Фарбування еластичних волокон методом унни-тенцера, резорцин-фуксином - основи гістології
Фарбування еластичних волокон методом Унни-Тенцера (фіксація по Буену)
Метод дозволяє чітко виявляти еластичні волокна сполучної тканини. Можна використовувати з однаково хорошим результатом різні фіксатори.
Розчин барвника: 1г орсеїном розчиняють в 100 мл 70 ° спирту. До цього розчину додають 1 мл аптечної хлористоводородной кислоти (25%). Розчин придатний до вживання відразу після приготування. Можна повторно використовувати розчин, але більше 1 тижня зберігати його не слід.
фарбування
- З дистильованої води зрізи переносять в розчин барвника на 40-60 хв.
- Обполіскують зрізи в дистильованої воді і 96% спирті.
- Диференціюють в абсолютному спирті під контролем мікроскопа.
При цьому фон майже повністю знебарвлюється. Після диференціювання зрізи прояснюють в ксилолі і укладають в канадський бальзам. Якщо диференціювання в абсолютному етиловому спирті не дає бажаних результатів, можна застосувати безводний метиловий спирт.
Час фарбування тотальних препаратів (наприклад, серозні оболонки) необхідно збільшити до 3-6,12 і навіть 24 год.
Для фарбування ядер клітин зрізи після фарбування в розчині орсеїном обполіскують дистильованою водою і підфарбовують гемалауном або іншим гематоксилином.
Якщо матеріал був фіксований в рідини Буена, ядра НЕ дофарбовував, так як вони і без того мають гарний фіолетовий колір.
Результат. Еластичні волокна пофарбовані в коричнево-червоний колір, фон має слабо-рожевого відтінку. Погані результати фарбування свідчать про погану якість орсеїном. Часто доводиться визначати час фарбування дослідним шляхом.
Фарбування еластичних волокон резорцин-фуксином (метод Вейгерта) (фіксація - 12% формалін)
робочі розчини
Перший розчин: 0,5 г основного фуксину і 1 г резорцину розчиняють в 50мл дистильованої води. Другий розчин: 2 г хлориду заліза (3 +) розчиняють в 10 мл дистильованої води.
Перший розчин нагрівають в ерленмейеровской колбі до кипіння і поступово додають до нього другий розчин. Суміш, обережно збовтуючи, обережно кип`ятять протягом 5 хв, потім охолоджують і профільтровивают. Фільтрат виливають. Осад разом з фільтром після попереднього підсихання переносять в чашку, заливають 70 мл 96% спирту і обережно нагрівають до кипіння на водяній бані для розчинення осаду. Після цього залишки осаду на фільтрі соскабливают в спирт. Розчин охолоджують, додають до нього 1 мл аптечної хлористоводородной кислоти (25%) і профільтровивают. Розчин можна застосовувати відразу після приготування. Він може зберігатися кілька місяців.
фарбування
З 80% спирту зрізи переносять в розчин барвника на 20-30 хв.
- Промивають зрізи в проточній воді 1-2 хв.
- Для знебарвлення фону зрізи диференціюють в 96% спирті (під контролем мікроскопа).
- Зневоднюють в абсолютному спирті, просвітлюють ксилолом, укладають в канадський бальзам. Не можна використовувати карбол-ксилол, так як карболова кислота викликає знебарвлення.
Результат. Еластичні волокна забарвлюються в чорно-синій колір.
Для підфарбовування ядер до фарбування резорцін- фуксином використовують квасцовий кармін або фуксінсерную кислоту.
