Бактерії коклюшу і параклюша - мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень

Однією з поширених дитячих інфекцій є коклюш. Збудник цього захворювання виявлено в 1906 р Борде і Жангу в мокроті хворих на кашлюк і названий Bordetella pertussis (рис. 75).
Морфологія і тинкторіальних властивості. Короткі із закругленими кінцями палички мають в довжину 0,5 2 мк і в товщину 0,2-0,5 мк. Нерухомі, спор не утворюють, грамотріцательни- деякі штами утворюють капсулу.
Культуральні та біохімічні властивості. Найкращий ріст спостерігається при температурі 35-37 ° - факультативний анаероб. Перші генерації вимагають присутності крові в живильному середовищі. Для культивування бактерій коклюшу застосовується гліцеринового-картопляний кров`яний агар, запропонований Борде і Жангу, молочно-кров`яний агар і казеїново-вугільний агар (КУА).

Мал. 75. Палички коклюшу. Мазок з культури.

1. Середа Борде-Жангу. Для приготування гліцеринового - картопляного кров`яного агару 100 г дрібно нарізаної картоплі з 200 мл 4% водного розчину гліцерину варять в автоклаві, дають відстоятися і зливають рідину з осаду. На 50 мл 1 цієї рідини додають 150 мл фізіологічного розчину кухонної солі і 5 г промитого і подрібненого агар-агар, розчиняють, розливають по пробірках і стерилізують. Перед вживанням агар розчиняють, охолоджують до 45 ° і до нього додають в рівній частині Дефібриновану кров кролика або людини, підігріту до 40-45 °. Кров`яному агару дають застигнути в скошеному положенні або виливають в чашки.
2. Молочно-кров`яний агар. Для приготування молочно-кров`яного агару рекомендується розтопити 5% водний агар з 1% кухонної солі і змішати в рівних кількостях із знежиреним підігрітим молоком, після чого протягом 40 хвилин варити в автоклаві при 0,5 атм (за цей час відбувається згортання молока). Гарячу суміш профільтрувати через шар марлі з ватою, розлити мірно по пляшках і знову простерилізувати в автоклаві протягом 20 хвилин при 0,5 атм. Потім до охолодженої до 45-50 ° молочному агару долити 20% дефибринированной баранячої крові. Для придушення сторонньої мікрофлори до середовища додати пеніцилін в кількості 5 ОД на чашку (20 мл середовища).
3. Казеїново-вугільний агар (КУА) готується наступним чином. На 1 л дистильованої води беруть 20 мл гідролізату казеїну (отриманого триптичних переварюванням), 5 г хлористого натрію, 0,002 г хлористого кальцію, 0,4 г вуглекислого натрію, 0,002 г хлористого магнію, 0,25 г фосфорно-двукаліевой солі, 1 г розчинного крохмалю і 20 г агар-агару. Середу варять, як звичайний агар, встановлюють pH 7,2, розливають у флакони і стерилізують в автоклаві при 0,5 атм 30 хвилин. Перед вживанням в розтоплену і охолоджені середу додають 0,2% активованого вугілля і 3% дріжджового екстракту.

Колонії кашлюку палички дрібні, підняті, з перламутровим блиском із зоною гемолізу (рис. 76). При подальшому культивуванні зростання стає більш грубим і пишним. Коклюшні бактерії не розкладають цукрів, не утворюють індолу, не відновлюють нітритів.
Резистентність. Bordetella pertussis малоустойчива, швидко гине при кип`ятінні і дії дезінфікуючих речовин. До холоду паличка кашлюку менш чутлива.
Патогенність для тварин і токсінообразованіе. Паличка коклюшу патогенна для білих мишей, кроликів і морських свинок. Піддослідні тварини при введенні їм великих доз як живих, так і вбитих культур гинуть під впливом ендотоксину, що звільняється при руйнуванні мікробних тіл. Для вивчення токсинів кашлюку палички використовують кроликів-альбіносів. При внутрішньошкірне введення їм культури мікроба через 18-24 години на місці введення утворюються геморагії з подальшою некротізаціей ділянки шкіри.
В останні роки вдалося отримати отруйну речовину типу екзотоксину, яке, будучи введено білим мишам, викликало накопичення антитоксина.
Джерелом інфекції є діти переважно в катаральній стадії хвороби, що розсіюють бактерії в крапельках слизу при кашлі. Захворювання передається повітряно-крапельним шляхом. Вхідними воротами інфекції є слизова оболонка верхніх дихальних шляхів. Мікроби локалізуються на слизовій оболонці дихальних шляхів і в легких, але в болісний процес внаслідок дії токсинів втягується весь організм.
Інкубаційний період дорівнює 3-11 дням.
Перебіг захворювання можна розділити на три періоди: 1) катаральний період, який характеризується незначним підвищенням температури, головним болем, кашлем і насморком- тривалість цього періоду від 5 до 11 днів-2) конвульсивний період - в цьому періоді хвора дитина страждає від болісних нападів кашлю. Під час нападу обличчя його стає одутлим, ціанотичним, очі випячіваются- число конвульсивних нападів кашлю в важких випадках може досягати 30 в добу-3) період дозволу- відрізняється від попереднього періоду тим, що напади кашлю стають все більш рідкісними, легше переносяться хворим і, нарешті, зовсім припиняються.
В основі патогенезу коклюшу лежить дію ендотоксинів кашлюкових паличок на нервові волокна блукаючого нерва, по якому збудження передається в дихальний центр. Різні ускладнення, які можуть мати місце при кашлюку, деякі дослідники пояснюють як результат розвитку інфекційної алергії.
Дуже схожу з кашлюк клінічну картину захворювання викликає паракоклюшная паличка (Bordetella parapertussis). Діти, які перенесли кашлюк, можуть захворіти паракоклюшем.
За морфологічними, тинкторіальними, культуральними та антигенними властивостями паракоклюшная паличка схожа з кашлюку. Відрізняється вона тільки характером росту на деяких поживних середовищах і здатністю ферментувати сечовину (табл. 11).
Таблиця 11
Основні диференціальні ознаки бактерій коклюшу і паракашлюку

Імунітет. Перенесене захворювання залишає міцний антимікробний імунітет. У сироватці хворих і реконвалесцентів виявляються аглютиніни і комплементсвязивающіе антитіла.
Лабораторна діагностика. Матеріалом для лабораторного дослідження служить мокрота, частіше - слиз з носоглотки і гортані, що отримується методом «кашельних пластинок». Виділення культури кілька ускладнюється тим, що в зіві хворих дітей є чимало сапрофітних мікробів, що перешкоджають вирощування паличок коклюшу. Тому вигідніше брати досліджуваний матеріал з глибини носоглотки спеціальним тампоном (глибокий ватний тампон). До того ж у хворого в момент взяття матеріалу може довго бути відсутнім кашель.

Брати матеріал треба не торкаючись, зовнішнього краю пробірки, а також слизової мови, щік і шкірних покривів, щоб стороння мікрофлора не потрапила на тампон.

Мал. 76. Колонії кашлюку палички на середовищі КУА.
Метод забору матеріалу за допомогою тампонів значно підвищує відсоток висівання кашлюку палички.
Взятий від хворого матеріал методом «кашельних пластинок» або тампоном засівають на спеціальні живильні середовища: гліцеринового-картопляний агар по Борді, молочно-кров`яний агар або казеїново-вугільний агар (КУА).
Для придушення росту сторонньої мікрофлори, що перешкоджає розмноженню палички коклюшу або паракашлюку, до агару додають за 0,5 години до засіву пеніцилін (15-25 ОД на 12 мл середовища) і рівномірно розподіляють по поверхні середовища. Щоб забезпечити достатню вологість, необхідну для розмноження кашлюкових і паракоклюшная паличок, в термостат ставлять відкрита посудина з водою. На середовищі Борде-Жангу на 2-5-е добу бактерії коклюшу і паракашлюку утворюють типові дрібні, опуклі, чітко окреслені, блискучі, нагадують крапельки ртуті, колонії (рис. 76). На молочному, кров`яному і казеїново-вугільному агарі колонії більші, білуватого кольору з перламутровим блиском.
З колоній з ознаками, характерними для бактерій коклюшу або паракашлюку готують мазки, фарбують за Грамом і мікроскопують. При наявності в препаратах дрібних, овоидной форми грамнегативних паличок ставлять мікроскопічну агглютинацию з протівококлюшние сироваткою.
Агглютинируют сироватку розводять фізіологічним розчином 1: 100 і на предметне скло наносять одну краплю розведеної сироватки і одну краплю фізіологічного розчину для контролю. Петлею знімають одну колонію з агару і емульгують її в невеликій кількості фізіологічного розчину. Дві-три краплі цієї суспензії окремими піпетками змішують з агглютинируют сироваткою і фізіологічним розчином. При позитивному результаті реакція аглютинації проявляється негайно, в рідкісних випадках протягом 5 10 хвилин. У краплі фізіологічного розчину реакція аглютинації відсутня і рідина зберігає рівномірну каламуть. Паракоклюшная паличка теж аглютинується кашлюку сироваткою в невеликому розведенні, так як бактерії коклюшу і паракашлюку володіють загальними антигенами.
Для диференціації кашлюку і паракоклюшная бактерій з колоній на чашках роблять пересів на скошений агар з тієї ж живильним середовищем, яка використовувалася для виділення збудника з патологічного матеріалу. Посів ставлять в термостат при 37 ° на добу. Чистий культура паракоклюшная палички виростає вже через 24 години, а кашлюку тільки через 48 годин. Відбувається також зміна кольору живильного середовища при зростанні паракоклюшная палички. Казеїново-вугільний агар забарвлюється дифузно в буроватокорічневий колір, а агар Борде і молочно-кров`яний агар помітно темніють. При зростанні кашлюку палички колір живильного середовища не змінюється. Коклюшна паличка на звичайному агарі не росте, зростання паракоклюшная палички супроводжується дифузним фарбуванням середовища в коричневий колір. Для остаточної ідентифікації паракоклюшная палички ставлять пробу на уреазу. Пробірку струшують і ставлять в термостат на 30 хвилин. Паракоклюшная бактерії, які продукують уреазу, розщеплюють сечовину з утворенням аміаку, який змінює колір середовища на малиново-червоний колір.
Серологічна діагностика кашлюку заснована на постановці реакції аглютинації і реакції зв`язування комплементу. Так як при кашлюку розвивається алергічне стан, то з метою діагностики можна поставити алергічну пробу, яку враховують через 24 години після введення під шкіру 0,1 мл коклюшного антигену.
Специфічна профілактика. Активна імунізація за допомогою вакцин показала її безсумнівну ефективність.
В даний час в практику введені змішана коклюшно-дифтерийная вакцина і коклюшно-дифтерійно-правцевим. Ці препарати є сумішшю, що складається з кашлюкових мікробів, убитих мертіолята, і очищеного концентрованого дифтерійного і в другій вакцині правцевого анатоксину (АКДС).
З метою профілактики дітям, які контактували з хворим, можна вводити 1,5-3 мл людського гамма-глобуліну.
Для лікування рекомендують антибіотики - стрептоміцин, тетрациклін, окситетрациклін і ін.