Азобарвники реагують з метіоніном - рак: експерименти і гіпотези
Метаболічні продукти азобарвників, як правило, аналізуються за допомогою хроматографії на колонках. При проведенні аналізів ДАБ вводили щура внутрібрю-
шінно- через день щура забивали, печінку видаляли і гомогенизировали, після чого гідролізували в холодній лугу і екстрагували сумішшю бензолу і гексану. Після подальшого очищення екстракту суміш фарбників поділяли на колонці з окисом алюмінію. Крім ДАБ, що не піддалося змінам, за допомогою описаного методу легко виділяли і демонстрували МАБ і АБ. З його допомогою Міллер вдалося показати деметилювання ДАБ в організмі щура ще в 1945 р
В кінці 1950 р набув широкого поширення новий метод - газова хроматографія. Анализируемую суміш переводили в газоподібний стан і пропускали через розділову, колонку за допомогою газу-носія - аргону або гелію. Залежно від природи стаціонарної фази (наповнювача колонки) різні речовини в газовій суміші затримуються в колонці по-різному, що і є основою їх поділу. Газова хроматографія - більш досконалий метод в порівнянні з хроматографією на папері або хроматографією на колонках: вона дозволяє не тільки краще проводити розподіл, але і робити це швидше і з більшою чутливістю.
Метод газової хроматографії, що дозволяє відокремлювати ДАБ від продуктів його деметилирования, був перевірений, так як передбачалося застосувати його до інших досліджень алкильной угруповання, приєднаної до азоту АБ. Однак останні досліди так і не були поставлені, оскільки перший пробний експеримент із сумішшю барвників, виділеної з щури, дав чотири піку замість очікуваних трьох.
Що ж собою являв новий пік? Після того як вдалося показати, що нове з`єднання дійсно є барвником, невеликі його кількості піддали Мікрохімічний аналізам, що дозволив дати лише попередній висновок. Для того щоб отримати цю сполуку в відчутних кількостях, довелося забити сотні щурів, гомогенізувати сотні щурячих печінок, гідролізувати їх і екстрагувати. В результаті було отримано 250 мкг (досить велика кількість) у вигляді жовтої плівки на дні колби. Отриману речовину піддали інфрачервоної спектроскопії, а для порівняння синтезували речовину з такими ж параметрами. Виділене з щурів невідоме з`єднання і з`єднання, синтезоване для порівняння, виявилися повністю ідентичними,
Якщо допустити, що СНзЬ-група - похідне метіоніну, то метіонін повинен реагувати з МАБ. Відомо, однак, що МАБ не вступає в цю реакцію. Проте N-оксіпроізводних, мабуть, мають таку здатність, оскільки їх можна знайти серед продуктів метаболізму всіх інших вивчених амінів.
На жаль, N-OH-МАБ, як ми вже відзначали, недоступний дослідникам, але в нашому розпорядженні знаходиться його бензоловий ефір (IV). І дійсно, виявилося достатнім просто змішати N-бензоїл-окси- МАБ з метіоніном і обробити суміш холодної лугом, щоб отримати 3-CH3S-MAB.
Якщо ж набратися терпіння (4 год), то луг можна навіть і не додавати. У будь-якому випадку для проходження реакції не було потрібно ніякого ферменту. Так вдалося здійснити пряму реакцію між «активованим» канцерогеном і компонентом клітини. На цьому етапі залишалося вирішити лише два важливих питання: чи сам ефір вступає в реакцію і чи є саме цей ефір канцерогеном?
