Ентеровіруси - мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень
У цю групу входять віруси незначні за своїми розмірами. До ентеровірусів відносяться вірус поліомієліту, Коксакі, ECHO, вірус ящура і ін. Ентеровіруси складають одну групу, так як мають ряд загальних властивостей: морфологія, малі розміри, наявність інфекційної РНК, стійкість до ефіру, локалізація в кишечнику хворих людей і вірусоносіїв (кишкові віруси ).
А. Вірус поліомієліту
Поліомієліт - гостре інфекційне захворювання, переважно дитячого віку. Зустрічається спорадично, а іноді у вигляді епідемічних спалахів. Назва хвороба отримала від грецького слова «повне», що означає сірий. Поліомієліт - запалення сірої речовини спинного мозку.
Вірусна природа поліомієліту була доведена в 1909 р К. Ландштейнером і Е. Поппером шляхом успішного зараження мавп введенням їм емульсії спинного мозку дитини, загиблого від поліомієліту. У експериментально заражених мавп головним симптомом захворювання є паралічі.
Роботами ряду авторів встановлено присутність вірусу в мозку, нервах, лімфатичних вузлах і виділеннях хворих (слиз верхніх дихальних шляхів, випорожнення). Розміри частинок дуже малі (8-17 ммк), форма вірусних частинок кругла або ниткоподібна (рис. 116). В останні роки вірус поліомієліту виділений в формі кристалічного протеїну, що володіє інфекційними властивостями. Культивується вірус поліомієліту в культурі клітин з нирок мавп і клітин HeLa, активно зростаючих в пробірці. Розмноження вірусу визначається по його цитопатогенну дію.
Антигенна структура вірусу неоднакова. Встановлено існування трьох самостійних і різних імунологічних типів, з яких кожен створює імунітет у людей і мавп до гомологічних типу.
Вірус дуже довго і добре зберігається в гліцерині, виносить холод і висихання, але дуже чутливий до тепла: нагрівання протягом півгодини до 50 ° вбиває його. Вірус поліомієліту нестійкий по відношенню до хімічних дезінфікуючих веществам- його вбиває 1% розчин фенолу, 1% розчин перекису водню, 1% розчин перманганату калію та ін. 
Мал. 116. Вірус поліомієліту. Ув. 60 000.
Вірус стійкий до кислоти шлункового соку (виявляється в екскрементах хворих).
Крім мавп, експериментальний поліомієліт отримано також у щурів, хом`яків і білих мишей.
Патогенез і клініка. Джерелом інфекції є хвора людина, особливо заразливий в кінці інкубаційного і в розпалі гострого періоду хвороби. Хворі люди і вірусоносії виділяють вірус з випорожненнями. Збудник поліомієліту короткочасно також знаходиться на слизовій оболонці носоглотки хворого (останні дні інкубації і перші дні хвороби). Передається поліомієліт переважно аліментарним, а також повітряно-крапельним шляхом. Є дані, що підтверджують передачу заразного початку через воду, молоко і мухами.
Вхідними воротами інфекції є слизові оболонки верхніх дихальних шляхів і травного тракту. Інкубаційний період може тривати від 2-3 днів до 3 тижнів. Захворювання починається раптовим підвищенням температури і загальними інфекційними симптомами, до яких нерідко приєднуються катаральні явища з боку слизових оболонок (ангіна, кашель, нежить, біль у горлі). Основний симптом захворювання з`являється на 5-й день хвороби і полягає в розвитку паралічів, переважно нижніх кінцівок.
При благополучних випадки паралічі іноді проходять, але частіше залишаються і роблять дітей інвалідами. У 10-15% випадків хвороба закінчується летально.
Крім описаної важкої форми поліомієліту (паралітичної), зустрічаються ще дві форми захворювання легші з успішним результатом: 1) абортивні і 2) Непаралітична (менингеальная).
Імунітет. Перенесене захворювання залишає після себе міцний імунітет. У крові перехворілих виявляються специфічні нейтралізуючі вірус імунні тіла. У механізмі імунітету антитіла не грають суттєвої ролі. Захворювання може спостерігатися у осіб з великою кількістю антитіл.
Імунітет при поліомієліті обумовлений, ймовірно, не гуморальними, а іншими, можливо, місцевими тканинними факторами.
Лабораторна діагностика. Екскременти хворих і змив з носоглотки при вирусоносительстве збирають в широкогорлі невеликі флакончики і доставляють в лабораторію в посуді з льодом або в 50% гліцерині.
З випорожнень готують 10% суспензію в фізіологічному розчині, струшуючи їх в колбі з намистом протягом 5 хвилин. Центрифугують 30-40 хвилин, супернатант відокремлюють градуйованою піпеткою і на кожен мілілітр до неї додають по 1000 ОД пеніциліну і 500 ОД стрептоміцину для знищення фекальної мікрофлори.
Через 1-2 години стояння при кімнатній температурі заражають три пробірки з культурою тканини нирковий епітелій мавп або ембріона людини, клітини Нер-2 і т. Д.). У кожну з цих пробірок вносять по 1 мл суспензії фекалій і 1 мл живильного середовища і ставлять в похилому положенні в термостат на 1 годину для контакту вірусу з клітиною. Після цього всю рідину з пробірок видаляють, щоб попередити можливість пошкодження клітин токсичними продуктами фекалій, і додають по 1,5 мл живильного середовища. Ставлять в термостат на 2-14 днів нерухомо або в обертовий барабан. Під час обертання пробірок культура тканини постійно
омивається живильним середовищем і звільняється від шкідливих продуктів обміну.
Наявність цитопатогенного ефекту (зміна форми клітин, поява зерен пігменту) вказує на присутність вірусу в досліджуваному матеріалі в тих випадках, коли Цитопатогенні ефект зберігається в наступних пасажах.
Носоглотковий змив після обробки (0,2-0,5 мл) вносять в пробірку з культурою тканини в обсязі 1,5 мл.
Для визначення типу виділеного вірусу культуральну рідину, що містить вірус, змішують з сироватками, що містять антитіла до вірусу I, II і III типів. Потім кожної сумішшю заражають культуру тканини. Якщо типова сироватка нейтралізує виділений вірус, т. Е. Клітини культури тканини залишаються неушкодженими, можна вважати, що від хворого виділено вірус відповідного типу.
Для підтвердження діагнозу поліомієліту ставлять реакцію нейтралізації парних сироваток хворого (взятих на початку і через 1-2 місяці після початку хвороби) з типовими штамами вірусу. Прогріту протягом 30 хвилин при 56 ° сироватку хворого розводять розчином Хенкса 1: 4-1: 64 і кожне розведення в кількості 0,25 мл змішують зі стандартною дозою вірусу (100 цитопатогенности доз - 0,25 мл вірусу поліомієліту) відповідно I, II і III типу. Після годинного контакту при кімнатній температурі сумішами заражають по дві пробірки культури тканини і поміщають в термостат на 4-7-9 днів. Зміна кольору середовища (з малинового на жовтий) свідчить про наявність в досліджуваній сироватці антитіл, так як сталася нейтралізація вірусу і клітини тканини, залишаючись життєздатними, дають зміна кольору індикатора в результаті дії їх продуктів обміну.
Для діагностики може бути застосована і реакція зв`язування комплементу з антигенами з типових штамів вірусу поліомієліту.
Специфічна профілактика і терапія. Специфічна профілактика поліомієліту заснована на імунізації населення вакциною. Перша вакцина була отримана в 1953 р Солка (США) з рідкої культури I, II і III типів (на ниркової тканини мавпи), інактивованої формаліном. В даний час в широких масштабах увійшла в практику жива вакцина з живого, але ослабленого вірусу (вакцина Себіна), що перевершує за своєю ефективністю вакцину Солка.
З метою екстреної профілактики і для лікування застосовують ПОЛІОМІЄЛІТНОЇ гамма-глобулін, що отримується з сироватки дорослих людей, що містить підвищену кількість антитіл проти вірусу поліомієліту.
Б. Віруси Коксакі і ECHO
Віруси Коксакі (Coxsackievirus) отримали свою назву по місту Коксакі (США), де вперше в 1948 р виділені з випорожнень хворих дітей з симптомами ураження центральної нервової системи.
Віруси ECHO (Enteric cytopathogenen human orphans) - кишкові Цитопатогенні людські віруси - виділені в 1941 р Дж. Ендерсом з співробітниками.
Віруси Коксакі і ECHO за епідеміологічними даними близькі до вірусу поліомієліту. Разом з останнім вони утворюють групу кишкових вірусів.
Віруси Коксакі і ECHO широко поширені в багатьох країнах. Їх знаходять в кишечнику (рідше в глотці) хворих людей і вірусоносіїв. Понад 5% здорових дітей до 4 років є вірусоносіями. Віруси також знаходять у стічних водах і у мух.
Віруси Коксакі і ECHO відносяться до дрібних вірусів (від 20 до 30 ммк). В їх хімічний склад входить білок і рибонуклеїнова кислота. Група вірусів Коксакі ділиться на дві підгрупи - А і В, в підгрупу А входять 24 серологічних типу, в підгрупу В-6 серологічних типів. Вірус ECHO включає близько 30 серологічних типів.
Зараження вірусами Коксакі і ECHO відбувається так само, як і іншими кишковими інфекціями, від хворої людини або вірусоносія, можливий і повітряно-крапельний шлях. Віруси Коксакі викликають гострий інфекційний процес (асептичний серозний менінгіт, енцефаліт, герпангіна і інші процеси), зазвичай протікає доброякісно, виключаючи міокардит новонароджених (70% летальності).
Захворювання, що викликаються вірусами ECHO, також характеризуються різноманітною клінічною картиною, але найбільш часто спостерігаються асептичнийменінгіт і вірусний ентерит.
При вірусологічної діагностики дослідженню підлягають випорожнення, змиви з носоглотки, спинномозкова рідина, якими після обробки антибіотиками засівають культуру тканини для виявлення цитопатогенного дії і заражають новонароджених мишей. Віруси ECHO непатогенних для тварин, але в культурі тканини викликають Цитопатогенні ефект. Відмінності в патологоанатомічної картині загиблих мишей дозволяють визначити підгрупу А чи В вірусу Коксакі. Вірус Коксакі А викликає воскоподібний некроз скелетної мускулатури. Вірус Коксакі В вражає центральну нервову систему, печінку, підшлункову залозу і бурий жир.
Специфічна профілактика і терапія цих інфекцій знаходиться в стадії розробки.
В. Вірус ящура
Ящур - гостре інфекційне захворювання, що вражає парнокопитних тварин (велика рогата худоба, кіз. Свиней) і іноді людини.
Вірус ящура міститься в ящурного бульбашках. Розміри частинок вірусу дуже малі, знаходяться в межах 10-20 ммк. Культивується вірус на середовищі, що містить живі тканини ембріона морської свинки. У антигенному відношенні розрізняють три типи вірусу: О, А і С.
Резистентність. Вірус ящуру стійкий до факторів зовнішнього середовища: в виділеннях тварин зберігається до 3 місяців, при температурі 37 ° залишається життєздатним кілька днів. Нагрівання при 55 ° швидко руйнує вірус. До гліцерину і висушування дуже стійкий.
Патогенез і клініка. Джерелом інфекції є хворі тварини і в рідкісних випадках - людина. Зараження людини відбувається головним чином в результаті вживання в їжу сирих молочних продуктів від хворих тварин, а також при догляді за ними.
Вхідними воротами інфекції є слизова оболонка і пошкоджена шкіра.
Інкубаційний період дорівнює 2-7 дням. Хвороба починається загальним нездужанням, головним болем, болями в крижах, ознобом, іноді блювотою. Температура незабаром досягає високих цифр. На слизовій оболонці рота і горла з`являються наповнені прозорим вмістом бульбашки, які лопаються і залишають після себе виразки. Підщелепні залози збільшуються, губи припухають, ясна покриваються білим нальотом, з`являється рясна слинотеча і неприємний запах з рота. Тривалість хвороби 15-18 днів.
Імунітет. Перенесене захворювання залишає після себе імунітет по відношенню до вірусу того типу, яким захворювання було викликано. У крові перехворілих виявляються антитіла, що нейтралізують вірус.
Лабораторна діагностика. Для діагностики вміст ящурного бульбашок вносять в скаріфіцірованную шкіру підошви морської свинки. Через 1-4 дня у тварини підвищується температура, і з`являється везикулярна висип на підошві зараженої лапки і на слизовій порожнини рота. Можна також поставити реакцію зв`язування комплементу з сироваткою хворого.
Лікування - симптоматичне. У важких випадках застосовують біоміцин та поливалентную імунну сироватку.
