Взяття і етикетування матеріалу - основи гістології
Відео: Авторська програма «Медицина в контексті», тема: «Околочасовие біологічні ритми»
Головними вимогами при взятті матеріалу є: максимальне скорочення термінів взяття, мінімальне травмування тканин, створення оптимальних умов для фіксації.
Перше і друге вимоги забезпечуються хорошим освоєнням техніки умертвіння і розкриття, а також застосуванням дуже гострих ріжучих інструментів (скальпель, бритва, ножиці).
При висічення матеріалу необхідно максимально дбайливо поводитися з тканинами: ділянки органу, які зазнали травмування (наприклад, при затиску пінцетом), не слід залишати для дослідження.
Інструмент для розтину і, особливо для взяття матеріалу необхідно зберігати окремо, своєчасно заточувати і не застосовувати для інших цілей.
Сприятливі умови для фіксації створюються правильним вибором розміру фіксованої матеріалу, бо необхідно забезпечити рівномірний і порівняно швидке проникнення фіксує рідини на всю його товщину. Тому потрібно вирізати шматочки товщиною не більше 5 - 10 мм. Поперечний ж і поздовжній розміри не мають такого важливого значення і визначаються завданнями дослідження.
Слід пам`ятати, що попередження досліджуваного матеріалу від висихання є одним з найважливіших умов. Тому виробляти умертвіння і розтин тварин слід лише після того, як підготовлено все необхідне для швидкої фіксації. Якщо підсихання все ж можливо, то досліджуваний матеріал необхідно змочувати розчином хлориду натрію, змочування водою категорично забороняється, так як в силу різниці осмотичного тиску вода проникає в тканини і викликає руйнування мікроструктур.
Вирізання шматочків для фіксації є одним з відповідальних етапів в приготуванні якісних мікропрепаратів і в дослідницькій практиці і, як правило, повинно проводитися самим дослідником. Якщо ж цю операцію виконує лаборант, то він повинен знати основні особливості анатомо-гістологічної будови органів, щоб правильно вибрати місце і напрям розрізу, а також величину вирізуваного шматочка.
Так, якщо орган складається з ділянок, різних за своєю будовою, необхідно виробляти розріз таким чином, щоб всі вони потрапили в шматочок, а при неможливості - брати шматочки окремо з кожної ділянки. Наприклад, при взятті шматочків мозку людини або великих лабораторних тварин доводиться вирізати ділянки з певних відділів. З нирки можна вирізати один шматочок, що охоплює всю товщину органу від капсули до миски, що забезпечує потрапляння в нього всіх верств. Якщо ж орган має однорідну будову (більшість залоз, м`язи), то вибір місця для вирізання шматочка не має великого значення.
Особливі прийоми потрібні для взяття матеріалу, що має будову плівок, і з порожнистих м`язових органів, що вистилають слизовою оболонкою, так як плівки в фіксує рідини зморщуються, а стінка полого органу після розрізання внаслідок скорочення м`язової оболонки згинається дугою слизовою оболонкою назовні (кишечник, стравохід, шлунок , сечовий міхур і т.д.). Тому, перш ніж брати такий матеріал, необхідно ванночку або скляну чашку з плоским дном залити розплавленим воском так, щоб товщина покриття дорівнювала 1,5 - 2 см, і дати йому охолонути. Слід також приготувати голки для наколювання (металеві з нержавіючого матеріалу, скляні або рослинні), що фіксують рідини і лише після цього приступити до взяття матеріалу.
Замість воскових подушок для наколювання препаратів можна застосовувати пробкові пластинки, які для видалення з них таніну (дублячу речовину) слід попередньо кілька разів прокип`ятити у воді і зберігати в 70 - 80% спирті, а також шматочки картону.
Якщо необхідно приготувати гістологічний препарат з стінки кишечника, січуть потрібний відрізок органу, споліскують його в фізіологічному розчині хлориду натрію (щоб не висохла серозна оболонка), розрізають уздовж (навпроти брижі) і наколюють за допомогою голок на воскову або коркову подушку в розправленому стані слизовою оболонкою догори. При расправлении потрібно стежити, щоб не перерозтягнутому взятий шматочок, так як це призведе до спотворення дійсного взаємини шарів і деформації тканин. Потім в чашку з воском наливають фіксуючу рідину таким чином, щоб струмінь не потрапляла на слизову оболонку і щоб весь матеріал був покритий повністю. При наколюванні на пробку її опускають в посудину з фіксуючою рідиною вниз стороною, до якої прикріплений об`єкт.
Подібним чином беруть матеріал з стінки шлунка і стравоходу, а також об`єкти, що мають плівкове будова (брижа, сальник, мозкові оболонки).
Після 1 / 2-2 ч перебування в фіксує рідини опрацьований матеріал звільняють від голок, вирізають шматочок, вибравши потрібну ділянку, і поміщають в посудину з фіксатором для продовження фіксації.
Застосовують і інший спосіб фіксації невеликих порожніх органів - без розрізання їх стінок. Для цього потрібний відрізок органу перев`язують з одного кінця, заповнюють фіксує рідиною і, перев`язавши протилежний кінець, поміщають в посудину з фіксатором. Цим досягається більш швидке проникнення фіксує суміші в тканини органу (одночасно з двох сторін) і збереження природної форми органу.
Для того щоб легше було орієнтувати шматочки порожнистих органів в поздовжньо-поперечному напрямку при заливці і приготуванні мікропрепаратів, необхідно взяти за правило вирізати їх таким чином, щоб сторони мали різну довжину і щоб при цьому довга сторона шматочка відповідала довгою осі органу.
Взяття матеріалу з легкого також має деякі особливості, бо легке завжди містить повітря і тканину його плаває, не заглиблюючись повністю в фіксуючу рідину. Для повного занурення необхідно шматочок органу загорнути в марлю разом з яким-небудь вантажем (скло, фарфор, нержавіючий метал), а якщо потрібно фіксувати частку або всі легке, то вантаж прив`язати до трахеї або бронху (рис. 57).
При взятті матеріалу з кістки необхідно випилювати шматочки дрібнозубчастої пилкою (кісткової або лобзиком). Це дозволяє зберегти архітектуру досліджуваної кісткової тканини.
Крім гістологічних препаратів у вигляді зрізів, отриманих з шматочків органів, слід згадати про мазках і відбитках. Перші знаходять широке застосування при дослідженнях кісткового мозку і периферичної крові, другі - паренхіматозних органів і епітеліальних покривів слизових оболонок.
Мал. 57.
Фіксація тканин легкого і кишечника.
Загальним і обов`язковою умовою для приготування
таких препаратів є наявність ретельно вимитих і знежирених предметних стекол, а для мазків ще і стекол з відшліфованими поперечними ребрами.
Приготування мазків - см. С. 235.
Приготування відбитків: вирізають з досліджуваного органу (селезінка, печінка, лімфатичний вузол) невеликий шматочок, один з країв якого зрізають лезом так, щоб поверхня його була якомога рівніше. Оскільки відбиток повинен бути досить тонкий, необхідно спочатку зробити кілька відбитків на фільтрувальної папері, а потім акуратно зробити відбитки органу на ретельно знежиреному, чистому предметному стекле- для цього достатньо лише легкого натискання шматочком органу на поверхню скла.
Приготовлені мазки і відбитки підсушують при кімнатній температурі, після чого фіксують і забарвлюють за обраною методикою.
Мал. 58.
Вирізання шматочків з ураженої ділянки органу.
Взяття матеріалу від трупів людей з метою приготування гістологічних препаратів також виробляють по викладеним вище правилам. Наявні ж особливості в техніці розтину, огляду, протоколювання і ін. Викладені в спеціальних інструкціях і не стосуються безпосередньо гістологічної техніки. Зазначимо лише на деяку особливість взяття матеріалу з патологічно змінених органів тварин і людини.
Вирізати шматочок слід таким чином, щоб в нього потрапила зона переходу вогнища ураження в нормальний ділянку (рис. 58), з прилеглими територіями здорової і зміненої тканини, необхідно також взяти окремі шматочки з обох ділянок.
Для того щоб точно знати, який матеріал взято для фіксації, від якої тварини, з якого органу і коли, необхідно відразу ж провести його етикетування. Найбільш поширений спосіб - прошивання шматочків ниткою, на кінці якої прикріплюється маленька бирка з картону або щільного паперу з позначенням простим олівцем номера тварини (відповідного протокольному зошиті), дати взяття, назви органу, а також схеми орієнтації шматочка. Якщо шматочок або орган не можуть бути прошиті, то їх перед зануренням слід загорнути в марлю і перев`язати ниткою, забезпеченою на кінці етикеткою. Напис на бирці необхідно робити тільки простим олівцем, щоб уникнути розмивання при приміщенні в розчин.
