Збудник туляремії - мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень

Вперше захворювання туляремією було описано в Каліфорнії в провінції Туляре, в зв`язку з чим мікроб, що викликає це захворювання, отримав назву Bact. tularense (описаний Мак Жодному і Чепіна в 1912 р).
Морфологія і тинкторіальних властивості. Возбудідітель туляремії є дрібну паличку (коккобактеріямі) розміром 0,2X0,7 мк (рис. 93).
В організмі людини і тварин мікроб утворює ніжну капсулу. Спор не утворює, нерухомий. Грамотріцатель. Нерідко спостерігається біполярна забарвлення.
Культуральні та біохімічні властивості. Бактерії туляремії - аероби. Оптимальна температура росту 37 °. На простих поживних середовищах не розвиваються. Хорошим середовищем для культивування туляремійних бактерій є згорнута яєчно-желточная середовище (3 частини яєчного жовтка + 2 частини стерильного фізіологічного розчину). Придатний також м`ясо-пептони | й агар з цистеїном, кров`ю і глюкозою (середа Френсіса). На щільних поживних середовищах через 48 годин перебування в термостаті з`являються дрібні круглі, блискучі, нагадують крапельки роси, колонії. При суцільному зростанні утворюється тонкий «шагренева» наліт, що складається з дрібних, несліваемий колоній. У рідких поживних середовищах палички туляремії розмножуються повільно і погано (зростання по поверхні середовища, убогий).
Середа Френсіса. До агар (pH 7,3) додають 1% цистину і 1% глюкози. Кип`ятять кілька хвилин. Після охолодження середовища до 45-50 ° додають 10% діфібрінірованной кролячій крові. Перевіряють середу на стерильність.
Кращими середовищами для вирощування бактерій туляремії є напіврідкі середовища: яєчний жовток (40%), змішаний з фізіологічним розчином (60%) або 10% жовтка і 90% фізіологічного розчину.
Біохімічна активність бактерій туляремії виражена слабо. Вони зброджують з утворенням кислоти без газу ряд вуглеводів: глюкозу, мальтозу, іноді левулезу, манозу і гліцерин, чим відрізняються від дуже схожих з ними бруцелл.

Мал. 93. Бактерії туляремії, а -в чистої культуре- б -в мазку з органу.
Не утворюють індолу, білки розкладають до сірководню.
Резистентність. Палички туляремії швидко гинуть при прогріванні вище 60 °. Пряме сонячне світло вбиває їх протягом 30 хвилин. Висушування в кімнаті бактерії переносять 25 днів. У воді виживають до 90 днів, на зерні - до 133 днів. Більшість дезінфікуючих розчинів швидко надає згубну дію на бактерії (3% розчин лізолу через 2-3 хвилини, 1% розчин трикрезолу через 2 хвилини, 50% спирт через 5 хвилин).
Патогенність для тварин і токсінообразованіе. До мікроби туляремії чутливі гризуни. Морських свинок і білих мишей можна заражати підшкірним, нашкірному, внутрішньоочеревинному і пероральним введенням мікробів. Заражені тварини гинуть від сепсису в термін від 2 до 15 днів. На розтині виявляють збільшені печінку і селезінку і найближчі до місця зараження лімфатичні вузли. У печінці і селезінці є численні вогнища некрозу. В мазках з органів виявляють дрібних бактерій, оточених ніжною капсулою.
Екзотоксину Francisella tularensis не утворює.
Патогенез і клініка. Джерелом інфекції при туляремії є водяні щури, білки, зайці, польові миші та інші гризуни. Можуть хворіти туляремією також собаки, кішки, вовки, птиці, коні, велика і дрібна рогата худоба.
Людям туляремія передається декількома шляхами: контактним - при зіткненні з хворими тваринами або їх трупами (при вилові гризунів, зняття з них шкурок), аліментарним - через воду і харчові продукти, які можуть бути інфіковані виділеннями хворих тварин або їх трупами, аспіраціоіним - при вдиханні пилу, забрудненої паличкою туляремії, трансмісивним - в основному через кліщів і різних комах (блохи, мухи та ін.).
Зараження туляремією відбувається через шкіру (пошкоджену і неушкоджену) і слизові оболонки.
У людини розрізняють наступні клінічні форми туляремії.
Група А (форми туляремії з вираженим ураженням шкіри, слизової оболонки і внутрішніх органів): 1) бубонна форма-2) виразково-бубонная-. 3) глазная- 4) ангінозний-бубонная- 5) форма туляремії з іншими зовнішніми ураженнями.

Група Б (форми туляремії з переважним ураженням внутрішніх органів): 1) туляремія з переважним ураженням дихальних шляхів-. 2) туляремія з переважним ураженням шлунково-кишкового тракта- 3) туляремія з ураженням інших органів.

Інкубаційний період триває від 1 до 10 днів.
Хвороба починається гостро: підвищення температури, озноб, блювота, головний біль і ломота у всьому тілі.
При бубонної формі па шкірі в місці вхідних воріт інфекції поразок не відзначається. На 3-4-й день найближчі лімфатичні вузли збільшуються і робляться хворобливими. Утворилися бубони можуть нагноиться. Тоді вони розкриваються і утворюються виразки, які потім рубцюються.
Перебіг туляремії може бути гострим (до 1-3 місяців), затяжним (до року і більше) і рецидивуючим, коли перехворів туляремією почувається практично здоровою, а потім, через 1-2 роки, знову захворює при відсутності додаткового зараження.
Імунітет. В організмі перехворілих туляремією знаходять антитіла (аглютиніни, преціпітіни, антитіла, що зв`язують комплемент). Перенесена туляремія залишає міцний і тривалий імунітет. Описані випадки повторного захворювання туляремією. Радянські дослідники Л. М. Хотеневер, Н. Г. Олсуфьев, І. Н. Травневий і ін. Вважають, що несприйнятливість при туляремії спочатку носить характер нестерильного, а потім стерильного імунітету.
Організм хворого протягом інфекційного процесу протягом значного часу після одужання знаходиться в стані алергії, що виявляється при введенні туляріна (гліцерінізірованная суспензія вбитих нагріванням Francisella tularensis).
Лабораторна діагностика. Своєчасне розпізнавання туляремії має велике протиепідемічні значення, так як дає можливість негайно вжити заходів до ліквідації цієї легко розповсюджується інфекції. Матеріалом для дослідження служить виділення виявило бубонної, пунктат із закритих бубонної і кров хворих.
Виділити культуру пут ^ м безпосереднього посіву матеріалу на живильні середовища не представляється можливим. Тому для виділення бактерій туляремії користуються біологічним методом, заражаючи досліджуваним матеріалом тварин, чутливих до збудника даного захворювання.
Одночасно з посівом готують мазки-відбитки, фарбують за Романовським-Гімзою і микроскопируют. В мазках з органів бактерії туляремії розташовуються внутрішньоклітинно і скупченнями. Виділений мікроб ідентифікують за морфологічними, біохімічними та серологічним властивостям. Лабораторна діагностика туляремії може проводитися в спеціальних лабораторіях.
Серодиагностика туляремії полягає в постановці реакції аглютинації з діагностикумом Fr. tularensis. Реакцію можна поставити з 2-го тижня захворювання. Розведення сироватки хворого роблять від 150 до 1 800 (табл, 21). Облік реакції проводять через 18-20 годин. Позитивним результатом вважається ясна аглютинація, отримана в розведенні 1 100 і вище.
Таблиця 21
Схема постановки розгорнутої реакції аглютинації для діагностики туляремії

Примітки: 1, Сироватку, розведену 1:25, наливають тільки в пробірки 1-ю, 2-ю і 6-ю, після чого 0,5 мл вмісту 2-й пробірки переливають в 3-ю пробірку і т. Д., а з 5-ї пробірки 0,5 мл виливають.
2. Таблиця запозичена з керівництва до практичних занять з мікробіології К. Д. Пяткіна, Н. С. Маркової і Н. Д. Трофімової.

Алергічна реакція. В результаті захворювання на туляремію у людини розвивається підвищена чутливість до вірусу туляремії. Це алергічне стан може бути виявлено внутрикожной пробою. Для постановки алергічної проби необхідно мати алерген тулярином. Тулярином є 3% глицериновую суспензія в фізіологічному розчині Fr. tularensis, убитої нагріванням при 70 ° по 1 годині протягом 3 днів. Для нашкірної проби 1 мл туляріна містить 1 млрд., А для внутрішньошкірної проби-100 млн. Мікробних тіл. При внутрішньошкірної пробі вводять 0,1 мл туляріна, при нашкірної на скаріфіцірованную шкіру наносять і злегка втирають 1 каплк} препарату. При позитивній реакції на місці введення туляріна через 3-6-10 годин з`являється місцева запальна реакція.