Вірус грипу - мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень
Грип - гостра інфекційна хвороба, яка відрізняється крайньою заразливість і викликає великі епідемії і навіть пандемії.
Мал. 114. Вірус грипу. Ув. 25 000,
Вірусну етіологію грипу встановили в 1933 р англійські дослідники У. Сміт, К. Ендрюс, Р. Лейдлоу. Вони довели, що змиви з носоглотки людей, хворих на грип, містять вірус, до якого виявилися чутливі білі африканські тхори.
Морфологія. Вірус грипу має округлу форму, розміром від 80 до 100 ммк (рис. 114). Іноді розташовується купками або ланцюжками. У розвиненому курячому зародку набуває ниткоподібну форму. Вірус можна виявити за допомогою електронного мікроскопа.
Культивування. Вірус грипу культивують в розвиненому курячому зародку, в культурах тканини і при інтраназальному зараженні білих мишей, тхорів і білих щурів.
Резистентність. Вірус грипу малоустойчів у зовнішньому середовищі. При кімнатній температурі гине протягом кількох годин, при нагріванні до 60 ° - за 30 хвилин, а при кип`ятінні миттєво. Нестійкий до дії озону і ультрафіолетових променів. Хлор, формалін,
хлорне вапно, кислоти, луги, спирт швидко руйнують грипозний вірус. Більш стійкий до висушування.
Антигенна структура. В даний час встановлено, що збудниками епідемічного грипу є три типи вірусу - А, В і С, що відрізняються за своїми антигенними властивостями. Тип А має різновиди А, А1 і А2. У межах кожного типу зустрічаються серологічно різні варіанти. Кожен серологічний тип має антигенну самостійністю, і тому перехресного імунітету не спостерігається. Цим пояснюються повторні захворювання на грип. Кожна велика епідемія грипу викликається появою і поширенням нового різновиду грипозного вірусу.
Патогенність для тварин і токсичні речовини. До вірусу грипу дуже чутливі тхори. Тхорів можна заразити через дихальні шляхи, причому хвороба у них протікає при підйомі температури і гнійному катарі слизових оболонок. Грипозний вірус вдалося перенести і на білих мишей шляхом інтраназального зараження їх під легким ефірним наркозом матеріалом, отриманим від хворих тхорів. Перебіг хвороби у мишей характеризується відсутністю ураження верхніх дихальних шляхів, але у них розвивається важке ураження легень, часто приводить до загибелі.
Токсичні властивості вірусу грипу встановлені в експериментах на кроликах, морських свинках і мишах. Токсичний фактор знаходиться в крові людей, хворих на грип.
Патогенез і клініка. Джерелом інфекції є хвора людина. Зараження грипом відбувається повітряно-крапельним шляхом і прямим контактом. Розмноження вірусу відбувається в епітеліальних клітинах слизової оболонки дихальних шляхів. Вірус грипу має як місцеве, так і загальну токсичну дію на організм, проникаючи в кров і внутрішні органи.
Інкубаційний період при грипі короткий (1 - 2 доби). Захворювання характеризується раптовим підйомом температури, головним болем, запамороченням, почервонінням зіва, закінченням з носа, кашлем з слизовими виділеннями з бронхів і гортані. Захворювання, викликане вірусом грипу, сприяє різкому посиленню агресивності ряду інших патогенних мікробів, що зустрічаються на слизових оболонках дихальних шляхів: пневмококів, гемолітичного стрептокока
і паличок грипу. Приєднання вторинної інфекції, спричиненої перерахованими мікробами, обумовлює різні ускладнення грипу (пневмонія, міокардит, ураження суглобів та ін.) - Дуже серйозним ускладненням є грипозна пневмонія.
При цих пневмоніях спостерігається, як правило, бактеріємія. Поряд з бактеріальними грипом та пневмоніями зустрічаються і пневмонії, викликані одним вірусом.
Перенесене захворювання залишає нетривалий імунітет, що триває не більше 2 років. Він характеризується суворої специфічністю щодо типу вірусу, що викликав дане захворювання. У сироватці перехворіли містяться антитіла, що згубно діють на вірус грипу. Напруженість протигрипозних імунітету залежить не стільки від наявності антитіл в крові, скільки від резистентності слизової оболонки носа.
Лабораторна діагностика. Матеріалом для лабораторного дослідження служать носоглоточная слиз, змиви з носоглотки (в перші дні хвороби) з метою виявлення грипозного вірусу. Ретроспективний діагноз ставиться за допомогою реакції гальмування гемаглютинації і реакції зв`язування комплементу для виявлення антитіл в парних сироватках хворого.
Для отримання змиву з носоглотки хворого пропонують прополоскати зів 15 мл теплого фізіологічного розчину і полоскательний матеріал збирають в стерильну банку. У носові ходи хворого по черзі вводять піпеткою по 2-2,5 мл теплого фізіологічного розчину. При нахилі голови рідина збирають в ту ж банку. Носові ходи протирають ватним тампоном, який також опускають в банку. Змиви фільтрують через вату для видалення великих частинок.
У тяжкохворих і дітей матеріал із зіву збирають ватним тампоном, зволоженим стерильним бульйоном. Носові ходи протирають свіжими тампонами, які занурюють в пробірку з 5 мл стерильного бульйону. Якщо змиви пересилають в лабораторію, їх консервують гліцерином або поміщають в термос з льодом.
Перед посівом на 1 мл змиву додають (для пригнічення росту сторонньої мікрофлори) 400 ОД пеніциліну і 0,4 мг стрептоміцину, потім вводять його (0,1-0,2 мл) в амніотичну порожнину 11-12-денних курячих ембріонів. Заражених курячих ембріонів витримують в термостаті протягом 72 годин при 35-36 °, Для виявлення вірусу з ембріона стерильно відсмоктують 5-8 мл аллантоісной і 0,5-2 мл амніотичної рідини. Присутність в них вірусу виявляють за допомогою реакції гемаглютинації. Реакцію гемаглютинації можна поставити на предметному склі і в пробірках. На знежиреному предметному склі змішують краплю аллантоісной рідини з краплею 5% суспензії еритроцитів курки або морської свинки. Аглютинація еритроцитів настає через 2-3 хвилини.
Досвід в пробірках ставлять в такий спосіб. Аллантоісную рідина розводять фізіологічним розчином 1: 10, далі розведення подвоюють (1: 20, 1: 40, 1: 80 і 1: 160), як видно з табл. 28.
Таблиця 28
Схема реакції гемаглютинації (РГА)
пробірка | ||||||
інгредієнт | 1-я | 2-я | 3-тя | 4-я | 5-я | 6-я |
Фізіологічний розчин | ___ | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Аллантоіснаяжідкость (розведення 1: 10) | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | |
1% еритроцити 30 хвилин при кімнатній температурі Результат | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 Відео: Автоматизована мікробіологічна лабораторія | 0,5 |
Потім в усі пробірки додають по 0,5 мл еритроцитів курки. Облік реакції проводять через 30-45 хвилин стояння пробірок при кімнатній температурі. У контрольній (6-й) пробірці аглютинації еритроцитів не буде.
Для вирощування вірусу грипу в культурі тканини з пробірок, що містять моношар клітин, відсмоктують живильне середовище, 2-3 рази відмивають розчином Хенкса або іншим сольовим розчином і замість неї вносять 0,1-0,2 мл носоглоточного змиву. Після контакту протягом 1 години додають 1 мл живильного середовища або розчину Хенкса. Через 2-5 днів стояння в термостаті культуру мікроскопують і зростання вірусу визначають за цитопатогенну дію. Вірус грипу не завжди надає таку дію на клітини, тому для його виявлення ставлять реакцію гемадсорбції, яка полягає в наступному. У пробірку з культурою тканини додають суспензію відмитих курячих еритроцитів, які фіксуються на поверхні епітеліальних клітин, що містять вірус, у вигляді грон, розеток, що визначається мікроскопічно. Додавання типоспецифічними сироватки усуває гемадсорбції. Це дає можливість ще визначити і тип вірусу.
Тип виділеного вірусу визначають за допомогою реакції затримки гемаглютинації (РЗГА). Її можна поставити на предметних стеклах і в пробірках. На предметне скло наносять краплю виділеного вірусу грипу, типові сироватки розводять фізіологічним розчином 1: 5, 1: 10, на першому склі змішують вірус з краплею протигрипозної сироватки типу А, на другому - з протигрипозної сироваткою A1 і т. Д. На сьоме скло додають краплю нормальної сироватки. Потім вносять на кожне предметне скло третій інгредієнт реакції - краплю 5% суспензії еритроцитів. Облік реакції проводять через кілька хвилин. При змішуванні вірусу грипу з відповідною типоспецифічними сироваткою реакція аглютинації не настає, що пояснюється нейтралізацією вірусу.
Реакція зв`язування комплементу ставиться для виявлення антитіл в сироватці крові хворих. В останньому випадку її слід поставити в перші дні захворювання і повторно через кілька днів (для визначення наростання титру антитіл), так як в сироватці багатьох людей є певна кількість антитіл в результаті раніше перенесених захворювань.
Біологічна проба ставиться на мишах, яким під ефірним наркозом интраназально вводять 0,05-0,1 мл досліджуваного матеріалу. Через 2-4 дня у тварин розвивається пневмонія, яка веде до загибелі їх протягом 1-2 діб.
Простим і разом з тим цінним методом лабораторного дослідження є виготовлення препаратів відбитків (зі слизової оболонки нижньої раковини), на які наносять краплю флюоресцирующей сироватки. Виявлення при такій експрес-діагностики через кілька годин специфічного зеленувато-жовтого світіння в клітинах циліндричного епітелію слизової оболонки носа підтверджує присутність вірусу грипу.
Специфічна терапія і профілактика. Для лікування грипу застосовується протигрипозна сироватка, інтерферон (лейкоцитарний).
Специфічна профілактика здійснюється шляхом імунізації населення живою вакциною з ослабленого вірусу. Вакцина вводиться безпосередньо в дихальні шляхи шляхом закопування в носові ходи або вдихання розпорошеного препарату по Смородінцевим.
