Ультратом - основи гістології
Відео: шкіра З волосся тонке шкіра SKIN AND HAIR гістологічну будову
Відео: Ембріологія. 1. Прогенез. Початковий період: запліднення
Ультратом (основні принципи пристрою і приготування зрізів)
Електронно-мікроскопічна техніка дослідження біологічних об`єктів з перших кроків зіткнулася з труднощами одержання досить тонких (10-30 нм) зрізів досліджуваних об`єктів. При великій товщині зображення одних структур як би «накладається» на зображення інших і їх вивчення стає неможливим.
Подолати ці труднощі дозволяє техніка ультратонкого різання. Для цієї мети застосовують спеціальні прилади - ультратоми. У нашій країні найбільшого поширення набули ультратоми Сумського заводу і шведської фірми «ЛКБ». Рідше використовують прилади австрійської фірми «Рейхард» і чехословацький прилад «Тесла» (рис. 73).
Головним принципом в роботі більшості сучасних ультратомов є теплове розширення металевого стержня, яке дозволяє здійснювати мікроподачі об`єкта до нерухомо закріпленому скляному ножа.
Мал. 73.
Ультратом.
1 - чавунна станіна- 2 - мікроскоп- 3 осветітель- 4 - несучий стержень- 5 столик для скляного ножа- 6 - пульт управління.
Приготування ультратонких зрізів передує ряд підготовчих операцій:
- виготовлення скляних ножей- їх найбільш широко застосовують в електронно-мікроскопічних лабораторіях- виготовляють ножі безпосередньо перед ультратоміей на приладі «ножеделателе» з смужки скла певного сорту;
- приготування опорних сіток для ультратонких зрізів - нанесення на сітку плівки з формвара, коллодия, вуглецю;
3) підготовка до ультратоміі. Цей етап має назву заточування блоку: ділянці об`єкта, що підлягає різанню на ультратоме, на спеціальному приладі пірамітоме надають форму чотиригранної усіченої піраміди (з вершиною, що має форму трапеції).
Далі настає найбільш відповідальний момент - момент виготовлення першого ультратонкого зрізу об`єкта. Для цього необхідно:
- включити ультратом;
- закріпити блок в блокодержателе;
- змонтувати на ножі ванночку для рідини, на поверхню якої збирають зрізи, закріпити ніж в приладі в потрібному положенні;
- підвести ріжучу кромку ножа максимально близько до поверхні верхньої межі заточеного блоку (зазвичай це досягається методом «висвітлювання відблиску» від освітлювача ультратома на гладкій поверхні верхньої межі блоку);
- заповнити ванночку ножа рідиною (найчастіше дистильованою водою), вручну отримати перший повний зріз об`єкта;
- включити автоматичний режим роботи приладу на необхідну товщину зрізів;
- отримані зрізи змонтувати на опорну сітку і, випивши фільтром, помістити в контейнер для транспортування і зберігання сіток з ультратонкими зрізами.
Отримані ультратонкі зрізи вимагають подальшої обробки (як і світлооптичних) з метою виявлення необхідних структур об`єкта дослідження. Для цього ультратонкі зрізи на опорних сітках обробляють певними розчинами барвників. Найбільш часто для цієї мети використовують розчини свинцю і уранілацетатом.
У ряді випадків успіх дослідження залежить від зіставлення даних електронно-мікроскопічного та светооптического вивчення, причому одних і тих же структур об`єкта. Для цієї мети готують напівтонкої зрізи товщиною 1-2 мкм (1000-2000 нм). Їх можна отримати як на ультратоме, так і на пірамітоме. Потім зрізи монтують на звичайних предметних стеклах і забарвлюють відповідно до завдань дослідження. Найбільш поширеною є методика фарбування напівтонку зрізів водним розчином 1% метилового синього і 1% бората натрію (бура) (1: 1).
Слід підкреслити, що вище викладені лише загальні принципи підготовки матеріалу до дослідження в електронному мікроскопі. Для більш поглибленого ознайомлення з методами електронної мікроскопії необхідно звернутися до спеціальної літератури. На наш погляд, досить кваліфіковано і в той же час є це питання висвітлено в книзі Б. Уїклі «Електронна мікроскопія для початківця» (М., 1975).
