Безин`екціонний метод вивчення судин по ст. В. Купріянова - основи гістології

Безин`екціонний метод вивчення судин по В. В. Купріянова (імпрегнація нітратом срібла)
Даний метод дозволяє не тільки виявити судинну мережу, а й визначити будову судинної стінки і приналежність судин до певного ланці мікроциркуляторного русла, а також взаємовідношення судин з навколишніми тканинами.
Перш ніж приступити до імпрегнації, досліджуваний матеріал фіксують в 12% розчині нейтрального формаліну (тканини тварин - не менше 7 діб, тканини людини - не менше 14 діб).
З шматочків тканин готують зрізи на заморожувати мікротому (товщиною 20 мкм і більше в залежності від цілей дослідження).
Плівковий матеріал, що складається з тонких плівок (очеревина і т.д.), імпрегніруются цілком (тотально).
Товсті плівки попередньо розшаровують під бінокулярної лупою з допомогою очного скальпеля і пінцета.
Підготовка посуду - см. С. 145.

робочі розчини

Розчин нейтрального формаліну 12% розчин звичайного (кислого) формаліну 1%
Розчин звичайного (кислого) формаліну 0,5% (Всі розчини формаліну можна готувати заздалегідь, так як вони витримують тривале зберігання.)
Розчин нітрату срібла 20% (приготування і умови зберігання см. С.249).
Розчин аміакати срібла (готують малими порціями безпосередньо перед приміщенням об`єкта, см. С.249).
Аміачна вода - 25% водний розчин аміаку (можна готувати перед початком імпрегнації і тримати в щільно закритому посуді) - розводять дистильованою водою 1: 1.
Спирт 60%.
Дистильована вода.
Водопровідна вода для видалення хлоридів (повинна відстоюватися в посудині не менше 1 добу).
Кількість розчинів визначається обсягом майбутньої роботи.

техніка імпрегнації

1. Промити зрізи в проточній воді 2 ч з подальшим дворазовим обполіскуванням в дистильованої воді.
2. Помістити в 60% спирт на 30 хв з подальшим дворазовим обполіскуванням в дистильованої воді.
3. Перенести в 20% розчин нітрату срібла на 1 ч (обов`язково в темряві!) В термостат при температурі 37 ° С (у разі відсутності термостата обернути посудину в чорний папір і поставити під настільну лампу).
4. Промити в дистильованої воді 3 хв.
5. Провести через чотири стаканчика з 1% кислим формаліном (якщо розчин в четвертому стаканчику ще мутніє, то необхідно продовжити проведення до повної прозорості останньої порції).
6. Просушити фільтрувальним папером.
7. Помістити в розчин аміакати срібла на 2-3 хв.
8. Перенести об`єкт в 0,5% кислий формалін (підігрітий до кімнатної температури) і тримати до появи жовто-коричневого забарвлення.
9. Промити в 25% розчині аміаку 3-5 хв.
10. Промити в дистильованої воді до зникнення запаху аміаку.
11. Провести через батарею спиртів зростаючої концентрації (70%, 80%, 96% I, 96% II), карбол-ксилол і укласти в бальзам.

Результат: імпрегніруемие структури пофарбовані в коричневий колір.