДДСЩ проходить через плаценту і може бути виявлений транзиторно у новонароджених від матерів, які мають патологічний гамма-глобулін.
Спроби поліпшити методи визначення тіреостімулірующіх антитіл (ТСА) при аутоімунних захворюваннях щитовидної залози привели до розвитку декількох методів in vitro, що використовують тканини щитовидної залози тварин і людини. При цитологічному аналізі здатність сироватки крові стимулювати ендоцитоз в свіжої тиреоїдної тканини людини вимірюється прямим підрахунком сформованих внутрішньоклітинних крапель колоїду. З використанням такої техніки була продемонстрована стимуляція активності щитовидної залози людини на зразках сироватки пацієнтів з хворобою Грейвса, у яких не було виявлено активності ДДСЩ з використанням стандартного біологічного тесту на мишах. ТСА можуть бути визначені за допомогою вимірювання накопичення цАМФ або стимуляції аденілатціклазной активності в клітинах культури тканини щитовидної залози людини і плазматичних тиреоїдних мембранах, відповідно. Накопичення цАМФ в культурі клітин щитовидної залози лінії FRTL5 щурів також використовується в якості оцінки ТСА. Стимуляція звільнення Т3 з зрізів тканини щитовидної залози людини і свині - ще одна форма оцінки ТСА in vitro. In vitro оцінка, яка використовує цитохимические методи, залежить від здатності тиреостимулирующего агента збільшувати проникність лізосомальних мембран для хромогенного речовини, лейцил-р-нафтіламіда, який потім реагує з ферментом нафтіламідазой. Кількісне визначення проводиться методом скануючої інтегральної мікроденситометри.
Нещодавно проведене клонування ТТГ-рецептора сприяло розвитку методу визначення ТСА in vitro з використанням клітинних ліній, що експресують рекомбінантний ТТГ-рецептор. Цей метод, що грунтується на виробленні цАМФ, специфічний при вимірюванні антитіл до ТТГ-рецептора людини, які мають тіреостімулірующіх активністю, і, таким чином, відрізняється від методів, заснованих на зв`язуванні ТТГ-рецептора (див. Нижче), які не можуть диференціювати антитіла з тіреостімулірующіх і ТТГ-блокуючими властивостями. Відповідно, за допомогою використання визначення рекомбінантного людського ТТГ-рецептора вимірюється концентрація антитіл, що грають роль в патогенезі аутоімунних тиреоїдних розладів і цей метод більш чутливий, ніж використовувалося раніше визначення ТСА. Наприклад, 94% зразків сироватки були позитивні щодо ТСА в порівнянні з такими ж зразками, оцінюють з використанням клітин FRTL5.
Відео: Вішудха Оздоровлення щитовидної залози (Vishuddha)
Визначення концентрації антитіл, що пригнічують зв`язування ТТГ
Розробка методів визначення концентрації антитіл, що пригнічують зв`язування ТТГ, збігається з датою відкриття ще одного класу патологічних імуноглобулінів у пацієнтів з хворобою Грейвса - імуноглобулінів, які мають протективной активністю в екстракті щитовидної залози людини від нейтралізує біологічної активності ДДСЩ, протестованого на мишах. Цей агент, відомий як ДДСЩ- протектор, є видоспецифічності, що не володіє біологічною впливом на щитовидну залозу миші, але здатний стимулювати людську щитовидну залозу. Оригінальний метод определния його концентрації був дуже громіздким, що обмежувало його клінічне використання. Методи, що використовувалися останнім часом, які можуть бути названі радіорецепторнимі методами, ґрунтуються на конкуренції патологічних імуноглобулінів і ТТГ за загальні місця зв`язування рецептора на тиреоцитах. Тест близький за принципом до радіоізотопним методам, з тією лише різницею, що нативний мембранний рецептор замінює зв`язуючі білки або антитіла. Використовуються різні джерела рецепторів ТТГ, що включають людські тироцити, їх нативні або солюбілізірованних мембранозв`язані форми і клітинні мембрани щитовидних залоз свиней або жирових клітин морської свинки. Так як методи не вимірюють прямо тіреостімулірующіх активність, що визначаються патологічні імуноглобуліни мають різні назви, наприклад, антитіла, інгібуючі зв`язування ТТГ або тіротропін-які заміщають імуноглобуліни.