Методика дослідження статевогохроматину - гіпоспадія і її лікування
Відео: Викривлення статевого члена лікування
Матеріалом для перших досліджень статевогохроматину, виконаних Барром з співробітниками, служили нервові волокна самців і самок кішок. Було виявлено, що при фарбуванні по Фельгену (реакція на нуклеїнові кислоти) хроматиновой субстанція в клітинах самців розосереджена в вигляді дрібних зерен рівномірно по всьому ядру.
В ядрах клітин самок, крім дифузно розподіленого хроматину, є ще ексцентрично розташована грудочки розміром 1,5-2 мікрона, що лежить під оболонкою ядра, більш інтенсивно фарбується по Фельгену і має чечевицеобразную або трикутну форму. При підрахунку цих грудочок виявилося, що в ядрах клітин жіночого організму вони містяться в 70- 90%, а в ядрах клітин чоловічого організму - в 5-10% з помилкою ± 5%. Барр з співробітниками назвали цю грудочки хроматину статевим хроматином, Аспергер - «крайовим хроматином», або «ядерним сателітом», Закс, Серра і Данок (Sachs, Serr, Danok) - статевим хромоцентрамі (рис. 4, а, б).
Надалі виявилося, що статеві особливості в розташуванні хроматину притаманні ядер всіх клітин організму-клітин слизової рота (Мур з співробітниками), шкіри (Тетер, Барр, Закс з співробітниками) і інших тканин. У 1954 р статевої хроматин виявлений в ядрах сегментарних лейкоцитів, хоча підрахунок їх менш переконливий, ніж в інших клітинах. За даними Девідсона, Дукса, Добровського (Davidson, Dux, Dabrowska), при вивченні 500 сегментоядерних лейкоцитів у жінок статевий хроматин у вигляді «барабанних паличок» виявляється в 5-б лейкоцитах, в той час як у чоловіків він в лейкоцитах не зустрічається. Скупчення хроматину нагадують «барабанні палички» на дуже тонкій ніжці.
В даний час найбільш поширене дослідження статевогохроматину в ядрах клітин шкіри, слизових оболонок і сегментоядерних лейкоцитів, хоча останній метод і містить елементи суб`єктивності з огляду на те, що, крім справжніх «барабанних паличок», зустрічаються помилкові, які нелегко відрізнити від справжніх.
Мал. 4. Розташування хроматину в ядрах епітеліальних клітин мальпігієвого шару шкіри (забарвлення по Фельгену). Мікрофотографія.
ок. 90, об. 15:
а - у жінок-ядерні сателіти, статевої хроматин у вигляді ексцентрично розташованих зерен- П - у чоловіків. розподіл хроматину у вигляді дрібних
зерен.
Дослідження шкіри. Для дослідження береться шматочок шкіри до подкожножировой клітковини розміром 0,5X1 см. Вирішальною умовою для отримання хороших препаратів є правильна і швидка фіксація.
Шматочок шкіри краще прив`язати до скляній паличці (для запобігання деформації) і негайно опустити в фіксуючу рідину. При фарбуванні за Фельгену кращим фіксуючим розчином вважається суміш Девідсона (спирт 96 ° -35%, крижана оцтова кислота-10%, формалін - 40 ° -20%, Aquae Dest - 35%).
Забарвлення Крез-Віолет і гематоксилін-еозином допускає фіксацію в буферному нейтральному 10% -ому розчині формаліну (Арно і ін.). Мінімальний термін фіксації 24 години. Потім матеріал або обробляється або переноситься в спирт, де без шкоди може зберігатися необмежений час. Товщина зрізів повинна бути не більше 5-7 міллімікрон- при товщині 12-15 миллимикрон, як це рекомендують Бро-Расмуссен, Хансен і Мур, вивчення тонкої структури ядра досить важко.
Недоцільно вдаватися до яскравого освітлення при вивченні препаратів. Диафрагмированием і регулюванням висоти конденсатора можна домогтися максимально кращого виявлення тонкої структури ядер, в той час як яскраве освітлення краде різницю в інтенсивності забарвлення різних елементів ядра. Найкраще виявлення статевогохроматину дає забарвлення по Фельгену, хоча вона і складніше. На відміну від забарвлення гематоксилін-еозином або Крез-Віолет забарвлення по Фельгену зводить до мінімуму можливість помилок. Вона вимагає скрупульозного дотримання умов, чистих і свіжих реактивів.
Гарнден, Армстронг, Барр, Грені описали кілька випадків Гинандроморфізм за статевою хроматину у хворих гермафродитизмом, який характерний тим, що з одного боку тіла статевої хроматин розташовується за чоловічим типом, з іншого - з жіночого. Тому для виключення можливої помилки у випадках, де у хворого гипоспадией є риси гермафродитизму, рекомендується брати матеріал (шкіра, зішкріб слизової) з обох половин тіла.
Препарати вивчаються під іммерсіей- облік статевогохроматину проводиться на 100 полічених клітин базального шару. Більш поверхневі шари для вивчення непридатні.
Дослідження епітелію слизової рота, яке запропонував Мур з співробітниками, - це спроба уникнути хірургічної біопсії, замінити її простим методом взяття матеріалу і тим самим розширити можливість клінічного використання методу.
Нами цей метод використаний таким чином: зішкріб слизової береться з внутрішньої поверхні щік або, якщо немає необхідності симетричного дослідження, зі слизової нижньої губи у місця, де закінчується вуздечка. Останнє краще через хорошого доступу. Ротова порожнина попередньо ретельно прополіскують 2% -ним содовим розчином, що трохи зменшує домішка слизу і мікробів до досліджуваного матеріалу.
Епітелій слизової порожнини рота знімається склом з кілька закругленими кутами з наміченого місця слизової, випнутими при натисканні пальцем зовні. Так як для дослідження придатний тільки базальнийшар, зішкріб повинен проводитися при енергійному тиску. Слизовий матеріал, який має вигляд суспензії з дрібними включеннями, для дослідження непридатний, тому що містить тільки клітини відторгається верхнього шару- необхідно отримати окремі тонкі плівки слизової оболонки, що іноді супроводжується легким кровотечею.
Як і при взятті шкіри, зішкріб слизової після рівномірного розподілу по склу негайно фіксується. Діксон і Тарр, Нокес і Фіш (Dixon а. Тагг, Noques a. Fisch) рекомендують фіксувати матеріал протягом 24 годин в суміші рівних частин спирту і ефіру. Препарати фарбуються крезіл- Віолета або за методом Папаніколау і при необхідності тривалого зберігання звичайним методом полягають в канадський бальзам.
Кращі результати при обробці зіскрібка слизової ми отримали при фіксації матеріалу протягом 24 годин в суміші Девідсона з подальшим забарвленням по Фельгену (як і при взятті шкіри). Клітини базального шару, що підлягають вивченню, фарбуються в світло-малиновий колір, клітини відживаючих шарів, непридатних для вивчення, - в світло-коричневий.
Дослідження поліморфноядерних лейкоцитів запропоновано в 1954 р Девідсоном. Для вивчення статевогохроматину в сегментоядерних лейкоцитах придатні препарати крові, приготовані звичайним способом для підрахунку лейкоцитарної формули. Задовільні результати можна отримати при фарбуванні по May-Grunwald-Giems&rsquo-y. Препарати повинні бути тонкими і рівномірно забарвленими, так як в товстому шарі при фіксації лейкоцити зморщуються і стають непридатними для вивчення хроматину. Для підрахунку лейкоцитів, що містять статевий хроматин, за допомогою препаратоводієм під иммерсионной системою проглядається до 500 лейкоцитів. Вивчення такої кількості клітин справа трудомістка і займає не менше 1,5 годин. Крім того, в оцінці знахідок статевогохроматину можливий значний елемент суб`єктивізму, так як відрізнити справжні «барабанні палички» хроматину від помилкових не завжди легко (рис. 5, а, б, в).
Мал. 5. Розташування статевогохроматину в ядрах поліморфноядерних лейкоцитів:
а - справжні «барабанні палички», статевої хроматин у жінок- б - помилкові «барабанні палички» на товстій ніжці, зустрічаються як у жінок, так і у чоловіків-в - помилкові «барабанні палички», часто множинні, зустрічаються тільки у чоловіків.
Наш досвід дослідження статевогохроматину дозволяє зробити висновок, що перевага повинна бути віддана гістологічного дослідження шкіри як найбільш точному і чистому методу, хоча і пов`язаного з невеликим хірургічним втручанням. При ретельному дотриманні техніки забарвлення цим методом можна отримати чіткі і переконливі результати. Дослідження зіскрібка слизової рота відрізняється простотою взяття матеріалу, що робить цей метод доступним навіть при амбулаторному дослідженні хворих. Однак домішка до матеріалу значної кількості слизу ускладнює виготовлення якісних препаратів, а присутність мікробів - їх вивчення. Остання обставина може бути причиною помилок в оцінці різних ядерних включень, тому метод дослідження зіскрібків слизових рекомендується в якості орієнтовного методу при дослідженні в амбулаторних умовах дітей. Метод дослідження статевогохроматину в поліморфноядерних лейкоцитах надзвичайно простий і легко виконаємо в умовах кожної лабораторії (чого не можна сказати про метод Фельгена), проте вивчення препаратів представляє дуже трудомісткий процес. У поєднанні ж із значним елементом суб`єктивізму цей метод навряд чи стане поширеним методом в звичайних лабораторіях.
Вивчення статевогохроматину у наших хворих показало, що розташування, характерне для генетичного чоловічої статі, виявлено у 46 хворих гипоспадией без ознак гермафродитизму. У 6 хворих з явищами істинного гермафродитизму статевої хроматин також розташовується за чоловічим типом. Всі троє хворих хибним жіночим гермафродитизмом виявилися носіями жіночого хроматину (що відповідає даним Аспергера, Вілкінса і ін.).
Отримані нами дані в основному збігаються з даними зарубіжної літератури та свідчать про те, що визначення генетичного статі є істотним, особливо при визначенні статі у новонароджених (в скрутних випадках) і у дорослих хворих гипоспадией, у яких при народженні підлогу був записаний неправильно. Випадки, де вивчення статевогохроматину сприяло корекції статі, описали Воевскій, Бенуа (Benoit) і ін.
Однак найбільше значення статевої хроматин має при диференціальної діагностики важких форм гіпоспадії і помилкового жіночого гермафродитизму у новонароджених і дітей раннього віку. У цих випадках соціальна стать і псіхооріентація ще не грають ролі при уточненні статі і генетичний підлогу може виявитися вирішальним. Крім того, залучення в сумнівних випадках ще одного фактора детермінації статі сприятиме зменшенню помилок при визначенні статі і усунення їх там, де вони вже допущені.
