Техніка виготовлення гістологічних препаратів - основи гістології

Відео: Етапи виготовлення гістологічних препаратів

Хороший гістологічний препарат повинен відповідати таким основним вимогам: 1) досліджувана тканина повинна в максимальному ступені зберігати своє прижиттєве строеніе- 2) зріз повинен бути досить тонким і прозорим (для того щоб через нього вільно проникали промені світла, що проходить) - 3) досліджувані мікроструктури повинні чітко виділятися на загальному тлі препарату.
Саме на забезпечення цих вимог і спрямовані всі зусилля в процесі приготування мікроскопічного препарату.
Перше з умов забезпечується своєчасним взяттям і належної фіксацією досліджуваного матеріалу, друге - якісним приготуванням і обробкою зрізів, третє - відповідної забарвленням досліджуваних мікроструктур.

Взяття матеріалу для виготовлення гістологічних препаратів

Збір матеріалу є першим етапом в приготуванні гістологічних препаратів, і від того, наскільки правильно виконана ця процедура, залежить успіх всієї роботи. Існує кілька шляхів отримання матеріалу: 1) від тварин, забитих спеціально для цих цілей-2) від тварин і людей в результаті прижиттєвого оперативного видалення шматочків тканин з органів живого організму (біопсія) - 3) взяття матеріалу від трупа.
Там, де можливо, слід віддати перевагу перші два способи, так як вони дозволяють приготувати препарати, найбільш повно відображають прижиттєве стан мікроструктур.
Якість трупного матеріалу знаходиться в прямій залежності від часу, що пройшов з моменту смерті організму, так як в органах і тканинах дуже скоро починають розвиватися посмертні зміни. Про це слід постійно пам`ятати і по можливості прагнути до максимального скорочення термінів взяття матеріалу. У нашій країні розтин трупів людей дозволено не раніше ніж через 12 годин після констатації смерті лікарем. Лише в окремих випадках допускається більш раннє розтин в присутності комісії, що складається не менше ніж з трьох лікарів (Наказ Міністерства охорони здоров`я СРСР № 667 від 15.10.70 р).

Умертвіння експериментальних тварин

У лабораторній практиці застосовують ряд методів умертвіння експериментальних тварин: відсікання голови (декапитация), умертвіння за допомогою наркозу, пропускання електричного струму через тіло тварини, введення в кровоносне русло повітря (уколом в серце або внутрішньовенно) або в плевральну порожнину ефіру (хлороформу).
Вибір методу диктується видом тваринного і цілями дослідження, але найбільшого поширення в лабораторній практиці отримали перші два способи умертвіння.
Відсікання голови (декапитация) є основним способом умертвіння дрібних лабораторних тварин (жаби, миші, щури) і здійснюється за допомогою ножиць.
Для декапитации більших лабораторних тварин (морські свинки, кролики, кішки, собаки) застосовують спеціальні верстати, в головній частині яких є пристрій з фіксацією голови і падаючим на шию важким ножем (гільйотина).

Відео: Гистологическая техніка

Розтин лабораторних тварин

Після умертвіння тіло тварини швидко фіксують в положенні на спині. Жаб, тритонів, мишей та інших дрібних лабораторних тварин фіксують на дощечках, воскових або пробкових пластинках (рис. 56), приколюючи за розтягнуті в сторони лапки. Для фіксації середніх і великих лабораторних тварин використовують спеціальні верстати або ж виготовлені для цих цілей дошки (оцинковані або пофарбовані з вбитими по краях гачками або гвоздиками для прив`язування кінцівок).

Мал. 56.
Розтин лабораторного тварини.

Техніка розтину черевної та грудної порожнин для всіх лабораторних тварин однакова. Однак у тварин, що мають шерсть, спочатку слід посікти досить широкий шкірний клапоть, щоб уникнути забруднення внутрішніх органів. Для цього, захопивши і піднявши (за допомогою хірургічного пінцета) шкіру нижньої частини стінки живота по середній лінії, підрізають ножицями утворилася складку у напрямку до голови, зрізуючи шкірний клапоть на потрібному протязі.
Потім слід змінити ножиці (або очистити їх від прилип вовни) і видалити вологим тампоном шерсть, що потрапила на утворену «доріжку».
Розтин черевної порожнини. Нижню частину стінки живота піднімають пінцетом по середній лінії (щоб не пошкодити органи), прорізають ножицями вхід в черевну порожнину, вводять туди одну з браншей (але обов`язково тупу) і розрізають стінку догори до грудини. Потім беруть кровоспинні затискачі, захоплюють ними внутрішні шари стінки живота разом з очеревиною і відвертають назовні, розкриваючи черевну порожнину.
Розтин грудної порожнини. Розтин виробляють двома розрізами через реберні хрящі по обидва боки від грудини від низу до верху. Утворився костнохрящевой клапоть видаляють.
У дрібних лабораторних тварин слід розкрити одномоментно черевну і грудну порожнини для забезпечення досить вільного доступу до внутрішніх органів, у великих же розкривати тільки ту порожнину, звідки необхідно брати органи для дослідження.