Виявлення (сумарне) білків - основи гістології

Відео: Презентація на тему "БУДОВА БІЛКІВ"

Білки - природні полімери амінокислот, що входять до складу переважної більшості клітинних і тканинних структур. З ним пов`язані пластичні, енергетичні, транспортні та ферментні процеси. Тому гистохимическое їх виявлення має важливе значення для характеристики змін, що відбуваються в клітинах і тканинах (як в нормі, так і в патології).
З існуючих методів найбільшого поширення набув метод сумарного виявлення білків по Данієллі, який вдало модифікований радянським гістохіміком М. Г. Шубич (1963).

Виявлення білків (сумарне) за методом Данієллі (в модифікації М. Г. Шубіна)

(Фіксатори Карнуа, Бродського, 10% нейтральний формалін)
Суть методу полягає в тому, що гістологічні препарати спочатку піддають дії трис-діазонію розаніліна (основного фуксину), який реагує з багатьма амінокислотними залишками тканинних білків. Для посилення забарвлення їх обробляють Н-кислотою, яка з`єднується з реакційноздатними групами трісдіазонія, вже пов`язаного з білками. Інтенсивність забарвлення визначається концентрацією білків в тій чи іншій гістологічної структурі.
робочі розчини
Двунормальний (2N) розчин хлористоводневої кислоти. До 20мл концентрованої хлористоводневої кислоти (щільність 1,19) додають 80 мл дистильованої води.
Розчин основного фуксину. Розчиняють 4 г основного фуксину (марка «для фуксінсерністой кислоти») в 100 мл 2N розчинухлористоводородной кислоти (розчин можна зберігати тривалий час).
Водний розчин нітриту натрію.
Розчиняють 4 г нітриту натрію (NaО2) в 100 мл дистильованої води (розчин можна зберігати в холодильнику).
Основний розчин трісдіазонія. У пробірку наливають 2 мл розчину основного фуксину і потім по краплях при постійному погойдуванні пробірки додають 2 мл розчину нітрату натрію. Суміш протягом 30-60 с набуває солом`яно-жовтий колір.
Робочий розчин трис-діазонію. Додають 0,5 мл основного розчину трис-діазонію до 100 мл дистильованої води, попередньо забуференной додаванням 20 мл ацетатвероналового або іншого буфера pH 7,9 (робочий розчин трис-діазонію зберігається протягом декількох годин).
Насичений розчин Н-кислоти. Розчиняють 1 г Н-кислоти в 50 мл ацетатвероналового або іншого буфера pH 9,2.

Відео: Будова клітини. Будова і функції клітини. життя клітини

Метод фарбування (парафінові зрізи)

1. Довести зрізи до води.
2. Помістити в робочий розчин трис-діазонію на 10-20 хв (більш точний час інкубації підбирають дослідним шляхом).
3. Промити в дистильованої воді.
4. Промити в трьох змінах ацетатвероналового або іншого буфера pH 9,2 за 2 хв у кожній.
5. Перенести в насичений розчин Н-кислоти на 15 хв.
6. Ретельно промити в дистильованої воді.
7. Знешкодити, просветлить і укласти в бальзам. Результат. Гістологічні структури фарбуються в червоно-фіолетовий колір різної інтенсивності.

Відео: № 113. Органічна хімія. Тема 20. Жири. Частина 1. Загальне поняття про жири

Відео: Лекція 1.1 | Основні поняття в хімії | Надія Танцура | Лекторіум