Реакція лізису і гемолізу - мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень
реакція лізису
Багато дослідників давно підмітили факт досить швидкого зникнення з крові введених в неї сапрофитов. Вчення про бактерицидні властивості сироваток отримало подальший розвиток в роботах Г. Бухнера, який довів наявність в нормальній сироватці бактерицидних властивостей до інших мікробів (збудників черевного тифу і холери). Найбільш переконливими були класичні досліди Л. М. Ісаєва і Р. Пфейффера, які констатували появу в сироватці імунного тварини, бактеріолізини.
Терміни «бактерицидна» і «бактеріолітіческій» здатність сироватки визначають один і той же процес, так як вбиває (бактерицидну) або вбиває і одночасно розчиняє (бактеріолітичну) дію залежить не від різних властивостей сироватки, а від особливостей мікроорганізмів.
Під впливом бактеріолізини мікроби сильно змінюються: втрачають рухливості, їх тіло розбухає, втрачаючи типову форму, і поступово вони перетворюються в круглі освіти (кулі) і потім в аморфну масу.
При бактерицидну дію сироваток настає тільки загибель мікробів: при цьому вони зазнають порівняно невеликі морфологічні зміни.
Явища бактеріолізу можна спостерігати в досвіді як in vivo (в організмі тварини), так і in vitro (у пробірці).
Для настання бактеріолізу необхідна участь двох речовин. Одне з них, швидко руйнується при нагріванні до 56 ° і не володіє специфічністю, називається комплемент. Інша речовина - антитіло (лізину), що з`являється в крові при активній імунізації, стійке по відношенню до температури. Лізину здатні надавати свою дію тільки в присутності додаткового фактора - комплементу.
Комплемент - це речовина білкового характеру, що міститься в будь-який свіжій сироватці людини і тварин, що сприяє лізису (розчиненню) клітинного антигену (еритроцитів барана, бактерій і т. Д.) В присутності специфічної імунної сироватки. Він нестійкий, руйнується при температурі 55-56 °, при тривалому зберіганні, дії світла, енергійному струшуванні, дії деяких хімічних речовин. Кількість його не підвищується протягом процесу імунізації.
Прийнято користуватися як комплементу свіжої сироваткою морської свинки.
реакція гемолізу
Явище лізису поширюється не тільки на бактерії, але і інші клітинні елементи - еритроцити, лейкоцити і т. Д. При імунізації тварин еритроцитами іншого виду в крові з`являються антитіла - гемолізини, що розчиняють дані кров`яні тільця. Імунна сироватка, яка містить гемолізини, називається гемолітичної. Гемоліз, як і бактеріоліз, відбувається за участю специфічного антитіла і комплементу. Реакція гемолізу полягає в тому, що при впливі гемолітичної сироватки на відповідні еритроцити в присутності комплементу виходить їх розчинення (гемоліз), суспензія еритроцитів перетворюється в яскраво-червону прозору рідину - так звану лакову кров (рис. 57).
Мал. 57. Реакція гемолізу. а - гемоліз еритроцитів отсутствует- б - повний гемоліз еритроцитів.
Реакцію ставлять за схемою (табл. 2). Після постановки реакції пробірки ставлять на 30 хвилин у термостат при 37 °.
Таблиця 2
Схема реакції гемолізу
складові | №пробіркі | ||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | |
гемолітична сироватка | 0,5 | 0,5 | - | 0,5 | - |
Еритроцити барана (антиген) | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | |
Комплемент розведенні 1:10 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | ||
еритроцити собаки | - | - | - | 0,5 | - |
фізіологічний | - | 0,5 | 0,5 | &ldquo-&ldquo-&ldquo- * | 1,0 |
Загальний об`єм | 1,5 | 1,5 | 1,5 | 1,5 | 1,5 |
результати реакції | гемоліз | відсутність гемолізу | відсутність гемолізу | відсутність гемолізу | відсутність гемолізу |
У 1-й пробірці стався повний гемоліз еритроцитів, так як в ній містяться всі компоненти реакції (антитіло + антиген + комплемент).
У 2-й пробірці реакція гемолізу не наступила, не дивлячись на наявність антитіла та антигену, так як в ній відсутній фермент.
У 3-й пробірці реакція гемолізу не відбулася через відсутність антитіла (гемолітичної сироватки).
В 4-й пробірці перевіряється специфічність реакції: гемолізу не відбулося, тому що в ній специфічний антиген (еритроцити барана), замінений іншими еритроцитами (еритроцити собаки).
У 5-й пробірці перевіряється стабільність еритроцитів, що містяться в фізіологічному розчині при температурі 37 ° протягом години-спонтанного гемолізу не настав.
