Дослідження виявлених активних хімічних сполук - фармакологічна регуляція психічних процесів

Уточнює і поглиблених досліджень ВИЯВЛЕНИХ АКТИВНИХ ХІМІЧНИХ СПОЛУК
Мета уточнюючих досліджень - перевірити і підтвердити дані і висновки первинних випробувань. Для цього повторюються основні для даного виду активності тести на більшій кількості тварин, проводиться порівняння з еталонним препаратом. Якщо висновки первинних випробувань підтверджені, показана висока активність нового речовини, раціональність його подальшого вивчення - починається етан поглиблених досліджень.
В цілі поглибленого дослідження входять наступні завдання:

1. визначити точно смертельну дозу препарату ЛД50;
2. дати кількісну оцінку кожного фармакологічного ефекту (з визначенням середніх показників - ЕД50, ЕД2 та ін.);
3. порівняти показник ефективності випробуваного речовини з таким же показником для еталонного препарату (вибір еталонного препарату в кожній групі залежить від спектра активності досліджуваного речовини);
4. порівняти випробуваний і еталонний препарати за показниками широти терапевтичної дії (відношення ЛД60 / ЕД60) і захисного індексу (відношення ТД50 / ЕД 50);
5. визначити динаміку основних ефектів препарату при його повторному введенні (два тижні) - поява нових властивостей-розвиток толерантності- кумуляції;
6. винести рішення про переваги даної речовини перед відомими препаратами групи і доцільності його подальшого дослідження з метою підготовки до клінічних випробувань в якості нового потенційного лікарського препарату;
7. визначити орієнтовно разову і добову дози препарату в клініці (що необхідно для планування досліджень але безпеки препарату, а в подальшому - для розробки інструкції по клінічного випробування препарату).

Для проведення уточнюючих і поглиблених досліджень потрібно 5-10 г речовини.
Методи, що застосовуються при поглибленому дослідженні препаратів, можна умовно розділити на обов`язкові та додаткові. Обов`язкові включають ті фармакологічні тести, які найбільш точно характеризують основна дія речовини, частина з них (поведінкові і тести взаємодії) перерахована вище. Додаткові тести можуть в значній мірі варіювати і залежать від можливостей та інтересів лабораторії, де проводиться дослідження нового препарату. Одні дослідники віддають перевагу вивченню складних поведінкових актів у тварин, інші - характеристиці електрофізіологічних процесів в мозку, треті - вважають за краще використовувати біохімічні підходи до вивчення спектру активності та механізмів дії нових препаратів. У всіх випадках вибір тих чи інших методів диктується особливостями спектра дії нового препарату, необхідністю якомога повніше охарактеризувати всі ефекти речовини.
В. В. Закусов [1967] ділив ці методи на наступні групи:
1) вплив на поведінку, 2) вплив на біоелектричну активність мозку, 3) вплив на біохімічні структури нервової системи, 4) вплив на вегетативні та гормональні реакції, 5) антагонізм і синергізм з іншими фармакологічними речовин.
Приблизно таке ж поділ фармакологічних методів, придатних для поглибленої характеристики нових психотропних речовин, призводить ДЕЛІНА-Стула [Delini-Stula, 1970 Theobald, 1970 Stille, 1974]: 1) методи, що грунтуються на взаємодії
досліджуваної речовини з певними фармакологічно активними средствамі- 2) дослідження дії речовини на спонтанне і умовне поведінку жівотного- 3) нейрофізіологічні методи-4) біохім1гческіе методи.
К. С. Раєвський [1976] виділяє три етапи у вивченні речовин володіють нейротропной активністю.

1. Первинний етап скринінгу, або первинний відбір, на якому використовуються методи: а) пролонгування наркотичного ефекту тіопентал-натрію-б) потенцирования наркотичного ефекту подпороговой дози тіопентал-натрію-в) вимірювання рухової активності- г) антагонізму з фенаміном (щодо посилення рухової активності) - д) взаємодії з судорожними ядамі- е) виявлення каталепсії і міорелаксаціі- ж) вивчення аналгетичних властивостей.
2. Другий етап скринінгу, на якому створюється остаточне уявлення про профіль дії нового з`єднання, проводиться за допомогою методів: а) вивчення ЕЕГ б) умовних рефлексів;

в) сумації нервових імпульсів в ЦНС-г) дослідження противорвотного дії речовин-д) вимірювання температури тіла-е) фенаміновой стереотіпіі- ж) дослідження впливу на серцево-судинну систему і вегетативну іннервацію.

1. Третій етап дослідження спрямований на вивчення токсичності речовини в гострому і хронічному експериментах, а також побічних ефектів.

Розглядаючи методи первинного фармакологічного вивчення ( «скринінгу») антидепресантів, М. Д. Машковський з співавт. [1983] не виділяє етапи їх вивчення в експеріменте- а всі методи, використовувані для характеристики цих препаратів, ділить на групи: а) фармакологічні методи, засновані на взаємодії з речовинами, що виявляють депресивний вплив на ЦНС-б) фармакологічні методи, засновані на взаємодії з речовинами, що активують центральну нервову систему-в) фармакологічні методи, засновані на зміні периферичних ефектів нейромедіаторних речовин-г) біохімічні методи первинного дослідження антідепрессантов- д) вплив на поведінкові реакції-е) обчислювальні методи.
При цьому автор відзначає, що застосування в «тестах взаємодії» речовин, що впливають на певні ланки нейрохимических процесів мозку, дає можливість використовувати результати цих дослідів не тільки для судження про потенційну антидепресивний активності, а й про деякі механізми дії препаратів. В якості таких тест-речовин розглядаються резерпін і тетрабеназін- нейролептики - похідні фенотіазинів, клонідин, барбітурати, аноморфін, Л-ДОФА- фенамін, фенілетіламін- 5-оксітріптофан, тріптамін- ЛСД, холиномиметики.
Все різноманіття методів, що застосовуються для поглибленого вивчення спектру дії психотропних препаратів, ми ділимо на сім великих груп.
I. Вивчення впливу психотропних препаратів на поведінку тварин:

1. на спонтанну поведінку - у відкритому полі- рухову активність;
2. на орієнтовні реакції, дослідницьке поводження;
3. на афективні реакції (страх, агресія), викликані: а) стимуляцією властивих тваринам афективних реакцій (використання агресивних тварин, показ кішці - миші, собаці - кішки, ізоляція та ін.), б) хімічними і фізичними впливами (введення деяких стимуляторів, наприклад фенамина, болюче подразнення лап самців струмом та ін.), в) роздратуванням і руйнуванням певних структур мозку, що регулюють афективний поведінка;
4. на формування умовних рефлексів, навчання, в тому числі «оперантное» навчання;
5. на складні поведінкові акти, пов`язані з внутрішньовидовими і міжвидовими взаємовідносинами тварин;
6. на експериментальні «неврози» і «психози», викликані: а) порушенням динаміки нервових процесів (зіткненням процесів збудження і гальмування, зменшенням дифференцировок і ін.), б) створенням «конфліктної ситуації», зіткненням позитивних і негативних емоційних реакцій, в) хімічними впливами - введенням психотомиметиками, стимуляторів, високих доз антидепресантів та ін. [Віхляєв, Клигуль, 1966- Вальдман та ін., 1973, 1979- Закусов, 1973- Раєвський, 1976- Розенбліт, Свірскіс, 1981- Cook, Weidley, 1957- Askew , 1963- Horovitz et al., 1966- Stein, Berger, 1971- і ін.]. Перераховані поведінкові тести добре характеризують дію транквілізаторів, нейролептиків, психостимуляторів, психотомиметиками, і для кожної групи речовин може бути виділено певний профіль поведінкових ефектів.

Нейролептики викликають каталепсію, пригнічують спонтанну активність тварин, блокують реакції страху і агресії, вироблення умовних рефлексів, попереджають Псіхотоміметіческіе дію різних агентів.
Транквілізатори, не викликаючи суттєвої знерухомлених, а іноді і стимулюючи рухову активність, зменшують реакції страху, попереджають розвиток експериментального неврозу.
Психостимулятори підвищують рухову, орієнтовну активність, облітають вироблення умовних реакцій, посилюють агресивну поведінку тварин. Псіхотоміметіческіе препарати порушують навчання, вироблення умовних рефлексів, дезорганізують поведінку тварин, викликають появу «неправильного» поведінки у вигляді незвичайних рухів назад, обертань, стрибків, шкереберть [Brawley, Dnffield, 1972- Otis et al., 1978- Shulgin, 1978- Stillman, Wielette, 1978].

1. Дослідження взаємодії речовин з відомими стимуляторами і блокаторами медіа, раторних систем мозку, снодійними

і іншими речовинами. Цей підхід до вивчення нейропсіхотропних препаратів виявився надзвичайно плідним, і його можливості постійно розширюються. Відкриття все нових агоністів і антагоністів медіаторних впливів на рецептори дозволяє проводити досить скрупульозний аналіз різних сторін впливу речовин на функції мозку. При цьому одночасно виявляється не тільки характер дії препарату, а й багато механізмів його ефектів. Більш того, є підстави вважати, що тести взаємодії набувають переважаюче значення не тільки при вивченні спектру активності нових хімічних сполук, але і при фармакологічному аналізі властивостей і функцій цих медіаторних систем.
У «тестах взаємодії» зазвичай визначається вплив випробуваного речовини на добре відомий ефект тест-препарату Визначається тривалість, вираженість цього ефекту у контрольних і дослідних груп тварин.
При цьому може виявляться- а) повна блокада препаратом викликаного ефекту, б) ослаблення його, в) посилення або / та подовження часу дії тест-речовини, г) відсутність змін в дослідних групах тварин в порівнянні з контролем.
Для кількісної оцінки дії речовин в тестах взаємодії визначається:
а) середня ефективна доза (ЕД50), що блокує досліджуване Дія тест-препарату у 50% тварин-
б) тривалість ефекту при його посиленні або частковому ослабленіі- вираженість його (в балах).
Як тест-препаратів частіше за інших використовуються стимулятори певних медіаторних систем мозку:

1. Взаємодія зі стимуляторами катехоламінових систем мозку, зокрема вплив на:

а) апоморфіновую стереотипію, гіпотермію у мишей і щурів апоморфіновую блювоту у собак-апоморфіновую агресивність у щурів
б) порушення, стереотипію і гіпертермію, викликану Л ДОФА (300-500 мг / кг), або зміна активності, пов`язане з дією Л-ДОФА в дозі 100-200 мг / кг-
в) фенаміновие збудження, стереотипію, гіпертермію, «групову токсичність фенамина» -
г) гіперактивність, стереотипію і гіпертермію, викликані феніл-етіламіном-
д) ефекти альфа-адренергічних препаратів Іохімбін і клонідину [Лапін, 1966, 1980 Щелкунов, 1966- Машковський, 1970, 1983 Арушанян, 1969, 1982- Everett, 1967- Janssen, 1967, 1970 Barnet et al., 1972- Ross, Russe, 1971- Costall, Naylor, 1973- Grabovska et al., 1973- Berensden et al., 1976- Puech et al., 1978- Kostowsky, Malatynska, 1980 Staub et al., 1980].

1. Взаємодія зі стимуляторами серотонінових і холино- рецепторів, вплив на:

а) гиперкинез - струшування головою, викликані 5-оксітріптофаном-
б) поєднане дію інгібіторів МАО і триптаміну, чий ефект посилюється під впливом перших препаратів (розвиваються гиперкинез і судоми) -
в) гиперкинез і судоми, саливацию і гіпергідроз, викликані ареколін або оксотреморін, нікотином та іншими холіноміметичними засобами [Corne et al., 1963- Dooley, Quock, 1976- Maj et al., 1977, 1982- Spenser, 1977- Delini-Stula , 1978].

1. Взаємодія з пригнічують речовинами різного типу дії-при цьому вивчається вплив на:

а) наркотичний ефект снотворних-
б) дію резерпіну, Тетрабеназин, індукують рухову загальмованість, птоз, гіпотермію-
в) ефекти нейролептических препаратів (хлорпромазина, тріфлуперазіна і ін.), що викликають у тварин адинамию, каталепсію, гіпотермію, птоз [Chen, Bohner, 1961- Morpurgo, 1962, 1971- Zetler, 1963- Boissier, Simon, 1964- Colpaert et al ., 1975- Nicolaou, 1980].

1. Взаємодія з Псіхотоміметіческіе препаратами (ЛСД, мескалін, псилоцибіном і ін.). Взаємодія з судорожними агентами, антагоністами ГАМК-коразолом, пікротоксину, бікукулліном, тіо-семікарбазідом і ін. [Бунатян, 1976- ситинські, 1977- Gluckman, 1971- Snyder, 1981].

Крім цього, в останні роки досліджується дія речовин на агоністи і антагоністи H1- і Н2-гістамінових рецепторів в зв`язку з виявленням таких властивостей в спектрі активності ряду психотропних препаратів-нейролептиків, антидепресантів [Green, 1964- Diffley et al., 1980].
Тести взаємодії найбільш чітко диференціюють групи психотропних препаратів.
Для нейролептиків характерна здатність блокувати ефекти апоморфина Л-ДОФА, фенаміну, потенціювати дію всіх речовин, що пригнічують функції ЦНС, попереджати ефекти психотомиметиками. Складний спектр активності антидепресантів виявляється і в цих опитах- вони підсилюють центральну дію фенаміну, апоморфина, Л-ДОФА, Іохімбін, в той же час продовжують ефекти снодійних, виявляють антагонізм з резерпіном, Тетрабеназин, іноді ареколін, оксотреморін. Для транквілізаторів типово блокуючий вплив на ефекти антагоністів ГАМК, здатність потенціювати дію снодійних.
Психостимулятори підсилюють і подовжують ефект всіх стимуляторів ЦНС, вступають в антагонізм з препаратами пригнічувала дії.

1. Електрофізіологічні методи дослідження спектра дії псіхонейротропних препаратів. Ця група методів включає вивчення впливу речовин на: а) спонтанну біоелектричну активність мозку (ЕЕГ) - б) зміни ЕЕГ, викликані різними препаратами (фенаміном, апоморфіном, Л-ДОФА, ареколін та ін.) - В) викликані потенціали в різних областях мозку

г) активність окремих нейронів.
У зв`язку з тим що вивчення змін ЕЕГ не завжди дозволяє чітко диференціювати групи псіхонейротропних препаратів, з цією метою використовуються різні математичні методи аналізу тонких зрушень біоелектричної активності мозку. Особливий інтерес представляє вивчення впливу речовин на функціональну асиметрію мозку [Рощина, 1980 Каркіщенко, 1982- Міляускас і ін., 1982- Neal, Bradley, 1978- Fink, 1978- Itil, Hermann, 1978].

1. Вивчення дії препаратів нейропсіхотропного профілю дії на периферичних ізольованих органах. Експерименти на гладких об`єктах дають важливу додаткову інформацію про дії речовин в області периферичних рецепторів: адрен, холін, серотонін, гістамінергіческіх, їх взаємодії з простагландинами, брадикініну, окситоцином і ін. Ці методи використовуються давно [Turner, 1965 Andrew, 1974 ] і доповнюють дані про спектр медиаторного дії речовин. Вони були особливо корисні, коли дослідження медіаторних систем мозку було обмежено і утруднене. Здатність речовин блокувати ті або Інші рецептори на периферії, як правило, поєднується з таким же дією в мозку. Тому доступні, легко здійсненні досліди на ізольованих органах можуть служити попереднім етапом вивчення їх взаємодії з медіаторнимі системами мозку. Вони характеризують, таким чином, не тільки периферичний, але і можливе центральну дію препаратів. Крім цього, досліди на гладких об`єктах, виявляють прямий вплив речовин на мембрану м`язових волокон.

Як об`єкти дослідження використовуються матка, сім`явивіднупротоку, відрізки тонкої кишки, трахея і ін. Вивчається дію речовин на: а) спонтанну скоротливу активність гладеньком`язового об`єкта-б) скоротливий відповідь на вплив медіатором (адреналіном, ацетилхолином, серотоніном, гістаміном), гормонами, брадикініном, RC1.

1. Біохімічні методи вивчення спектру і механізмів дії препаратів. Дана група методів зазвичай включає вивчення дії на: а) ферменти, що беруть участь в утворенні і метаболізмі біогенних амінів в мозку (МАО, КОМТ, тирозингідроксилази і ін.) - Б) зміст біогенних амінів і продуктів їх метаболізму в різних областях мозку, рідинах організму;

в) зворотний нейрональний захоплення медіаторов- г) ферменти мембран, що регулюють транспорт іонів, утворення цАМФ та ін. [Машковський і ін., 1976- Лаврецька і ін., 1978, 1980 Горкин, 1981- Раєвський та ін., 1982- Carlsson et al., 1969, 1978- Snyder, Coyle, 1969- Iversen, 1974- і ін.].
Біохімічний аналіз механізмів дії психотропних засобів тільки починає розширювати свої можливості. При цьому виявляються всі нові сфери впливу лікарських засобів на функції мозку, які можуть бути найбільш тонко проаналізовані за допомогою біохімічних підходів.

1. Біофізичні і фізико-хімічні методи дослідження дії речовин, що включають спеціальний аналіз впливу препаратів на структуру та функцію мембрани, іонні канали в мембранах нерва, на субклітинні освіти [Пірузян і ін., 1974].
2. Обчислювальні методи. Робляться спроби оптимізувати методи пошуку нових нейропсіхотропних препаратів за допомогою математичних методів прогнозування виду фармакологічної активності [Лаврецька і ін., 1977- Голендер, Розенбліт, 1978- Лексіпа і ін., 1979- Кабанкін і ін., 1981]. При цьому математичного аналізу піддаються: а) різні особливості структури активних сполук-б) фізико-хімічні характеристики молекул психоактивних речовин-в) кількісні показники, отримані в експериментах на тваринах і молекулярних моделях при вивченні відомих і нових хімічних сполук.

У лабораторіях психофармакологии і структурної хімії НДІ по біологічним випробувань хімічних сполук зроблена така спроба використовувати метод дискримінантного аналізу для прогнозування типу психотропної активності. При цьому були знайдені хороші класифікаційні критерії, що дозволяють за результатами описаного вище експериментального первинного тестування віднести будь-яке з`єднання до однієї з груп нейропсіхотропних препаратів. Цей метод виявляє і найбільш інформативні тести, достатні для чіткої характеристики кожного виду активності.
Використаний підхід може істотно полегшити оцінку експериментальних даних в умовах великого потоку надходять на первинні випробування з`єднань.
Певну допомогу в диференціації нових психотропних препаратів за групами активності надає використання в якості дескрипторів таких властивостей молекул, як: 1) ван-дер-Баал-сов обсяг, 2) молекулярна рефракція, 3) топологічні індекси - так звані молекулярні зв`язуючим, 4) число ароматичних ядер в молекулі, 5) кількість неподіленого нар у атомів азоту і кисню [Кабанкін і ін., 1981]. При цьому добре диференціюються всі групи психотропних препаратів. Тільки поділ нейролептиків і антидепресантів буває не завжди чітким, що вказує на необхідність врахування додаткових властивостей молекул цих препаратів, наприклад стеріческіх особливостей їх структури.

Оцінка продовженого дії психотропних препаратів і ефектів їх хронічного введення

Якщо на етапі первинних випробувань досліджуються результати одноразового введення речовини, то при поглибленому дослідженні виникає необхідність вивчити докладніше відставлені, продовжені ефекти і наслідки хронічного введення препаратів. Це пов`язано з появою нейролептиків продовженого дії, їх високою ефективністю і великою потребою медичної практики в такого роду препаратах. Підставою для вивчення нейропсіхотропних властивостей нових сполук в хронічному експерименті служить клінічний досвід, який свідчить про прояв основних ефектів антидепресантів і в значній мірі нейролептиків лише після їх двох-тритижневого застосування.
Наступні експериментальні дослідження підтвердили суттєві відмінності в дії деяких препаратів при одноразовому і тривалому введенні в організм [Аллікметс і ін., 1981- Leonard, Kafoe, 1976- Shildkraut et al., 1976- Montigny, Aghajanian, 1978- Wolfe et al., 1978 - Maj, 1982].
Використання в наших експериментах 7- і 14-денного введення речовин показало можливість отримання, таким чином, важливою додатковою інформацією про спектр активності речовин.
Це особливо стосується препаратів антидепресивної дії і речовин зі слабко вираженими нейропсіхотропнимі властивостями. Так, двотижневе введення тваринам антидепресантів в ефективній дозі чіткіше виявляє стимулюючий компонент в спектрі їх дії, здатність посилювати ефекти фенаміну, апоморфина, Л-ДОФА, антагонізм з клонідином. Хронічне введення амітриптиліну виявляє його побічні ефекти, які не виявляються при одноразовому введенні.
Багато речовин виявляють свою дію на центральну нервову систему тільки в умовах повторного застосування. Наприклад, стимулюючу дію екстрактів женьшеню виявляється тільки після його чотириденного введення. І навпаки, нейролептики продовженого дії в експерименті виявляють здатність викликати гіпотермію, каталепсію, блокувати ефекти апоморфина тільки через кілька годин або добу після одноразового введення, і цей ефект утримується триваліше, ніж у нейролептиків короткої дії.

Внутрішньомозковий введення речовин

Метод внутрімозкового введення речовин рідко використовується для пошуку нейропсіхотропних препаратів. Проте в деяких випадках він виявляється безсумнівно корисним.
Введення речовин в мозок через заздалегідь вживлену канюлю доцільно використовувати:
а) при вивченні речовин зі слабо вираженими психотропними властивостями (нейропептидів, ноотропних препаратів та ін.) -
б) в разі нечітко вираженого спектра дії препаратів-сумнівного характеру центральних еффектов-
в) для виявлення можливих побічних ефектів препаратів щодо центральної нервової системи-
г) з метою виявлення потенційних дофаміностімулірующіх властивостей речовин.
Речовини-а) можуть вводитися в шлуночки мозку-б) аппліціруется на сенсомоторную область кори- в) ін`еціруются в головку хвостатого ядра мозку.
Введення досліджуваних речовин в шлуночки мозку дозволяє в короткі терміни, протягом декількох хвилин, виявити навіть слабку дію речовин на центральну нервову систему. При цьому потрібні мінімальні кількості препарату (мікрограми, десяті і соті частки мг), що робить цей метод не тільки терміновим, але і економним.
При аплікації речовин на сенсомоторную область кори, що володіє низьким судорожним порогом, вдається виявити не тільки загальну дію на центральну нервову систему, а й епілептогенного ефекти. Відомо, що таким чином легко виявити провокуючі епілептогенного властивості пеніциліну, які тривалий час залишалися прихованими. Таким же чином вдається виявити потенційні епілептогенного властивості інгібіторів МАО, имипрамина, деяких нейролептиків (галоперидолу, тріфлуперазіна). При цьому однократне введення препарату виявляє ефект, який стає явним лише при тривалому, багаторічному їх вивченні в клініці [Чугунов та ін., 1976].
При введенні речовин в головку хвостатого ядра також проявляється їх спільна дія на ЦНС, поведінкові реакції. Однак, крім цього, вдається зареєструвати дофаміностімулірующіе ефекти. Препарати, що володіють такими властивостями, індукують асиметрію пози, обертальний поведінку тварин, яке може бути спеціально кількісно зареєстровано в ротометре [Лаврецька і ін., 1981- Ungerstedt, Arbuthnott, 1970].
Апоморфное, наприклад, викликає обертання щурів (7-14 в 1 хв) при введенні в головку хвостатого ядра. Деякі нейропептиди індукують обертання (2-3 в 1 хв) в дозі 20 мкг.
Нейролептики блокують обертальний поведінку, викликане апоморфіном і іншими дофаміностімулірующімі агентами.
Таким чином, внутрішньомозковий введення речовин може доповнювати програми експериментального вивчення нейропсіхотропних засобів і давати швидку і точну інформацію.

Програми поглибленого дослідження нейропсіхотропних засобів

Як уже підкреслювалося, програма поглибленого дослідження потенційного препарату з певним типом активності може варіювати в досить широких межах, включати як обов`язкові методи дослідження, без яких неможлива характеристика цієї групи препаратів, так і додаткові методики.
Як приклад може бути наведена програма поглибленого дослідження нейролептиків, яка використовується в лабораторії психофармакологии НДІ по біологічним випробувань хімічних сполук: 1) оцінка каталептичного ефекту-2) гіпотермія- 3) блокада апоморфіновой стереотипии, апоморфіновой блювоти, блокада індукованого апоморфіном обертального поведінки-4) блокада фенамінових ефектів (стереотипії і збудження) - 5) потенцирование гексеналового сна- 6) вплив на ефекти ареколін, нікотину, 5-оксітріптофана, коразола (в разі наявності ефекту - його кількісна характеристика) - 7) блокада ефектів психотоміметіки (ЛСД-25 або мескалина) - 8) вплив на умовну реакцію уникнення (негативне підкріплення);

1. вплив на ЕЕГ щурів і кроліков- 10) вплив на викликані потенціали у кроликів (транскаллозальние, зорові, слухові);
2. дію на ізольовані клітини гладеньких об`єкти- 12) вплив на дофамінчувствітельную аденилатциклазу мозку кроликів;
3. вплив на іонні канали в мембрані нервового волокна;
4. ефекти тривалого (14 днів) введення однієї дози препарату-15) тривалість ефекту однієї дози препарату-16) визначення широти терапевтичної дії, захисного індексу (ЛД50 / / ЕД50, тд 50 / ед 50) - 17) порівняння у всіх тестах з еталонним препаратом за кількісними показниками (хлорпромазином, якщо Препарат має сильні седативними властивостями-тріфлуперазіном, якщо переважає сильний каталептогенні і антіапоморфіновий ефект).

Програма поглибленого вивчення антидепресантів включає Наступні показники: 1) порівняння впливу на рухову активність тварин малих і великих доз препарату-2) потенціювання ефектів фенаміну, йохімбіна- 3) потенціювання ефектів апоморфіну, Л-ДОФА- 4) потенцирование гексеналового сну;

1. антагонізм з резерпіном, тетрабеназіном- 6) вплив на ефекти ареколін, нікотину, 5-оксітріптофана, коразола- 7) антагонізм з клонідіном- 8) вплив на клітини гладеньких ізольовані об`єкти (сім`явивіднупротоку, матка, кишка) з визначенням впливу на ефекти серотоніну, ацетилхоліну , адреналіну, фенаміну, гістаміна- 9) вплив на ЕЕГ, викликані потенціали;
2. вплив на активність МАО мозку і печінки-зворотне захоплення норадреналіну, дофаміну, серотоніна- 11) ефекти тривалого (двотижневого) введення препарату (дія на апоморфіновие агресивність і гіпотермію у щурів, на ефекти клонідину, фенамина у мишей) - 12) визначення показників широти терапевтичної дії і захисного індексації 13) порівняння за всіма кількісними показниками з еталонними препаратами (имипрамином або амітриптиліном).

Таким же чином складені програми поглибленого вивчення транквілізаторів, психостимуляторів, психотомиметиками, снодійних.
Після закінчення етапу поглиблених досліджень проводяться наскрізні випробування, мета яких виявити, інші види активності речовини, його здатність впливати на серцево-судинну, дихальну, нирково-видільну, імунну та інші системи організму. На цьому етапі застосовуються і деякі методи фізико-хімічних і біофізичного профілів, які розширюють уявлення про спектр дії речовини на організм і дають матеріал для судження про механізми дії препарату. Вони виконуються спеціалізованими лабораторіями та включають вивчення дії активної речовини на біоенергетичні процеси в клітині, структуру мембрани, функціонування ряду ферментів, білка за допомогою методів ЕПР, ЯМР і ін.
Описані принципи і методи пошуку, вивчення в експерименті нових препаратів, центрального, псіхонейротропного дії носять традиційний характер. Вони проходять шлях від синтезу речовини до виявлення всього набору його ефектів щодо організму.
Однак можливий і інший шлях, нерідко іменований «конструюванням ліків», «drug design», який повинен йти зворотним шляхом - від бажаних властивостей препарату до його синтезу. До сих пір на даному шляху ще не було досягнуто суттєвих успіхів, незважаючи на певні зусилля вчених. Це можна пов`язати з вкрай скупими відомостями, які мала наука про молекулярно-біологічних механізмах дії лікарських засобів.
Тільки в самий останній час з`явилася можливість отримати достовірні дані про взаємодію деяких груп нейро- психотропних препаратів з рецепторами мозку. Вони засновані на вивченні зв`язку радіолігандов з рецепторами і здатності активних препаратів витісняти радіоліганд з цього комплексу. Співробітник лабораторії М. М. Кац робить спробу, проаналізувавши особливості зв`язку мічених нейропсіхотропних коштів з рецептором, відтворити топологію активних центрів рецептора і на цій основі прогнозувати структуру нових з`єднань, здатних більш ефективно зв`язуватися з цим рецептором. У наступному розділі наведено приклади принципи моделювання топології активних центрів Д2-дофамінових рецепторів.