Серологічні методи - хламідійна інфекція в акушерстві та гінекології
Раніше застосовувалися реакція зв`язування комплементу і реакція пасивної гемаглютинації в даний час майже забуті. Більш поширена реакція мікроіммунофлюоресценціі (реакція мікроіммунофлюоресценціі). Технічно вона трудомістка, т. К. Заснована на використанні непрямого варіанту імунофлюоресценції. Для її постановки на предметне скло наносять ряд крапель, що містять елементарні тільця хламідій з культури в желточних мішках курячих ембріонов.Препарат висушують і на кожну з крапель елементарні тільця наносять розведення досліджуваної сироватки (від 1: 8 до 1: 1024). Далі після відмивання не пов`язана антитіл наносять мічену ФИТЦ антіглобуліновой сироватку проти білків сироватки людини. Подальший хід дослідження звичайний для реакцій імуно-флуоресценції, облік в люмінесцентному мікроскопі за граничним розведення сироватки, що дає люмінесценцію елементарні тільця.
В даний час широко використовуються імуноферментні методи виявлення антитіл до С. trachomatis з діфференінровкой імуноглобулінів G. М. А. Як антигени використовуються рекомбінантні ліпополісахариди.
Серологічні методи допомагають в ряді випадків визначити стадію і характер перебігу захворювання. Це особливо важливо при висхідній і персистуючої інфекції, яка підтримує хронічний перебіг хвороби протягом кількох місяців і навіть років і тим самим пошкоджує або руйнує тканини і органи.
В основі даних методів лежить виявлення специфічних антитіл. які накопичуються в сироватці крові і в секретах інфікованого органу у відповідь на впровадження збудника. Антитіла відносяться до трьох класів іммуноглобулінових молекул: М, А і G. Накопичення антитіл кожного з цих класів відбувається через різні проміжки часу, що залежить від характеру інфікування (первинне або повторне). При первинному інфікуванні спочатку з`являються антитіла класу М. потім - G і в останню чергу - А. У міру згасання імунної відповіді зниження концентрації титру антитіл кожного класу відбувається в тій же послідовності. Імунна відповідь при повторному проникненні збудника характеризується швидким наростанням титру антитіл G і А і практично повною відсутністю антитіл класу М.
Таким чином, при гострому інфекційному процесі у пацієнтів можна виявити антитіла класу М або швидко наростаючі кількості антитіл класів G і А. Навпаки, при хронічно протікають захворюваннях виявляються специфічні антитіла класів G і А, концентрації яких fie змінюються протягом тривалого періоду. У ряді випадків (в 3%) при хронічно протікають захворюваннях, перш ніж утворюються антитіла класу G. протягом декількох тижнів реєструються невисокі титри антитіл класу А (lt; 1/8). При безсимптомному перебігу захворювання визначення антитіл класу А в постійно низьких титрах протягом багатьох тижнів говорить про мікробної персистенції. Низькі (lt; 1/64), не змінюються в часі титри специфічних антитіл класу G вказують на давно перенесену мотлох йди іншу інфекцію. При гострих формах захворювання діагностичне значення має виявлення хламідійних IgM, IgA антитіл або встановлення сероконверсії IgG (наростання титрів антитіл в 4 і більше разів).
Для того щоб оцінити динаміку змін титрів антитіл різних класів, в клініці часто використовують метод парних сироваток, т. Е. Роблять повторне визначення антитіл з інтервалом 2-3 тижні. На підставі порівняння результатів при першому і другому обстеженні роблять висновок про характер і стадії захворювання (таблиця 1).
Таблиця I Серологічне визначення стадії захворювання
стадія захворювання | обумовлені антитіла | Динаміка титрів антитіл |
гостра | IgM. IgG. IgA | Швидка зміна (наростання більш ніж в 4 рази) |
хронічна | IgG. IgA | Титри постійні |
Реактивация / реинфекция | IgG, IgA | Швидка зміна (наростання більш ніж в 4 рази) |
В даний час зроблені спроби визначення місцевих секреторних антитіл до С. trachomatis в цервікальних секрети, проте висновок про діагностичне їх значенні слід робити з великою обережністю.
Слід зазначити, що навіть в умовах, коли лабораторія працює кваліфіковано, результат дослідження залежить від того, як був узятий матеріал, як він зберігався, ставляться чи одночасно необхідні контролю, що виключають неправильно взяті проби. Нижче наводиться таблиця, вдало систематизуючу переваги і недоліки методів виявлення С. trachomatis (Таблиця 2).
Таблиця 2 Переваги та недоліки різних методів виявлення С. trachomatis
(Taylor-Robinson D. and Thomas В. I., 1991)
пряма імунофлюоресценція | Культура клітин | ІФА | полімеразна ланцюгова реакція | |
Ділянки тіла, які можна обстежити | будь-які | більшість | Обмеження через відсутності адресності реакцій | будь-які |
Значення правильності взяття проб | вирішальне | вирішальне | вирішальне | вирішальне |
Умови транспортування проб | Якщо препарат фіксований, умови неважливі | Швидка доставка або зберігання при низькій температурі | Не має значення, якщо проба взята в буферний розчин | Швидка доставка пли зберігання при низькій температурі. Менш важливі, ніж для культури клітин |
Умови зберігання | На короткий час при + 4 °. на тривалий при -20 ° С | +4 ° С - добу Тривале зберігання в рідкому а юті | 3-5 днів при + 4 ° С. Заморожування знижує чутливість | На короткий час -при + 4 ° С, на тривалий - в рідкому азоті |
Перевірка адекватності взяття матеріалу | Мазки оцінюють під час тестування | Чи не практикується | Чи не практикується | Визначається, чи присутній ДНК |
потреба в | люмінесцентний мікроскоп | Центрифуга, | Комплект для ІФА | Ампліфікатор, обладнання для електрофорезу та ін., Для полімеразна ланцюгова реакція-аналізу |
Обробка проб | проста | трудомістка | стає | Вимагає суворої обережності, щоб не конгамініровать |
читання тесту | З об`єктивне і обтяжлива | Суб`єктивної, помірно стомлююче | Об`єктивне. | Об`єктивне, просте |
Час виконання | 30 хвилин | 12-72 години | 3:00 | 12-24 години |
Способи перевірки результату | повторний перегляд | повторний про | повторення тесту | Повторна проба або перетравлення ендонуклеазою |
Результат залежить від | досвіду мікроскопісти | Чутливості клітинної культури | Властивою потужності тесту | Доброю контролю та відсутності контамінації |
Використання як контролю лікування | обмежено | рекомендується | обмежено | Чи не практикується |
Здатність до підтримки штаму | немає | Так | немає | немає |
Викладене дозволяє зробити наступний висновок про лабораторні методи діагностики генітального хламідіозу: надійними способами встановлення діагнозу є ті, які спрямовані на виявлення збудника, його антигенів або генома. Серологічні методи слід вважати допоміжними.
