Форми поширення інфекційних захворювань - мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень
Характер поширення інфекційних, або заразних захворювань може бути різним. Найбільш часто інфекційні хвороби зустрічаються у вигляді окремих розсіяних випадків, епідеміологічно не пов`язаних один з одним. Такі захворювання називаються спорадичними.
Якщо інфекційне захворювання приймає масовий характер і виникає за короткий проміжок часу, то говорять про епідемію. При епідемії інфекційних захворювань виникають з одного загального джерела або пов`язані загальними шляхами поширення. Пандемією називаються такі епідемії, які досягають великих розмірів, охоплюють одночасно кілька країн і навіть цілі континенти. Прикладом може служити пандемія грипу в 1918- 1919 рр., Від якої на всій земній кулі загинуло 20 млн. Чоловік. При ендемії заразні хвороби тривало зберігаються в будь-якій місцевості, яка характеризується певними санітарно-побутовими особливостями або природною осередкових.
ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНИЙ МЕТОД У МІКРОБІОЛОГІЇ
Нерідко при дослідженні того чи іншого матеріалу доводиться вдаватися до зараження піддослідних тварин. Зараження тварин є хорошим методом для виділення чистих культур патогенних мікробів, повільно або дуже бідно зростаючих на живильних середовищах, з матеріалу, сильно забрудненого бактеріями (наприклад, пневмококів і туберкульозних мікобактерій з мокротиння). Введення такого патологічного матеріалу призводить до того, що в організмі сприйнятливої тварини розмножуються насамперед патогенні мікроорганізми. Після загибелі тварини можна отримати чисту культуру збудника захворювання.
Експериментальний метод використовують з метою відтворення захворювання, збудник якого невідомий, для вивчення патогенних і імуногенних властивостей різних мікроорганізмів, а також з метою визначення ефективності дії на мікроби хіміотерапевтичних (антибіотики, сульфаніламіди) та інших препаратів.
До експериментальному зараженню тварин вдаються і в тих випадках, коли збудник хвороби, наприклад вірус, може бути виявлений відтворенням типового захворювання у тварин.
Зміст лабораторних тварин і спостереження за ними. Найбільш часто в якості подібних тварин служать кролики, морські свинки, білі щури, білі миші, рідше - голуби, кішки, собаки і ще рідше - мавпи. Для утримання і розведення лабораторних тварин існують розплідники. З розплідника здорові тварини надходять в лабораторію і на деякий час поміщаються в карантинне відділення, після чого містяться в спеціальному приміщенні - віварії, а влітку - у вольєрах. Лабораторних тварин утримують в клітинах (мишей в скляних банках), встановлених на спеціальних полицях - стелажах.
Для годівлі тварин використовують моркву, буряк, брукву і зернові суміші (овес, ячмінь, пшеницю та ін.) Влітку і восени рекомендується давати різні трави (подорожник, кульбаба, люцерна, шпинат, морквяна бадилля та ін.).
Щури і миші повинні додатково отримувати пастеризоване молоко, м`ясо-кісткове і кров`яне борошно (добові кормові норми для лабораторних тварин описані в спеціальних інструкціях).
У віварії на кожну тварину, включеного в досвід, заводиться облікова картка, де зазначаються всі показники: дата надходження, номер тварини, номер клітки, вага, температура, характер експериментальної процедури, кількість і місце введення матеріалу, дата забою або смерті.
Вага тварин при проведенні дослідів часто має велике значення, тому перед надходженням тварин з розплідника в віварій їх зважують. Досить часто у тварин, що знаходяться під досвідом, вимірюють температуру тіла спеціальними маленькими ртутними термометрами. При вимірюванні температури лабораторним тваринам ртутний резервуар термометра вводять в просвіт прямої кишки на певну глибину (морській свинці та кроликам на глибину 3,5 см). Тривалість вимірювання температури повинна бути постійною (5 хвилин), потім термометр виймають і реєструють температуру тварини, після чого термометр витирають і дезінфікують.
У деяких випадках тварин перед досвідом наркотизують (знеболюють). Наркоз може бути загальний або місцевий. Загальний наркоз у дрібних лабораторних тварин досягається за допомогою ефіру. Місцевогознеболювання досягають підшкірним введенням таких препаратів, як кокаїн або новокаїн. Дози наркотизирующихся речовин різні в залежності від виду тварин.
У процесі експериментальних досліджень в лабораторіях доводиться брати кров у піддослідних тварин. У кроликів і морських свинок кров беруть з серця або з крайової вени вуха. У мишей і щурів обрізають кінчик хвоста і витікає кров збирають в пробірку або насмоктують в пастерівську піпетку. Волосяний покрив у лабораторних тварин на місці взяття крові коротко вистригають або збривають, шкіру протирають спиртом, а потім ефіром. У кроликів і морських свинок при взятті крові з крайової вени вуха слід попередньо нанести кілька клацань по вушній раковині. Цим досягається прилив крові до вушної вени. Потім голкою шприца проколюють вену і набирають необхідну кількість крові.
Техніка зараження. Лабораторних тварин заражають нативним матеріалом або суспензією бактерій, приготовленої по оптичному стандарту. Зараження тварин проводиться або природним шляхом - через травний або дихальний тракт при згодовуванні або інгаляції розпорошеного матеріалу, або, частіше, штучно, шляхом ін`єкцій.
Існують наступні способи штучного зараження тварин:
Відео: Pulmonary dangerous simbioses AcineMRSA_ Легеневий інфекційний симбіоз YouTube 2014
- підшкірний - досліджуваний матеріал шприцом вводять безпосередньо під шкіру морським свинкам і кроликам в області стегна, мишам - в поперек біля кореня хвоста (рис. 49);
- внутрішньошкірний - досліджуваний матеріал вводять безпосередньо в шкіру (рис. 50);
- внутрішньом`язово - матеріал вводять в товщу м`яза;
- внутрішньочеревно - матеріал вводять в черевну порожнину;
- внутрішньовенний - матеріал вводять в кров`яне русло через ін`єкцію його в вену (рис. 51);
- субдуральний - матеріал вводиться під тверду мозкову оболонку.
Шлях зараження, як і вибір тварини, грає велику роль. Аеробні мікроорганізми діють на сприйнятливе тварина найслабше при зараженні через рот і під шкіру, значно ефективніше при введенні в черевну порожнину і при введенні прямо в кровоносну систему або під мозкові оболонки.
Відео: Мазок на флору
Мал. 49. Підшкірне зараження миші.
Мал. 50. Внутрішньошкірне зараження свинки.
Мал. 51. Внутрішньовенне зараження кролика.
Відео: Як здається бактеріологічний посів сечі?
Навпаки, внутрішньовенне введення анаеробів не завжди дає ефект, а той же матеріал, введений під шкіру або глибоко в м`язи, надає найбільш сильно виражену дію.
Місце введення в організм досліджуваного матеріалу необхідно обробити: вистригти шерсть, протерти шкіру спиртом і змастити йодом. При зараженні піддослідних тварин потрібно забезпечити відповідну їх фіксацію. Це досягається за допомогою спеціальних пристосувань - різного типу дощок, власників або ж тварина тримає помічник. Помічник бере кролика правою рукою за шкіру спини, піднімає і закладає його задні лапи собі під пахву лівої руки. У такому положенні кролик виявляється міцно зафіксованим. Можна фіксувати кролика і іншим способом: сидячи на стільці, взяти його задні лапи, підняти, а голову і передні лапи затиснути між ногами.
З морськими свинками надходять у такий спосіб. В одній руці затискають задні лапи, а в іншій - передні лапи і голову. Мишей для фіксації однією рукою беруть за хвіст, а інший захоплюють за шкіру в області верхньої частини шиї, піднімають і в такому положенні тримають в момент зараження. При роботі з дрібними тваринами (миші) можна обійтися без особливих пристосувань і без помічника.
Інструментарій, необхідний для ін`єкції (шприци, голки), стерилізують кип`ятінням, а матеріал, необхідний для зараження, поміщають в стерильний посуд.
При наборі в шприц заражающего матеріалу потрібно побоюватися його розбризкування. Для цього після того як матеріал в трохи більшому, ніж потрібно для зараження, кількості буде набрано в циліндр шприца, останній повертають вертикально вгору голкою і, надівши на кінчик голки вату, тиском на поршень обережно випускають в неї бульбашки повітря і надлишок рідини. Вату скидають пінцетом в дезінфікуючий розчин.
Найбільш простий і розповсюджений спосіб зараження- підшкірний. Найважче провести зараження в вену. Кроликів заражають в бічну вушну вену, морських свинок - в яремну вену, мишей і щурів - в хвостову вену.
Після зараження кроликів і морських свинок поміщають в клітини, а мишей - в скляні банки ізольовано від незаражених тварин. На клітини або банки наклеюють етикетки, на яких позначається дата зараження, характер експериментальної процедури, матеріал, яким вироблено зараження, прізвище експериментатора.
Знаходяться під досвідом тварини повинні регулярно отримувати достатню кількість їжі та води або молока і перебувати в сприятливих температурних умовах (не нижче 10-15 °). Спостереження за загальним станом здоров`я тварин проводиться щодня 1 раз або, краще, 2 рази на день.
Розтин і бактеріологічне дослідження трупів піддослідних тварин. Розтин тварин слід робити якнайшвидше після їх загибелі, в іншому випадку труп необхідно зберігати на льоду.
Перші години після загибелі тварини його тканини і органи містять тільки бактерії, якими воно було заражено.
Через деякий час до цих бактерій приєднуються сапрофіти - мікроби кишечника, які проникають через кишкову стінку.
Розтин повинно проводитися в окремій кімнаті, в крайньому випадку на окремому, спеціально для цього призначеному столі. Перед розкриттям трупи тварин для дезінфекції зовнішніх покривів і знищення комах занурюють у дезінфікуючий розчин (2% розчин лізолу). Після цього трупи тварин прикріплюють до дерев`яної дошки особливими штифтами або цвяхами. Труп фіксують обов`язково вгору животом. Зафіксований труп разом з дошкою поміщають в залізний або помістіть глибоке піднос. Потім дезінфікують поверхню шкіри тварини, для чого шерсть обмивають тампоном, рясно змоченим 5% розчином карболової кислоти або 2% розчином лізолу.
Інструменти (пінцети, ножиці, скальпелі) потрібно прокип`ятити в 3% розчині соди протягом 20 хвилин і дати їм охолонути. Потім приступають до розтину. Спочатку за допомогою скальпеля і пінцета шкіру тварини розрізають по середній лінії від шиї до лобка і отсепаровивают з одного чи з іншого боку так, щоб оголити всю передню поверхню трупа. При цьому звертають увагу на стан підшкірної клітковини і лімфатичних вузлів. Використані інструменти поміщають в стакан з дезинфікуючим розчином. Отсепарованно поверхню протирають тампоном, змоченим спиртом, і стерильними інструментами розкривають грудну порожнину. Розрізають діафрагму збоку спочатку з одного боку, вводять в розріз тупу браншу ножиць і перерізають ребра- це ж роблять з іншого боку. Потім захоплюють пінцетом нижній край грудини, обрізають ножицями діафрагму у краю ребер, піднімають реберний клапоть і відокремлюють середостіння, намагаючись не розрізати серцеву сорочку. Оглядають грудну порожнину і, якщо є ексудат, його засівають і роблять з нього мазки на предметних стеклах. Після цього розрізають серцеву сорочку, оглядають її порожнину, припікають залізним шпателем поверхню правого передсердя або шлуночка і через припеченими місце вколюють стерильну пастерівську піпетку. Витягнуту кров засівають на поживні середовища та роблять з неї мазки на предметних стеклах.
Потім стерильними інструментами виробляють розріз черевної стінки від нижнього краю грудини до лобка і роблять два розрізи поперек. Оглядають порожнину очеревини і, якщо є випіт, засівають його петлею або пастерівської піпеткою на поживні середовища. Вибір поживних середовищ залежить від виду мікроорганізму, який викликав загибель тварини. Обов`язковому дослідженню підлягають селезінка, печінка і мезентеріальні вузли. Спочатку витягують пінцетом селезінку, звертають увагу на її вигляд, частина її відрізають стерильними ножицями, забирають петлею матеріал з поверхні розрізу і роблять посів. Таким же чином роблять посів з печінки та інших органів. З ексудату черевної порожнини (якщо він є), печінки і селезінки роблять мазки для мікроскопічного дослідження. Для цього пінцетом захоплюють шматочок органу, прикладають його поверхнею до предметного скла і роблять ряд відбитків. Залишки трупа знищують спалюванням або автоклавуванням.
Визначення Dim мікроба. Смертельні дози культури збудника коливаються в залежності від методу ін`єкції і місця введення мікроорганізмів, але основне значення в цьому відношенні має ступінь сприйнятливості певного виду тварин, а також індивідуальна стійкість кожного з них.
Dim визначається наступним чином. У пробірку з агарної культурою досліджуваного мікроба наливають 5 мл стерильного фізіологічного розчину і обертають між долонями рук до тих пір, поки з поверхні агару НЕ змиється весь наліт росту мікробів. Частина цієї суспензії переносять піпеткою в іншу стерильну пробірку, товщина стінки і діаметр якої такі ж, як у пробірки з державним бактеріальним стандартом.
Бактеріальні стандарти готуються Державним контрольним інститутом медичних біологічних препаратів імені Л. А. Тарасевича в Москві і відповідають змісту 500 млн. І 1 млрд. Мікробних тіл в 1 мл суспензії.
Порівнюючи отриману мікробну суспензію (за ступенем каламутності) з бактеріальним стандартом, готують суспензію (розводячи її фізіологічним розчином), що містить в 1 мл 1 млрд. Мікробних тіл. Експериментальному тварині вводять 100, 200 млн. Мікробних тіл і т. Д., Для чого отриману суспензію розводять фізіологічним розчином з таким розрахунком, щоб кожна доза мікробів містилася в одному і тому ж обсязі (наприклад, в 0,5 мл). Та мінімальна доза суспензії мікробів, яка викличе загибель тварини, і буде Dim.
