Біохімічні методи дослідження сож - виразкова хвороба шлунка
Відео: Вступ у лікаря гастроентеролога в Енгельсі
Відео: Діагностика на апараті Оберон
В останні роки з метою діагностики виразкової хвороби і передвиразковий стану застосовують біохімічні методи дослідження тканини МОР, отриманої методом сліпої і прицільної гастробіопсії. Зокрема, нами у хворих на виразкову хворобу та з передвиразковий станом вивчався амінокислотний фонд МОР, що відображає співвідношення в ній катаболічних і білково-синтетичних процесів (І. І. Дегтярьова, 1983 І. І. Дегтярьова, Є. В. Солодова, 1984- І. І. Дегтярьова, Є. В. Солодова, Е. В. Хоменко, Е. Ц. Тотева, 1987 І. І. Дегтярьова, Н. В. Харченко, 1991 Н. В. Харченко, 1993- I. Degtjaryova, G. Burchinsky, 1982).
Для визначення амінокислотного складу МОР, так само, як і сироватки крові, використовували метод рідинної колонкової хроматографії S. Moore, W. Н. Stein (1951), докладно описаний стосовно аналізу білкових гідролізатів і аналізу фізіологічних рідин (Дж. Б. Бенсон, Дж. А. Патерсон, 1974- Т. Д. Козаренко та співавт., 1981). Використовували автоматичні амінокислотні аналізатори ILC-SAH Jeol (Японія), ВС-200 (Німеччина) і ААА-881 (Чехія).
Для визначення вільних амінокислот сироватки крові 5 мл цільної венозної крові поміщали в конічну центрифужную скляну колбу ємністю 10 мл і давали згорнутися. Згустки крові видаляли зі стінок пробірки невеликій скляній паличкою і перемішували з усією пробою. Пробу центрифугировали при 2500/3500 об / хв протягом 15 хв. Потім брали піпеткою 2 мл сироватки крові і переносили в чисту центрифужную пробірку. Туди ж для звільнення від білків додавали 2 мл 3% водного розчину сульфосалициловой кислоти і все ретельно перемішували. Випав білок відокремлювали центрифугуванням протягом 15-20 хв при 2500/3500 об / хв. Надосадову рідину, що містить вільні амінокислоти, зливали в вакуумний ексикатор і випарювали.
Розгонку амінокислот здійснювали на цитратних буферах, розчиняли на цитратному буфері pH 2,2, елюювання амінокислот виробляли цитратними буферами pH 3,25 для кислих амінокислот, pH 4,25 - для нейтральних і pH 5,28 - для основних. Дослідження виконували при температурі 52 ° С. Розрахунок виробляли по S. Moore і W. Н. Stein. Кількість амінокислот висловлювали в мікромолі на 100 мл крові.
Для визначення вільних амінокислот МОР шматочки тканини, отримані методом аспіраційної або прицільної біопсії, зважували і потім розтирали, поступово додаючи бідистильовану воду (2 мл). Потім гомогенат тканини поміщали в конічну центрифужную пробірку місткістю 10 мл. Туди ж для звільнення від білків додавали 2 мл 3% водного розчину сульфосалициловой кислоти. Після ретельного перемішування випав осад відокремлювали центрифугуванням протягом 30 хв при 2500/3500 об / хв. Надосадову рідину, що містить вільні амінокислоти, зливали в вакуумний ексикатор і випарювали. Подальша підготовка амінокислот для дослідження абсолютно ідентична описаній нами вище для визначення вільних амінокислот сироватки крові.
Кількість вільних амінокислот МОР висловлювали в мікромолі на 1 г тканини.
При визначенні вільних амінокислот МОР у хворих на виразкову хворобу обох локалізацій нами виявлено різке, майже в 2 рази, збільшення їх сумарної кількості. При визначенні кількості окремих амінокислот в МОР також встановлено різке їх збільшення, причому, більшість з них (аспарагінова, глутамінова кислоти, серії, пролін, гліцин, аланін, метіонін) було збільшено в середньому на 50% - деякі (аргінін, лейцин) -в середньому на 30%, а треонин і валін - в середньому на 80%. Різке збільшення загальної кількості і окремих амінокислот в МОР можна пояснити різко посиленими процесами катаболізму, і зниженими процесами синтезу білка, характерними для виразкової хвороби, в результаті чого амінокислоти, не включаються в синтез білків. При аналізі процентного вмісту амінокислот в МОР встановлено, що, незважаючи на абсолютне збільшення кількості окремих амінокислот, процентне відношення більшості з них не відрізнялося від такого в МОР здорових. Отримані дані ще раз свідчать про те, що збільшення загальної кількості амінокислот і окремих їх представників залежить від катаболічних процесів і уповільненої синтезу білка в МОР при виразковій хворобі, а не від будь-яких специфічних реакцій, пов`язаних з обміном окремих амінокислот. Доказом цього служить також те, що не дивлячись на кількісне збільшення, процентний вміст незамінних і замінних амінокислот і їх коефіцієнта співвідношення, незамінних + полузаменімих і замінних амінокислот і їх коефіцієнта співвідношення не відрізняються від аналогічних показників у здорових.
Про зниження конкурентного включення амінокислот в поліпептидних ланцюг структурних і специфічних білків в МОР при виразковій хворобі свідчить різке зменшення (в 7,3 рази) коефіцієнта лейцин / ізолейцин, що також підтверджує різке зниження при даному захворюванні белковосінтетіческой можливостей сож-.
Про зниження белковосінтетіческой і посилення процесів розпаду білка в МОР при виразковій хворобі свідчать також дані, отримані нами при вивченні ультраструктури клітинних і неклітинних елементів і активності лізосомальних ферментів в МОР: порушення в структурах, відповідальних за синтез білка, і в уже синтезованому білковому матеріалі, а також різка активація лізосомальних апарату навіть в молодих, які не закінчили диференціацію, клітинах на тлі різкого посилення реакції на лізосомальніферменти КФ і АРС (І. І. Дегтярьова, 1983 І. І. Дегтярьова і співавт., 1985, 1990, 1991, 1992 - Н. В. Харченко, 1993).
Таким чином, зміни амінокислотного складу сироватки крові та МОР при виразковій хворобі пояснюються загальною катаболической спрямованістю білкового обміну в організмі, обумовленої нейрогенной дистрофією. Якщо МОР реагує на порушення трофіки тканин однонаправленно (посилення розпаду і уповільнення синтезу білків), то в печінці, що є аміностатом, єдиним органом, в якому, крім синтезу білка, що забезпечує гомеостаз організму, відбувається перетворення і синтез амінокислот, не тільки знижується синтез білка, але і порушується перетворення амінокислот.
Білковий обмін є основою регенерації тканин і порушення його у хворих на виразкову хворобу не може не впливати на розвиток і перебіг захворювання. Посилення катаболічних при зниженні белковосінтетіческой процесів в СО гастродуоденальної зони призводить, з одного боку, до прискорення загибелі клітин і зниження їх резистентності, з іншого - до уповільнення відтворюваності тканин. Отже, порушення протеїнового обміну з превалюванням розпаду над синтезом білків відображає одне з патогенетичних ланок виразкової хвороби, що призводять до рецидиву захворювання, що перешкоджає оновленню клітинного складу МОР і дванадцятипалої кишки, і загоєнню виразкового дефекту.
Для корекції виявлених нами порушень в лікувальний комплекс, який призначається при виразковій хворобі, слід включати препарати, що усувають нервово-трофічні порушення, що викликають катаболическую спрямованість білкового обміну в організмі, стимулятори білкового синтезу, що підсилюють белковосінтетіческой процеси в печінці, гастродуоденальної зоні і забезпечують активну репарацію. З огляду на виражений дефіцит пластичного матеріалу у хворих на виразкову хворобу, амінокислот, необхідних для побудови білків, а також підвищену потребу в ньому при призначенні стимуляторів білкового синтезу, ми вважаємо, що в лікувальний комплекс повинні бути включені препарати, що містять амінокислоти, - білковий гідролізат або чисті суміші амінокислот.
При хронічному первинному гастродуоденіті (передвиразковий стан) дослідження амінокислотного фонду МОР має таке ж діагностичне значення, як і при виразковій хворобі .. Встановлено (І. І. Дегтярьова, Є. В. Солодова, Е. В. Хоменеї, Е. Ц. Тотева , 1987 І. І. Дегтярьова, Г. І. Бурчинський, Е. В. Хоменко, Е. Ц. Тотева, 1987), що у даної категорії хворих різко зростає загальна кількість амінокислот як замінних, так і незамінних, що свідчить про гіперкатаболізму білків в МОР хворих з передвиразковий станом.
На клінічне значення визначення кількості рибонуклеїнової кислоти в СО гастродуоденальної зони вказують С. В. Пришва, Г. Е. Шмеркін (1986). Встановлено, що вміст РНК в гомогенатах СО шлунка і дванадцятипалої кишки у хворих на виразкову хворобу значно зменшується в порівнянні зі здоровими, причому найбільше зниження РНК спостерігається в області малої кривизни і цибулини дванадцятипалої кишки, в місцях найбільш частою локалізації хронічної виразки. У період ремісії кількість РНК в гомогенатах СО підвищується, але не досягає нормальних величин. Порушення обміну РНК при виразковій хворобі, на думку авторів, може бути причиною ослаблення резистентності гастродуоденальної зони, що створює умови для формування хронічної виразки.
Кількість ДНК в СО шлунка і дванадцятипалої кишки не відрізнялося від такого у здорових.
Загальна кількість нуклеїнових кислот в гомогенатах МОР визначали біохімічним, флуоресцентним етідіумбромідним методом і в модифікації С. В. Пришва і співавторів (1983);
