Імуноморфологічні методи - хламідійна інфекція в акушерстві та гінекології
Ці методи засновані на виявленні антигенних субстанцій за допомогою специфічних антитіл, з`єднаних з будь-якої міткою (флюоресцирующей, ферментної, радіоміткою). Найбільш поширені прямий і непрямий іммунофлюоресціентние методи пряма імунофлюоресценція і непряма імунофлюоресценція. Їх чутливість становить 90-100%, специфічність при дослідженні препаратів з урогенітального тракту - 85-100%. Однак застосування пряма імунофлюоресценція і непряма імунофлюоресценція вимагає правильної оцінки результатів, т. К. Флюоресцировать може зернистість в лейкоцитах.
Для взяття матеріалу використовуються спеціальні щіточки або дакроновий тампони. Для якісного фарбування препаратів необхідно використовувати спеціальні скла для імунофлюоресценції з лункою в середині скла. Слід особливо звернути увагу на те, що при нанесенні матеріалу тампон або щіточка повинні демонструватися по склу. Препарат повинен бути доставлений в лабораторію в день взяття матеріалу. У разі необхідності фіксовані протягом 1-2 хвилин холодним ацетоном препарати можна зберігати в побутовому холодильнику протягом 3 днів.
Послідовність операцій при використанні імунофлюоресцентних методів наступна. Препарат-мазок фіксують охолодженим ацетоном. Потім на нього наносять мічену сироватку або моноклональні мічені антитіла і поміщають його у вологу камеру в термостат на 15 хв. Для контрастування на препарат наносять бичачий альбумін, мічений родаміном, або синьку Еванса. Сучасні набори з моноклональними антитілами містять в своєму складі синьку Еванса. Після 15-хвилинної інкубації скла інтенсивно промивають фосфатно-сольовим буфером pH 7,2 або проточною водою. На висушені мазки наносять 1 краплю забуферованого гліцерину (9 мл гліцерину і 1 мл фосфатно-сольового буфера), накривають покривним склом і притискають фільтрувальної папером, щоб видалити надлишок рідини. Препарати переглядають в люмінесцентному мікроскопі "ЛЮМАМ" (Світлофільтри БС 8-2, СЗС 14-4, ФС 1-2, об`єктив х90, окуляр х10, власне збільшення бинокулярной насадки х 1,5) або люмінесцентному мікроскопі інших моделей з використанням об`єктивів х20, х40, х100.
Облік результатів проводять по наявності елементарних тілець в поле зору або в препараті (більше 5), флюоресцирующих яскраво-зеленим (яблучно-зеленим) кольором на тлі епітеліальних клітин, забарвлених в оранжевий або червоний колір.
Результат аналізу видається зазвичай на наступний день. Рекомендуються наступні варіанти відповіді: "Методом пряма імунофлюоресценція виявлені Chlamydia trachomatis", "Методом пряма імунофлюоресценція Chlamydia trachomatis не виявлені", "Рекомендується дослідження повторити (через відсутність клітин в препараті або неспецифічної флуоресценції)".
імунопероксидазний метод діагностики має схожість з імунофлюоресцентним. В якості маркера використовується фермент пероксидаза. виявлення комплексу "антиген - антитіло - пероксидаза" досягається гистохимической реакцією на пероксидазу з субстратом-індикатором 3-3 `діамінобензідінтетрагідрохлорідом - ДАВ. Продукт реакції забарвлюється в коричневий колір, що дозволяє виявити локалізацію антигену всередині клітини. Чутливість і специфічність методу зросли після введення в практику моноклональних антитіл і склали відповідно 100% і 92.4%.
імуноферментний аналіз
Даний метод заснований на виявленні розчинної антигену хламідій в досліджуваній пробі. Тест являє собою метод твердофазного імуноферментного аналізу. Клінічний матеріал беруть тампоном в спеціальні транспортні пробірки, які поставляються виробниками наборів, і доставляють в лабораторію протягом 48 годин на холоді. Перед транспортуванням зберігають при 4-6 С. До дослідження зразки не можна заморожувати.
Постановку реакції слід здійснювати строго за запропонованою фірмою інструкції. Після проведення всіх маніпуляцій враховують результат. Позитивні проби фарбуються в жовто-оранжевий колір. Інтенсивність забарвлення пропорційна кількості антигену С. trachomatis, абсорбованого на кульці або в осередку панелі. Точний результат визначають за допомогою спектрофотометра "Мультіскан" або іншого апарату, призначеного для цих цілей, при довжині хвилі 492 нм. Зразки, що дають значення поглинання вище або дорівнює значенню відсікаючого поглинання (cut-off), вважаються позитивними, т. Е. Вони говорять про наявність антигену С. trachomatis в досліджуваній пробі. Чутливість і специфічність імуно-ферментних методів діагностики становить відповідно 65-70% і 90-100%.
Результат дослідження видається через 1-3 дні. Варіанти відповіді: "Методом ІФА виявлені С. trachomatis", "методом ІФА С. trachomatis не виявлені".
