Ти тут

Збудник дифтерії - мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень

Зміст
Мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень
Розвиток медичної мікробіології
Морфологія мікроорганізмів
будова бактерій
Бактеріологічна лабораторія, її пристрій і призначення
Види мікроскопічного дослідження
мікроскопія
забарвлення
Хімічний склад мікробів
Харчування і розмноження мікробів
живильні середовища
Підготовка посуду, приготування фізіологічного розчину
Принципи культивування мікроорганізмів
Вивчення культуральних властивостей мікроорганізмів
ферменти
дихання мікробів
Пігменти, фотогенія і ароматичні речовини мікроорганізмів
Поширення мікробів в природі
Вплив зовнішніх факторів на життєдіяльність мікроорганізмів
бактеріофаг
Антагонізм мікробів і антибіотики
Вчення про інфекцію та імунітет
Джерела інфекційних захворювань
Основні ознаки інфекційного захворювання
Роль макроорганізму в інфекційному процесі
Значення зовнішнього середовища на резистентність
Форми поширення інфекційних захворювань
Загальні відомості про імунітет
вроджений імунітет
набутий імунітет
реакція преципітації
Реакція лізису і гемолізу
Реакція зв`язування комплементу
опсоніни
алергія
Специфічна терапія і профілактика інфекційних захворювань
генетика мікроорганізмів
стафілококи
стрептококи
пневмококки
менінгококи
гонококи
Паличка синьо-зеленого гною, вульгарний протей
Бактерії коклюшу і параклюша
клебсієли
Бактерії кишково-тифозної групи
Кишкова паличка
Збудники черевного тифу і паратифів
сальмонели
дизентерійні бактерії
холерний вібріон
збудник дифтерії
збудник туберкульозу
Збудник прокази, пастерелли і бруцелли
збудник чуми
збудник туляремії
бруцели
Збудник сибірської виразки
збудник сапу
збудник правця
Збудник газової гангрени
збудник ботулізму
спірохета сифілісу
Спірохета поворотного тифу
спірохета Венсана
лептоспіри
збудник содоку
рикетсії
Група висипного тифу
Група плямистих лихоманок, цуцугамуши, риккетсиозов
віруси
вірус грипу
параміксовіруси
рабдовіруси
ентеровіруси
арбовіруси
аденовіруси
герпесвіруси
вірус гепатиту
паповавіруси
Санітарно-бактеріологічне дослідження води
Санітарно-бактеріологічне дослідження води і харчових продуктів на виявлення холерного вібріона
Санітарно-бактеріологічне дослідження напоїв
Санітарно-бактеріологічне дослідження молока
Санітарно-бактеріологічне дослідження м`яса
Санітарно-бактеріологічне дослідження продуктів на наявність стафілокока
Дослідження мікрофлори повітря
Санітарно-бактеріологічне дослідження грунту
Бактеріологічне дослідження калу на бактеріоносійство
Бактеріологічне дослідження змивів з рук, інструментарію, інвентарю
Збирання і пересилання матеріалу для дослідження

Вперше дифтерійна паличка Corynebacterium diphtheriae) була описана Е. Клебсом в 1883 р, а Ф. Леффлером - в 1884 р
Морфологія і тинкторіальних властивості. Бактерії відрізняються різко вираженим поліморфізмом. Зазвичай вони мають 3-4 мк в довжину і 0,3-0,5 мк в товщину (рис. 83 і 84).

Мазок з дифтерійної плівки
Мал. 84. Мазок з дифтерійної плівки. Забарвлення метиленової синькою (одномоментний спосіб).
Мал. 83. Дифтерійна паличка в культурі Забарвлення по Нейссеру.
Дифтерійна паличка в культурі

Зустрічаються, проте, то довші, то коротші форми. У морфологічному відношенні дифтерійні палички характеризуються тим, що їх цитоплазма містить зернисті включення, а на одному або обох кінцях клітини є колбовідние потовщення, що надає їм форму булави (согупа - булава). Звідси і назва Corynebacterium diphtheriae. Flo відношенню один до одного палички розташовуються під прямим або гострим кутом, часто на зразок розчепірених пальців.
Дифтерійна паличка грампозитивних і добре фарбується всіма аніліновими фарбами, але сприймає забарвлення нерівномірно, що. залежить від містяться в ній зерен волютина (Бабеша-Ернста). Останні мають круглу або овальну форму і розташовуються зазвичай по кінцях паличок. Волютиновими зерна сприймають забарвлення значно інтенсивніше решті цитоплазми, завдяки чому їх легко виявити і за допомогою простих методів забарвлення. У лабораторній практиці для цієї мети користуються забарвленням препаратів метиленової синню або за методом Нейссера (див. Техніку забарвлення, стор. 51).
Культуральні та біохімічні властивості. Зростання дифтерійних бактерій відбувається в аеробних умовах при оптимальній температурі 37 °.

Колонії дифтерійної палички
Мал. 85. Колонії дифтерійної палички на телуритовий
середовищі.
а - колонії типу gravis- б - колонії типу mitis.

Найкращою живильним середовищем для вирощування дифтерійних бактерій є згорнута кінська або бичача сироватка. На цьому середовищі колонії дифтерійної палички можна виявити вже через 8-10-14 годин. Колонії круглої форми, опуклі, в центрі кілька підняті, діаметром 1 мм. Поверхня колонії гладка або злегка зерниста, колір кремовий. На периферії колонії більш прозорі, ніж в центрі. Культура виростає в вигляді не зливаються між собою колоній, що надає їй злегка горбистий вид (шагренева).
Типи дифтерійних бактерій. На підставі культуральних і біохімічних властивостей розрізняють три типи дифтерійних паличок: gravis, mitis, intermedius. З типом збудника пов`язували і відмінності в клінічній картині захворювання. Вважали, що дифтерійні палички типу gravis зустрічаються в важких токсичних випадках. Вони утворюють на телуритовий середовищі (агар з кров`ю і телуриту калію) відносно великі сероваточерние або чорні плоскі, шорсткі колонії з радіальної ісчерченностио і зубчастим краєм (рис. 85), на бульйоні дають зернистий осад і плівку, розкладають крохмаль і глікоген, гемолізу не викликають . Палички типу mitis спостерігаються в тих випадках, коли загальні токсичні явища виражені слабо, хоча плівки на мигдаликах можуть бути досить великі. Вони утворюють на телур-агарі гладкі опуклі дрібні блискучі колонії
чорного кольору з рівним краєм, рівномірно каламутять бульйон, крохмалю та глікогену розкладають, гемолітичного. Тип intermedius займає проміжне положення між gravis і mitis. Бактерії типу intermedius ростуть бідно і утворюють дрібні плоскі колонії чорного кольору з прозорою облямівкою по краю. На середовищі Тиндаля (цистин-телурит - сироваткова середа) колонії дифтерійної палички оточені темно-коричневого ореолом. Однак в даний час встановлено, що клінічний перебіг хвороби часто не залежить від типу дифтерійної палички. Всі типи дифтерійної палички розкладають глюкозу, мальтозу, галактозу з утворенням кислоти, без газоутворення. Лактозу, сахарозу і маніт вони не розкладають.
Діфтероіди і ложнодіфтерійной бактерії. Під назвою «діфтероіди» умовно об`єднують палички, морфологічно подібні до дифтерійної, але не мають токсичними властивостями. Вони зустрічаються на шкірі і слизових оболонках здорових людей. До складу цієї групи входять Corynebacterium xerosis, Corynebacterium acne та ін.
На слизовій оболонці зіва, носа, носоглотки зустрічається ложнодіфтерійной паличка - Corynebacterium Hoffmani.
Особливих труднощів при диференціації їх від дифтерійної палички досвідчений лаборант-мікробіолог не відчуває. Наприклад, паличка Гофмана коротше і товще, не володіє поліморфізмом, розташовується попарно або частоколом, не має зерен волютина. Corynebacterium xerosis на відміну від дифтерійної палички має кілька зерен волютина. Інші діфтероіди за розмірами менше дифтерійної палички, не володіють поліморфізмом, розташовуються один до одного під кутом або частоколом, зовсім не мають зерен волютина або мають тільки одне зерно на одному полюсі клітини.
У сумнівних випадках доводиться вдаватися до вивчення біохімічної активності виділеної культури і токсигенности.
Телурової поживні середовища. 1. Кров`яно-телурової агар. До 100 мл розплавленого і охолодженого до 50 ° 2% м`ясо-пептонного агару (pH 7,6) додають 5-10% дефибринированной крові людини або тварини і 1 мл 2% розчину теллурита калію (КгТе04). Середу ретельно перемішують і розливають у чашки. На цьому середовищі бактерії дифтерії відновлюють телурит калію в металевий телур.
На телурит-кров`яному агарі мікроби кокової групи ростуть повільно. Колонії стафілокока до кінця 2-х діб стають великими сірого або чорного кольору з коричневим відтінком. Колонії палички Гофмана до кінця 1-х діб росту - гладкі, слизові з чорним центром і сірі по периферії, на 2-у добу вся поверхня колонії стає чорною.

  1. середа Клауберга. 100 мл 3% поживного агару (або 7,5 г сухого поживного агару на 100 мл дистильованої води) розплавити, додати 3 мл 2% розчину теллурита калію, 10 мл гліцеринової суміші та 50 мл лакової крові. Швидко все перемішують і розливають у чашки. Середовище прозоре, колір червоного вина.

Лакова кров готується наступним чином: до 34 мл дистильованої води (стерильною) додати 16 мл дефибринированной крові великої рогатої худоби або людини або сухої крові, розведеної відповідно повчанням.
Приготування гліцеринової суміші: до 40 мл дефибринированной крові великої рогатої худоби або людини або сухої розлученою крові додати 20 мл хімічно чистого стерильного гліцерину. Суміш рекомендується витримати в холодильнику 3-6 тижнів. На цьому середовищі дифтерійна паличка, відновлює солі телуру, росте у вигляді круглих непрозорих колоній чорного кольору або з темно-сірим центром. Ложнодіфтерійной палички утворюють дрібні непрозорі колонії сірого кольору з коричневим центром. Діфтероіди ростуть у вигляді опуклих блискучих колоній сірого кольору з чорним центром.

  1. Цистин-телурит-сироваткове середовище Тиндаля (Модифікована за інструкцією). До 100 мл 2% розплавленого і охолодженого до 60 ° поживного агару додають послідовно: 1) 1% розчин цистину на 0,1 N розчині H2S04 (або НС1) - 12 мл-цистин треба розчиняти в сірчаної або соляної кислоти, підігріваючи на водяній бані при температурі 80-85 °, 2) 0,1 н. розчин NaOH-12 мл, 3) 2% розчин теллурита калію 1,8 мл, 4) 2,5% розчин гіпосульфіту натрію-1,8 мл, 5) нормальну кінську або бичачу сироватку - 20 мл. Середовище перемішують і розливають у стерильні чашки шаром в 4-5 мл.
  2. Суха хінозольная індикаторна серед б учинений (по інструкції). До 100 мл холодної води додають 7-8 г порошку сухого хіпозольной середовища, ретельно розмішують і нагрівають на слабкому вогні до повного розплавлення агару. Середу кип`ятять протягом 2-3 хвилин, не допускаючи пригорання агару, до освіти крупнопузирчатих, швидко осідає піни.

До охолодженої до 50 ° середовищі додають 5 мл (краще 10-15 мл) стерильної крові, розмішують і розливають в чашки.
Після застигання середу злегка підсушують в термостаті і вона «може бути використана протягом 3-4 діб за умови зберігання від +4 до +10. Приготована середовище має синій колір. Колонії дифтерійної палички виростають через 24-48 годин, при цьому відновлюють індикатор і середовище набуває фіолетового кольору на місці зростання дифтерійної палички. Колонії дифтерійної палички фарбуються в синій колір.
Резистентність. Температура 60 ° вбиває дифтерійну паличку протягом 10 хвилин. До прямого сонячного і розсіяному світлі паличка дифтерії чутлива.
До висихання щодо стійка. 5% розчин карболової кислоти вбиває її протягом 1 хвилини.
Дифтерійний токсин і патогенність для тварин.
Дифтерійна паличка виділяє екзотоксин, токсичність якого може бути настільки велика, що 0,002 мл його при підшкірному введенні морській свинці викликає смерть тварини через 3-5 днів. Дифтерійний токсин вкрай нестійкий: він руйнується при нагріванні до 60 ° і різко послаблюється від дії світла і кисню повітря. Під впливом одночасної дії формаліну (0,3-0,4%) і температури 40 ° протягом 1 місяця вдається отримати - анатоксин. Анатоксин застосовується для активної імунізації людей проти дифтерії і при виготовленні лікувальних сироваток.
На противагу токсину анатоксин досить стійкий: під впливом дії світла і від довгого зберігання його антигенная сила не змінюється.
Кращою середовищем для отримання екзотоксину є мартенівський бульйон (див. Стор. 67). Сила токсину визначається його найменшою смертельною дозою - Dim, т. Е. Тим найменшою кількістю токсину, яке при підшкірному введенні вбиває морську свинку вагою 250 г на 4-й або на 5-й день. У тварин не вдається отримати захворювання, аналогічне дифтерії людини. Однак у деяких тварин, особливо у морської свинки, після зараження розвивається ряд вельми характерних патологоанатомічних змін. В результаті підшкірного введення дифтерійної культури або дифтерійного токсину тварина гине в найближчі дні. При розтині на місці введення спостерігається серозний або серозно-геморагічний інфільтрат. Наднирники збільшені і різко гіперемійовані. У плевральній порожнині, в околосердечной сумці і в порожнині очеревини спостерігається скупчення серозного ексудату.
При внутрішньошкірне введення дифтерійного токсину або культури спостерігаються характерні місцеві некротичні ураження шкіри.
Патогенез і клініка дифтерії. Джерелом інфекції при дифтерії є хвора людина, який через виділення - слиз, гній, слину, мокротиння розсіює мікроби в навколишній простір, на обстановку і предмети. Найчастіше зараження відбувається капельноаерогенним шляхом. Небезпеку становлять також реконвалесцент і здоровий бактеріоносій. дифтерійні
палички можуть зберігатися досить довго в зіві людей, які перенесли дифтерію. Бактеріоносійство при дифтерії має велике епідеміологічне значення: воно створює імунітет і в той же час сприяє поширенню інфекції.
Дифтерія передається крапельним шляхом при кашлі, чханні і розмові від бактерионосителя, а також побічно - через різні предмети, що були у вжитку хворої людини (білизна, постільні приналежності, іграшки, книги, посуд). Аліментарний шлях зараження (через молоко і морозиво) -явище рідкісне.
В основі патогенезу дифтерії вирішальне значення має інтоксикація дифтерійним екзотоксином. Виявляється дифтерія у вигляді первинного ураження слизових оболонок мигдаликів, піднебінних фіранок, носоглотки і носа, звідки процес може поширюватися глибше по дихальних шляхах, вражаючи гортань і бронхи. Іноді спостерігається також дифтерія очей, ранових поверхонь, вуха і піхви. На місці проникнення мікробів з`являються сіруваті плівки, спаяні з підлеглою тканью- при видаленні їх видно кровоточить.
Розмноження дифтерійних паличок відбувається тільки на місці їх впровадження, і в кров вони зазвичай не надходять. У місці свого розмноження дифтерійні бактерії виробляють екзотоксин, який, всмоктуючись, дає загальну інтоксикацію організму.
Інкубаційний період при дифтерії 2-7 днів. Захворювання починається підйомом температури, болем в горлі при ковтанні і нездужанням. Токсином уражається м`яз серця (малий і частий пульс, глухі тони). Кров`яний тиск знижений внаслідок ураження надниркових залоз. Надалі в важких випадках дифтерії з`являється ціаноз, похолодання кінцівок і настає смерть від гострої недостатності серцевої діяльності.
Дифтерія гортані, або істинний круп, характеризується сухим гавкаючим кашлем, звуженням просвіту гортані, кисневим голодуванням, що закінчується смертю. Токсичними ускладненнями при дифтерії є паралічі м`якого піднебіння, кінцівок і різних м`язів-особливо небезпечні паралічі серцевого м`яза.
Поряд з важкими зустрічаються легкі, атипові форми дифтерії, які протікають під виглядом різних
запалень мигдаликів. Такі випадки важко розпізнаються і тому дуже небезпечні в епідеміологічному відношенні.
Імунітет. Імунітет при дифтерії антитоксичний. Він заснований на наявності в сироватці антитіл - антитоксинів. Грудні діти зазвичай на дифтерію не хворіють, що обумовлено наявними у них пасивним імунітетом, який вони отримують від матері плацентарних шляхом і частково з молоком. Надалі антитоксинів накопичуються в результаті активної природної імунізації і контакту з носіями дифтерійної палички.

Лабораторна діагностика. При дифтерії застосовують такі види лабораторного дослідження: бактеріоскопічне, бактеріологічний, експериментальний. Матеріалом для дослідження служать виділення уражених слизових оболонок, плівки, а на вимогу епідеміолога - молоко, морозиво, змиви з різних предметів (іграшок та ін.) Беруть матеріал стерильним тампоном, що складається з грудочки вати, намотаного на кінець дерев`яної палички або металевого стержня. При наявності різко окреслених дифтеритические плівок слід потерти уражену ділянку тампоном, щоб отримати деяку кількість ексудату. З носа матеріал беруть таким же тампоном, але на нього намотують кілька меншу кількість вати. Для того щоб захопити матеріал, потрібно пройти тампоном перший ніздрю. При взятті матеріалу з
нoca необхідно проводити туалет ніздрів (обмивання фізіологічним розчином або спиртом) і не торкатися шкіри носа.
Взятий матеріал поміщають в пробірки і негайно відправляють в лабораторію. Якщо доставка займає більше 3-4 годин, то використовують тампони, змочені 5% розчином гліцерину в 0,85% розчині кухонної солі. Тампони слід захищати від дії сонця, заморожування і висихання. Невелика висеваемость (20-50%) дифтерійної палички від хворих на дифтерію найчастіше обумовлюється неправильним взяттям матеріалу і тривалістю часу від моменту його взяття до посіву.
У лабораторії приступають до бактеріологічному дослідженню. Тампони вводять в пробірку зі згорнутої кінської сироваткою і потім втирають його вміст в поверхню сироватки, виробляючи при цьому обертальні рухи. Одночасно роблять посів на чашку з телуритовий кров`яним агаром, на середу Клауберга або на середу Тінсдаля для отримання чистої культури дифтерійної палички. З метою діагностики бактеріоскопії вмісту на тампони в даний час проводять рідко, але іноді в термінових випадках на вимогу лікаря застосування його виправдано. Тоді після посіву матеріалу роблять мазки для фарбування синню і по Нейссеру.
Посіяний матеріал вирощують при температурі 37 ° і досліджують через 18-24 години. У термінових випадках можна провести дослідження раніше, наприклад через 6-12 годин. З виросла культури готують мазки і фарбують по Граму, лужної метиленової синню і по Нейссеру і микроскопируют. Іноді зростання мікробів затримується. У цих випадках необхідно залишити посів ще на добу і повторити його бактеріоскопії. Присутність мікроорганізмів, що володіють характерними для дифтерії морфологічними і тинкторіальних властивостями, можна розцінювати як позитивний результат.
Метод, який дозволяє виділити дифтерійну паличку швидше, полягає в тому, що тампон попередньо змочують стерильною сироваткою, яку згортають на тампони нагріванням до 80 °. Сироватковим тампоном протирають уражену ділянку (зів, мигдалини) і поміщають його в термостат при 37 °.

Властивості дифтерійної палички і близьких до неї дифтероїдів

забарвлення

Ферме-
нтатівние
властивості

токси-
ген-
ність

Допол вальні ознаки

Наім-
енованіе виду

Морфологія

полі-
морфізм

ка по Нейссеру

глюко
за

саха
троянда

крах
малий

проба
Пізу

Відео: ВІДЕОінструкція по забору біоматеріалу - dnks.ru



проба
на
уреазу

агглю-
тінація.

С. diphtheriae a) gravis

Довгі, тонкі, полярно-зернисті, сегм;

тірованние

яскраво виражений

+

Відео: Бак посів

+

-

+



або
+

+ +

-

+

б) mitis

Менш довгі, вигнуті, полярно-зернисті, сегм;

тірованние

Виражений менш яскраво

+

+

*

"

+
або

+ +

+

С. pseudodiphtheriae (Hoffmani)

Короткі, товсті з загостреними кінцями палички ( «сигари»)

Непо-ліморф
ні

+

+

*

діфтероіди
а) С.ceruminis
б) С.xerosis

Схожі з дифтерійними
Схожі з дифтерійними (довгі, тонкі палички)

мало полі-
морфних
те ж

+
+

+

+

АБО +
або
+

або + або +

Відео: Забір аналізів

У мазках, приготовлених з 3-4-годинної культури на тампони, вдається виявити значне число бактерій.
Гарні результати виходять при взятті матеріалу не сухим тампоном, а тампоном, перед вживанням просякнутим 2% розчином теллурита калію. Це дає незмінно велику висеваемость дифтерійної палички. При користуванні телуритовий тампоном зростання дифтерійної палички на середовищі Леффлера постає не пізніше ніж через 18-24 години.
При ідентифікації чистої культури дифтерійної палички і відмінності її від псевдодіфтерійной палички Гофмана і дифтероїдів визначають наступні основні властивості (табл. 20).
При виділенні нетоксігенним культури, що не зброджують цукру, ставлять додаткові проби для виявлення ферментів уреази (розщеплює сечовину) і цистиназу (проба Пізу).
Для визначення ферменту уреази (проба Закса) виділену культуру засівають в бульйон з сечовиною та індикатором крезолротом. Почервоніння середовища, що спостерігається протягом 20 хвилин, свідчить про наявність ферменту уреази, що не характерно для справжніх дифтерійних паличок. Наявність ферменту цистиназу, що виявляється посівом в стовпчик живильного середовища з цистином і оцтовокислим свинцем, обов`язково для дифтерійних паличок. Під дією цистиназу цистин розщеплюється і, вступаючи в реакцію з оцтовокислим свинцем, утворює сірчистий свинець, який забарвлює середу по ходу уколу в чорно-бурий колір.
Для остаточної диференціації дифтерійних паличок від інших представників групи коринебактерій ставиться мікроскопічна реакція аглютинації на предметному склі з полівалентною дифтерійною сироваткою наступним чином: агглютинируют сироватку розводять сольовим розчином у співвідношенні 1: 25. Сольовий розчин готують так. У 100 г дистильованої води розчиняють 3 г куховарської солі, встановлюють pH 7,6, додаючи 5% розчин Na2HP04 і стерилізують текучою парою триразово. Виділену культуру змивають цим же сольовим розчином, набирають стерильною пастерівської піпеткою і вносять в краплю полівалентної сироватки. Контролем служить агглютинируют сироватка і сольовий розчин. При позитивній реакції через 2-3 хвилини з`являються пластівці агглютіната.
Можна поставити реакцію аглютинації з типовими дифтерійними сироватками I, II, III, IV і VI серотипів.
Якщо виділена культура недостатньо типова, то для відмінності її від дифтероїдів визначають токсигенность даної культури шляхом зараження тварин. Визначати токсигенность виділеної культури дифтерійної палички потрібно і в тих випадках, коли цей мікроб виділений від здорових носіїв і реконвалесцентів або з таких місць, як ранова поверхня, статеві органи, вухо, око і т. Д. Заражають морських свинок двома методами - внутрішньошкірним і підшкірним . У досвід беруть 2 свинок, з яких однією (контрольної) вводять напередодні антитоксичну протидифтерійну сироватку в кількості 500-1000 АЕ- інший свинці (піддослідної) сироватку не вводять. У день досвіду обом свинкам вводять випробувану культуру в кількості 0,2 мл по стандарту 50-100-200 млн. Мікробів в 1 мл. При введенні добової культури під шкіру морській свинці у неї розвиваються такі явища. На місці введення вже через кілька годин утворюється інфільтрат тестоватойконсистенції, який до кінця 1-х або 2-х діб досягає вельми значних розмірів. Тварина стає млявим, слабким і відмовляється від їжі. Смерть настає через різні терміни (1-5 і більше діб) в залежності від токсигенности культури і від дози. При розтині на місці введення знаходять серозний або серозно-геморагічний інфільтрат, в соскобах якого виявляються досить численні дифтерійні бактерії-кров і органи залишаються стерильними. З інших посмертних явищ найбільш характерні збільшення і гіперемія наднирників і серозний ексудат в плевральній порожнині і в околосердечной сумці. В органах знаходяться некротичні ділянки, пронизані лейкоцитами, в м`язової і нервової тканини - дегенеративні зміни. При внутрішньо шкірному застосуванні на місці введення культури спостерігається запальна реакція і некроз. У контрольній свинки не відзначається ніякої реакції при обох способах введення культури. Внутрикож метод дозволяє на одній свинці перевірити кілька штамів дифтерійної палички.
Токсигенність дифтерійної палички можна визначити і іншим, більш простим методом. У чашку Гейденрейха-Петрі наливають 12 мл розплавленого і охолодженого до 50 ° 2% м`ясо-пептонного агару або 2% агару на мартенівському бульйоні, до якого додають 0,3 мг цистину і 15-30% нормальної кінської сироватки. Добре перемішують і дають агару затвердіти. Потім на середину чашки поміщають смужку фільтрувального паперу, простерилізованих в автоклаві і змочену протидифтерійної антитоксичної сироваткою, що містить в 1 мл 500 АЕ. Чашку підсушують 15-20 хвилин в термостаті, потім засівають досліджувану культуру штрихами перпендикулярно до фільтрувальної папірці або бляшками діаметром 1 см на відстані 0,5 см від папірця. На одній чашці можна посіяти 3-4 культури (одна з них контрольна - токсигенних).

Мал. 86. Освіта преципитата - флокулята ( «стріли - вусики») в результаті взаємодії дифтерійного токсину дифтерійної палички з антитоксической сироваткою.
Посів кожної культури виробляють чотирма лініями або бляшками (по дві з кожної сторони).
Посіви поміщають в термостат. Облік виробляють через 24, 48 і 72 години.
Визначення токсигенності засноване на принципі: токсин, що утворюється в процесі росту дифтерійної палички, дифундують в живильне середовище, як і специфічну сироватку з фільтрувальної папірці. Зустріч токсину і антитоксину супроводжується утворенням ліній преципитата - флокулята в формі «вусиків», або «стрілок» між штрихами посівів. Їх можна особливо чітко бачити, розглядаючи чашку на темному фоні за допомогою лупи. Лінії токсигенних штамів на периферії сходяться між собою, а якщо поруч є зростання контрольного токсигенного штаму, то з`єднуються з лініями преципитата цього штаму. Флокуляти токсигенного (контрольного) і нетоксігенним штамів не сходяться, а перехрещуються (рис. 86).
У разі виявлення морфологічних типових дифтерійних паличок дається відповідь: «Виявлена дифтерійна паличка». У відповідях на діагностичні аналізи, а то й спостерігається зростання дифтерійної палички, вказують, які інші мікроорганізми обнаружени- у відповідях на бактеріоносійство їх можна не відзначати.
Приклад.
АНАЛІЗ № 1
Слизу із зіву хворий Іванової Ніни на дифтерію.
При бактеріологічному дослідженні слизу із зіву дифтерійна паличка не знайдено. Отримано зростання грампозитивних стрептококів.
Лаборант (підпис)
Специфічна профілактика і терапія. Активна імунізація дітей з метою профілактики проводиться шляхом введення анатоксину. В даний час в широку медичну практику увійшли комбіновані препарати: коклюшно-дифтерийная і дифтерійно-коклюшностолбнячная вакцина (АКДП).
У деяких випадках для попередження дифтерії у дітей, що знаходяться в контакті з хворими, доводиться проводити пасивну імунізацію шляхом введення протидифтерійної антитоксичної сироватки.
З лікувальною метою внутрішньом`язово або підшкірно хворому вводять протидифтерійну сироватку. Доза її змінюється в залежності від віку хворого і тяжкості захворювання. Її дія буде тим ефективніше, чим раніше вона введена. Антитоксична сироватка не має бактерицидну дію і лікувався нею хворий може залишитися бактеріоносієм і може заражати оточуючих.
кислотостійких мікобактерій
До групи кислотостійких мікобактерій відносяться збудник туберкульозу (Mycobacterium tuberculosis) і збудник прокази (Mycobacterium leprae). До роду мікобактерій відноситься також ряд сапрофітних мікробів, що зустрічаються в грунті, воді, молоці, маслі і на шкірі людини (в виділеннях препуціальной складки-М. Smegmatis). За деякими своїми властивостями (освіта гіллястих форм і повільне зростання деяких мікобактерій на поживних середовищах) мікобактерії близькі з грибами, чим і пояснюється назва групи (mycos - гриб). Бактерії цієї групи отримали назву кислотостійких тому, що вони мають чітко висловленої стійкістю до мінеральних кислот: в 5-10% розчині сірчаної та соляної кислоти вони зберігаються досить довго. Крім того, сприйнявши ту чи іншу забарвлення (наприклад, карболовий фуксин), вони не знебарвлюються розчинами мінеральних кислот. Крім резистентності до кислот, ця група мікроорганізмів щелочеустойчівий і спиртостійкі.
Кислотостійкі сапрофіти відрізняються від патогенних тим, що не вимогливі до живильних середовищ і ростуть в широкому температурному діапазоні.



Поділися в соц мережах:

Увага, тільки СЬОГОДНІ!

Схожі повідомлення

Увага, тільки СЬОГОДНІ!