Бактерії кишково-тифозної групи - мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень
Бактерії кишково-тифозної групи відносяться до сімейства Enterobacteriaceae і включають в себе наступні мікроорганізми: 1) Е. coli (рід Escherichia),
- S. typhosa, S. paratyphi, S. schottmulleri і збудники харчових токсикоінфекцій (рід Salmonella) і
- Sh. dysenteriae (рід Shigella).
Незважаючи на те, що бактерії кишково-тифозної групи відрізняються один від одного ступенем патогенності і викликають різні захворювання, всіх їх об`єднує ряд загальних ознак.
Місцем їх проживання є кишечник. Проникають в організм через рот, викликають патологічні процеси в шлунково-кишковому тракті і мають ряд загальних морфологічних і біохімічних ознак. Всі ці мікроорганізми є дрібними, не утворюють спор і капсул, палички. Вони рухливі (перитрихи) за винятком дизентерійної палички, фарбуються звичайними аніліновими фарбами, грамнегативні. Ростуть добре на звичайних поживних середовищах, краще в аеробних умовах, желатину НЕ розріджують і не патогенні для лабораторних тварин (виняток становлять збудники харчових отруєнь - сальмонели).
Морфологія, культуральні та біохімічні властивості бактерій кишково-тифозної групи дозволяють вважати, що родоначальником усіх патогенних представників цієї групи є кишкова паличка, що пристосувалася в процесі еволюції до існування в кишечнику тварин і людини і володіє найбільшою з усіх видів цієї групи мікробів біохімічної активністю. Е. coli, що володіє великою схильністю до мінливості в залежності від умов її існування в організмі тварин і людини, поступово втрачала свою біохімічну активність і придбала патогенні властивості. Так виникли нові види, пристосовані до паразитичного існування тільки в людському організмі (S. typhosa, Sh. Dysenteriae). При цьому родоначальником тифозною групи бактерій були рухомі форми кишкової палички, а дизентерійної групи - нерухомі форми.
Біохімічна активність різних представників кишково-тифозної групи бактерій підтверджує правильність цього припущення.
Найбільшою активністю володіють бактерії роду Escherichiae. Вони розкладають пептони, ферментують майже всі вуглеводи до кислоти і газу, згортають молоко. З патогенних мікробів до кишкової палички найближче стоїть група паратіфозних бактерій, яка відрізняється від Е. coli тим, що не зброжує лактози і сахарози і не згортає молока. Найбільш патогенна для людини брюшнотифозная паличка відстоїть далеко від кишкової палички, і тому ферментує її здатність значно менше, ніж у паратіфозних бактерій (розкладає глюкозу, мальтозу і маніт тільки до кислоти, без утворення газу). Таким чином, якщо зіставити патогенність мікробів кишково-тифозної групи з їх ферментативної здатністю, то виявляється що, ніж більш патогенні бактерії, тим біохімічно вони менш активні.
Для вирощування патогенних представників кишково-тифозної групи бактерій, а також для їх ідентифікації і в першу чергу для відмінності від кишкової палички використовують диференційно-діагностичні та елективні поживні середовища. З огляду на те що з усіх мікробів, що входять в кишкову групу, лише кишкова паличка розкладає лактозу, цей вуглевод входить в усі диференційно-діагностичні середовища, що застосовуються для відмінності патогенних представників від Е. coli.
З цією метою, крім середи Ендо, застосовують середу Левіна, бактоагар Ж (Плоскірєва) і ін. На цих середовищах кишкова паличка зростає у вигляді забарвлених в певний колір колоній, в той час як колонії патогенних мікробів безбарвні. Колонії патогенних бактерій, що не розкладають лактози, будуть безбарвними (рис. 77).
Мал. 77. Зростання кишкової і брюшнотифозной паличок на середовищі Ендо (а) і середовищі
Левіна {б).
До 100 мл стерильного розплавленого агару додають: 1) 2 г молочного цукру, розчиненого і прокипяченного в невеликій кількості води-2) 2 мл підігрітого розчину сіні- 3) 2 мл розчину еозіна- 4) 0,2 г двуосновному фосфорнокислого калію (К2НРО4) , попередньо розчиненого в стерильній воді. Середовище розливають по чашках.
Середовище має фіолетовий колір.
На середовищі Левіна кишкова паличка утворює сині або чорні колонії, а патогенні бактерії - колонії прозорі, безбарвні або з рожевим відтінком.
В даний час випускається суха середу Левіна (середа з еозином і метиленової синню). Готується вона аналогічно сухому середовищі Ендо.
Сухий бактоагар Ж (плойок і рев а). Випускається зазвичай у вигляді готової живильного середовища. Призначений для виділення тифо-паратіфозних і дизентерійних бактерій із випорожнень хворого. Гігроскопічний і світлочутливий порошок треба зберігати герметично закритим в темряві. Індикатором є нейтральрот. Препарат містить також солі жовчних кислот. Для виготовлення середовища 7 г порошку висипають в 100 мл холодної дистильованої води, розбовтують до повного змочування порошку водою. Суміш нагрівають до кипіння, не допускаючи прогорання, і кип`ятять 2 хвилини, потім охолоджують до 50 ° і розливають в чашки, добре підсушують, відкриваючи кришки, і оберігають від дії світла. Бактерії, які розкладають лактозу (кишкова паличка), утворюють червоні колонії, а бактерії, що не розкладають лактози (тифо-паратіфозние і дизентерійні), дають прозорі, безбарвні колонії. Зростання супутньої мікрофлори, в тому числі кишкової палички, сильно пригнічується. З огляду на бактерицидні властивості середовища, її можна розливати в нестерильні чашки.
Для ідентифікації виділеної культури застосовують «строкатий ряд» вуглеводів, середу Ресселя, а також молоко з лакмусом.
Середовище Ресселя. До 100 мл м`ясо-пептонного агару (рН = 7,2) додають 1 г лактози, 0,05 г глюкози і 1 мл реактиву Андредё. Розливають у пробірки по 10-15 мл і стерилізують текучою парою 3 дні по 30 хвилин. Після стерилізації агар слід скосити так, щоб нижня половина залишилася стовпчиком, а верхня - в вигляді скошеного агару. При зброджуванні глюкози почервоніння спостерігається тільки в стовпчику агару, при розкладанні лактози різко червоніє все середовище як по уколу, так і по штриху. Розрив агару свідчить про газоутворення.
Техніка посіву на середу Ресселя наступна. Стерильною петлею знімають з чашки підозрілу (на наявність патогенних бактерій) колонію, вносять уколом в стовпчик середовища, а залишок мікробів на петлі засівають штрихом по скошеної поверхні.
Молоко з лакмусом. До молока додають 5-10% лакмусовим настоянки і стільки ж 10% розчину вуглекислого натрію, щоб піна молока прийняла синювато-фіолетового відтінку. Розливають у пробірки і стерилізують дрібно 3 дні поспіль по 30 хвилин.
Крім перерахованих поживних середовищ, для вирощування патогенних представників кишково-тифозної групи користуються елективних поживними середовищами (середа з жовчю, вісмут-сульфіт-агар).
Бульйон з жовчю. До м`ясо-пептонному бульйону додають 10-25% жовчі, розливають по флаконах, куди вкладають бродильні трубки. Стерилізують при 112 ° протягом 20 хвилин або текучою парою 3 дні поспіль по 20-30 хвилин.
Середа Рапопорт і Вайнтруб. До 1 л м`ясо-пептонного бульйону додають 100 мл жовчі, 20 г глюкози або маніту і кислий фуксин до чітко рожевого кольору, розливають по 50 100 мл у флакони з поплавками. В колбочки з 50 мл живильного середовища опускають трубочки-поплавці з поперечним діаметром 0,8-0,9 см і такої довжини, щоб після засіву вони височіли на 3-3,5 см над рівнем рідини. Стерилізують текучим паром 3 дні поспіль по 30 хвилин. Недосіяними середовище має злегка жовтуватий відтінок. Після посіву вона забарвлюється в коричневий колір внаслідок гемолізує дії жовчі. При зростанні черевнотифозних бактерій колір середовища змінюється при зростанні паратіфозних бактерій, зазначається дифузний ріст, почервоніння і газоутворення »
Вісмут-сульфіт-агар (середа Вільсона -Влера) п про М і і до е в и ч у. 1. Змішують 1 г глюкози, 1,25-1,5 г сірчанокислого натрію, 1 г двуосновному фосфорнокислого натрію і розчиняють в. 20 мл підігрітої до 85 ° стерильної дистильованої води. 2. Готують розчин вісмуту, розчиняючи 0,4 г лимонно-амонійного вісмуту при струшуванні в 5 мл гарячої дистильованої води, куди додають 0,1 мл 10% розчину їдкого натра- розчин стає молочно-каламутним. Ці два розчину змішують і отриману суміш додають до 100 мл розплавленого і охолодженого до 60 ° агару, до якого попередньо додають 1 мл 8% розчину сірчанокислого заліза. Після цього до середовища додають 0,4 мл 1% водного розчину брілліантгрюна- отриману молочно-мутнувату середу (pH 8,0-8,1) розливають по чашках і підсушують в термостаті.
Черевнотифозні бактерії на цьому середовищі через 24 години дають плоскі колонії темного брудно-димчастого кольору на білому тлі в прохідному світлі. До кінця 2 діб колонії збільшуються в обсязі і приймають темно-зелене забарвлення, іноді більш світлу на периферії. Паратіфозние бактерії дають слизисто-вологі, злегка опуклі, чорного кольору з темними ореолами колонії. Кишкові палички утворюють колонії коричневі, в`язкі, які виростають пізніше колоній черевнотифозних бактерій.
Випускається суху середу вісмут-сульфіт-агар по Вільсону - Блеру готують аналогічно середовищі Ендо.
