Комбіновані гістохімічні методи (для полісахаридів і протеидов) - основи гістології
Перевага методів - виявлення на одному зрізі двох різних хімічних компонентів білкової і полисахаридной природи.
Комбінований метод виявлення полісахаридів (по Риттеру - Олессону)
(Фіксатори формалін, 10% формалін в 90% спірте- заливка в парафін)
Є поєднанням двох методів - ШІК- реакції і методу Галі, що дає можливість виявляти в одному і тому ж зрізі кислі мукополісахариди і мукопротєїди.
Метод. 1. Зрізи Депарафінірованние і довести до води.
- Обробити за методом Галі і перед докраской ядер провести ШИК-реакцію, а потім добре промити в дистильованої воді.
- Збезводнити, просветлить, укласти в бальзам. Результат. Кислі мукополісахариди пофарбовані в синій колір, мукопротєїди - в пурпурово-червоний.
Комбінований метод виявлення білків і нейтральних полісахаридів
(Фіксатори - Карнуа, 10% формалін)
Застосування даного методу забезпечує одночасне виявлення в зрізах білка і нейтральних полісахаридів і вдало відображає структурну і хімічну організацію досліджуваних мікроструктур.
Суть методу полягає в тому, що барвник Проціон зв`язується з деякими амінокислотними залишками білка, а ШИК-реакція забарвлює нейтральні полісахариди.
робочі розчини
Реактив Шиффа (спосіб приготування див. С. 270). Сірчиста вода (спосіб приготування див. С.270). Розчин перйодати: 250 мг перйодатом розчинити в 100 мл теплої дистильованої води.
Розчин Проциона блакитного (по В. Б. Іванову): 100 мг фосфатного буфера pH 5,6.
Метод фарбування (парафінові зрізи)
- Довести зрізи до води.
- Помістити на 10 хв в перйодатом.
- Промити в двох порціях дистильованої води.
- Помістити в реактив Шиффа на 20 хв.
- Промити в трьох порціях сірчистих вод по 3 хв у кожній.
- Промити в проточній воді протягом 30 хв.
- Обполоснути в дистильованої воді і перенести в 0,1% розчин Проциона на 40 хв при температурі 50 ° С.
- Обполоснути в двох порціях дистильованої води.
- Збезводнити, просветлить, укласти в бальзам. Результат. Структури, що містять білок, фарбуються в яскраво-синій, а вуглеводи - в яскраво-червоний колір.
