Мікроскопія - мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень
Фазовоконтрастна мікроскопія
Фазово-констрастності мікроскоп значно підвищує контрастність об`єктів, проникних для світла, і в медицині використовується для вивчення нативних препаратів.
Пофарбовані препарати частково поглинають світло. Пучок світла, що проходить через такий препарат, втрачає в своїй інтенсивності, т. Е. Зменшується амплітуда світлової хвилі, і це легко вловлюється оком дослідника. Такі препарати контрастні навіть в звичайному мікроскопі і називаються «амплітудними». Препарати, що не поглинають світла, прозорі. Пучок світла, що проходить через такий препарат, не втрачає своєї інтенсивності. Амплітуда світлової хвилі залишається незмінною, а змінюється лише фаза коливання, що не реєструється людським оком. Такі об`єкти називаються фазовими. До них відносяться живі незабарвлені препарати. Щоб підвищити контрастність зображення, необхідно перетворити фазові зміни в амплітудні. Це досягається шляхом приміщення в об`єктиви фазової пластинки у формі кільця і застосуванням кільцевої діафрагми. Кожному об`єктиву відповідає своя кільцева діафрагма. Зображення цієї діафрагми збігається з кільцем фазового пластинки відповідного об`єктива. Метод фазових контрастів може бути позитивним і негативним. У першому випадку на світлому тлі поля спостерігається темне зображення об`єкта, а в другому - фон темний, а об`єкт світлий. Найкращі результати спостерігаються в разі позитивного фазового контрасту.
люмінесцентна мікроскопія
Люмінесценція, т. Е. Світіння речовини, виникає в результаті перетворення енергії, що поглинається речовиною, в видиме випромінювання. Різниця між мікроскопією в світлі і флюоресценцией полягає в тому, що в останньому випадку препарат розглядається в випромінюваному їм світлі. При цьому хімічний склад клітин і тканин впливає на якість люмінесценції і люмінесцентна мікроскопія в певній мірі є гістохімічним дослідженням. Існує первинна та вторинна флюоресценція. При первинній флюоресценції в самому об`єкті знаходяться речовини, здатні флюоресцировать. Вторинна флюоресценція- наведена - виникає при спеціальній обробці речовинами, здатними флюоресцировать. Ці речовини називаються флюорохромами (акридин помаранчевий, флюоресцеин, родамін і ін.).
Для люмінесцентної мікроскопії застосовуються ряд пристроїв і мікроскопів (МЛ-1, МУФ-2, ОІ-18 та ін.).
Основною частиною цих пристроїв є освітлювач, який має лампу ультрафіолетового світла, і система фільтрів до нього.
Мікроскопія мікроорганізмів в пофарбованому вигляді
Для вивчення мікроорганізмів в пофарбованому вигляді на предметному склі готують мазок, який потім висушують, фіксують і забарвлюють.
а і б - петля, приготована неправільно- в - правильно приготована петля.
Підготовка стекол. Для бактеріоскопічного дослідження необхідно вживати чисті, добре знежирені скла. Нові скла промивають водою, витирають, а потім обробляють сумішшю з рівних частин спирту і ефіру, опускаючи в цю суміш на 2-3 дня. Після цього скла витирають або залишок на них суміші спирту з ефіром спалюють на вогні. Старі скла, вже були у вжитку, опускають на 2 години на концентровану сірчану кислоту або хромовую суміш, потім добре промивають водою або кип`ятять у 2% розчині соди або в мильній воді, промивають водою і сумішшю спирту з ефіром.
Приготування пастерівської піпетки. Скляну трубку діаметром 5-6 мм вносять в полум`я пальника, нагрівають до розм`якшення скла і, вийнявши з полум`я, акуратно розтягують, повільно розводячи кінці трубки в різні боки.
Приготування платинової петлі. Беруть відрізок платинового дроту (10-12 см) і за допомогою пінцета на одному кінці роблять загин (як показано на рис. 13), потім вставляють в металевий Петледержателі.
Приготування мазка і фіксація препарату. На предметне скло, оброблене вищевказаним способом, наносяться мікроби. Необхідно розподілити їх по склу можливо більш тонким шаром, т. Е. Приготувати мазок. При приготуванні мазків з культур бактерій відповідний матеріал беруть платинової петлею (див. Рис. 33 на стор 81) або пастерівської піпеткою. При цьому необхідно кожен раз прожарювати петлю і прилеглу до неї частину ручки Петледержателі або скляної палички, на якій вона укріплена. Пастерівські піпетки стерилізують сухим жаром. Перш ніж торкатися культури, слід охолодити петлю. Рідкий матеріал рівномірно розподіляють платинової петлею по центру предметного скла.
Мал. 14. Прилад для промивання препаратів.
Мал. 15. Пінцети для стекол.
Для приготування мазка з культури мікробів на твердому середовищі (агар, картопля) попередньо наносять на предметне скло невелику крапельку води, платинової петлею вносять в цю краплю невелика кількість досліджуваної культури, розмішують і розподіляють тонким шаром по поверхні скла. Потім мазок сушать на повітрі і фіксують, чим досягається умертвіння мікробів і міцне прикріплення їх до скла. Фіксацію виробляють триразовим проведенням препарату через полум`я пальника (мазком догори). Проведення препарату над полум`ям пальника повинно бути помірною швидкості. Фіксація може бути проведена і іншими методами, наприклад дією метилового спирту, суміші етилового спирту з ефіром і ін. Фіксація різко покращує окрашиваемость мікробів, які в живому вигляді слабо сприймають фарби.
