Санітарно-бактеріологічне дослідження грунту - мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень

Вивчення ступеня забруднення грунту населених місць, полів зрошення і городів проводиться в основному бактеріологічним методом дослідження.
Бактеріологічна характеристика санітарного стану грунту грунтується па визначенні загального числа мікробів в 1 г грунту, титру кишкової палички та наявності Gl. perfringens, Bact. proteus.
За епідеміологічними показниками проводиться визначення наявності в грунті патогенних мікроорганізмів (тифо-паратифозної групи, дизентерійної групи, правцевий палички і палички ботулізму).
Основним показником санітарного стану грунту є титр кишкової палички, оскільки найбільш часто грунт забруднюється містять різні патогенні мікроорганізми фекаліями людей і тварин.
Вибір місця для забору проб грунту визначається санітарним лікарем і бактериологом з урахуванням завдання і цілі дослідження.
Для бактеріологічного дослідження поверхневих шарів грунту на глибині від 1-2 до 20 см стерильної ложкою беруть 200-300 г грунту і поміщають в стерильну банку або колбу. Якщо потрібно досліджувати глибші шари грунту, то проби беруть на заданій глибині, користуючись для цієї мети спеціальним буравом. Середня проба ґрунту складається з декількох зразків грунту, взятої на досліджуваному ділянці. Взяті проби перемішують в стерильному посуді стерильною ложкою і з загальної маси беруть 200-300 г в стерильний посуд. У лабораторії взяту пробу грунту звільняють від всякого роду включень (коріння, каміння, щебінь і т. Д.), Після чого беруть навішення грунту 30 г і роблять ряд розведень. Перше розведення 1: 10 виходить при додаванні до 30 г грунту 300 мл стерильної дистильованої води. Добре збовтують протягом 10 хвилин і з отриманої суспензії роблять наступні розведення (1: 100, 1: 1000 і т. Д.).
Для чистих грунтів роблять 3-4 розведення, для загрязненних- 4-6 розведень.
Для визначення загального числа бактерій надходять у такий спосіб. З кожної проби грунту береться не менше 2 розведень для посіву. Кожне розведення окремо засівають паралельно на 2 чашки Гейденрейха-Петрі з м`ясо-пептони агаром. У стерильні чашки заздалегідь наливають по 1 мл приготовленої розведеною суспензії грунту, а потім в цю чашку наливають 15 мл розплавленого і охолодженого м`ясо-пептонного агару, добре перемішують, дають агару застигнути і ставлять в термостат при 28-30 ° на 48 годин. Після закінчення терміну інкубації підраховують загальну кількість колоній, що виросли. Для підрахунку колоній треба брати такі розведення, при яких на чашках виростає від 50 до 150 колоній. Із суми колоній, які виросли на двох чашках одного розведення, виводять середньоарифметичне
число і потім підраховують кількість колоній, що припадають на 1 г грунту.
Приклад. Посіяно 1 мл ґрунтової суспензії з розведення 1 10 000. На всій площі чашки виросло 80 колоній. Число вирослих колоній треба помножити на ступінь розведення, виходить число мікроорганізмів в 1 г грунту: 80x10 000 = 800 000 бактерій.
Для визначення титру кишкової палички робиться посів різних розведень грунту в судини з середовищем Кесслера.
При аналізі чистих грунтів посів роблять з основного розведення 1 10 до 1 1000. При роботі з забрудненими грунтами використовують розведення до 1 100 000. З вихідного розведення (1 10) беруть стерильною піпеткою 10 мл і засівають в колбу з 50 мл середовища Кесслера, що відповідає 1 г грунту. Посів меншої кількості (0,1 - 0,01) роблять по 1 мл з відповідних розведень грунтової суспензії в пробірки з 9 мл тієї ж середовища. Посів вирощують в термостаті при 43 ° протягом 24 годин. При відсутності термостата на 43 ° посів можна витримувати при 37 ° У разі затримки росту посіви залишають в термостаті ще на 24 години. Подальший хід аналізу грунту з заграли судин проводять за загальноприйнятою методикою дослідження води.
Для обчислення коли-титру та колі-індексу користуються таблицями розрахунку, складеними для дослідження води відкритих водойм. При цьому треба користуватися посівами з наступного розрахунку (табл. 35).
Про ступінь забруднення грунту можна судити по табл. 36.
Для дослідження грунту па наявність в ній тифозних, паратіфозних і дизентерійних мікробів надходять так: грунтову суспензію після її приготування і подальшого відстоювання близько 1 хвилини обережно зливають з осілого осаду в інший стерильний посуд для звільнення від грубих механічних домішок. Для концентрації мікробів до 500 мл грунтової суспензії додають 2 мл 10% стерильного розчину соди (Na2C03) і потім 1,7 мл 10% стерильного розчину сірчанокислої окису заліза - Fe2 (S04) 3. Розмішують і залишають на холоді на 1 годину. Утворилися після коагуляції пластівці осідають на дно посудини разом з частинками грунту і бактеріями.
Таблиця 35 Орієнтовний аналіз обсягу 1 0,1- 0,01 і 0,001 мл

Таблиця 36
Санітарна оцінка ступеня забруднення грунту

Осад після коагуляції засівають в кількості 0,5-1 мл на чашки із середовищем Плоскірєва, Левіна або Ендо. Осад, що грунтової суспензії заливають 50 мл 10% жовчного бульйону. Посіви вирощують в термостаті при 37 °. Подальший хід дослідження проводиться за загальноприйнятою методикою для кожного виду мікроба.