Принципи культивування мікроорганізмів - мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень
Основні принципи культивування МИКРООРГАНИЗМОВ
- Посів на скошений агар штрихом. Правою рукою беруть петлю і пропалюють її на полум`ї пальника до червоного. Лівою рукою між великим і вказівним пальцями тримають пробірку з агаром майже в горизонтальному положенні, щоб під час посіву в неї не потрапляли мікроби з повітря. Легким обертальнимрухом звільняють ватяну пробку і мізинцем правої руки, притискаючи до долоні, виймають її з пробірки. Край пробірки злегка обпалюють. Петлею забирають небагато матеріалу, що містить мікробів, і зигзагоподібними рухами наносять на поверхню агару в пробірці. Після виробленого посіву петлю витягають з Пробірки, обпалюють її краю і закривають ватним корком. Потім знову пропалюють петлю в полум`я пальника, щоб знищити залишилися на ній мікробів.
- Пересів на скошений агар. Матеріал, що містить мікробів, також знаходиться в пробірках. Для того щоб зробити пересівши з однієї пробірки в іншу, обидві пробірки, т. Е. Ту, з якої виробляється посів, і ту, яка підлягає засіву, беруть разом і тримають між великим і вказівним і середнім пальцями лівої руки. Виймають спочатку пробки з пробірок по зазначеній вище методиці, набирають матеріал і переносять матеріал на поверхню стерильного агару, де і проводять посів, потім обпалюють краю пробірки і закривають (мал. 33).
- Посів на бульйон. Посів на бульйон або з бульйону на бульйон або агар роблять так само, як і посів на агар, але все маніпуляції слід проводити обережно, щоб бульйон НЕ вилився з пробірки або не змогти її країв. Матеріал, внесений в бульйон для посіву, розтирають на стінці пробірки ближче до рідини і збовтують в бульйоні. Пересівши з бульйону в бульйон можна робити також за допомогою стерильної пастерівської піпетки.
- Посів в молоко і інші поживні (рідкі) середовища проводиться так само, як і посів в бульйон.
- Посів уколом в стовпчик агару або желатину. Пробірку з агаром або желатином тримають дном догори. Матеріал, який підлягає посіву, беруть платинової голкою, яку прямовисно вколюють в поверхню агару або желатину і просувають по осі пробірки до самого дна. Голку потім витягують, обпалюють і закривають пробірку пробкою (рис. 34).
У зовнішньому середовищі і в організмі людини мікроби найчастіше зустрічаються в суміші з іншими мікробами. Для вивчення властивостей того чи іншого мікроба (без чого не може бути поставлений діагноз) його потрібно мати в чистій культурі, т. Е. Припадає відокремлювати його від інших мікробів, з якими він змішаний.
Мал. 33. Посів петлею.
Мал. 34. Посів уколом.
Мал. 35. Заливка чашки агаром.
Існують наступні методи виділення чистих культур бактерій:
а) посів на середу в чашку Гейденрейха - Петрі-
б) біологічні методи (застосування елективних середовищ, використання різних оптимальних температур, зараження лабораторних тварин). Найбільш часто користуються посівом досліджуваного матеріалу на середу в чашки Гейденрейха - Петрі.
- Техніка посіву на чашку Гейденрейха - Петрі з застиглим агаром. Агар в колбах, флаконах, пробірках розплавляють в киплячій водяній бані. Потім агар охолоджують до 50-60 ° і розливають в чашки Гейденрейха - Петрі. Чашки повинні бути стерильними. Їх встановлюють на горизонтальній поверхні, і з посудини, що містить розплавлений агар, виймають пробку, краю судини обпалюють, після чого середу виливають в чашку (рис. 35). Кришку чашки піднімають лівою рукою з одного боку, не відкриваючи чашки повністю. Злегка нахиляючи чашку в різні боки, розподіляють налитий в неї агар рівним шаром по всьому дну. Коли агар затвердіє, чашки ставлять в термостат догори дном для підсушування. Корисно також видалити стерильною ватою конденсаційну воду, яка збирається на кришці чашки. Посів на чашки з агаром виробляють штрихом за допомогою петлі або втиранням скляним шпателем. Для його виготовлення скляну паличку необхідної товщини (4 5 мм) вводять в полум`я пальника, нагрівають до розм`якшення, кінець обжимають попередньо нагрітими плоскозубцамі і надають форму трикутника (рис. 36). Практично зручніше користуватися металевими шпателями Дрігальского.
Посів петлею проводиться таким чином. Платинової петлею набирають невелику кількість матеріалу, легко проводять по поверхні агару, завдаючи ряд паралельних ліній. Тієї ж петлею, що не набираючи матеріалу, знову наносять штрихи на другий і третій чашці з агаром. На першій чашці може вийти суцільний ріст, тоді як на другий і третій спостерігається зростання одиничних, ізольованих колоній. Кожна колонія являє відокремлений скупчення однорідних мікробів. Можна також користуватися однією чашкою, розділивши її на кілька секторів, завдавши лінії поділу по склу дна чашки.
Мал. 36. Шпатель Дрігальского.
Кожен окремий сектор буде замінювати одну чашку. При подальшому пересеве з колоній на косою агар або іншу живильне середовище отримують чисту культуру.
При посіві шпателем на поверхню агару наносять петлею одну краплю досліджуваного матеріалу. Потім, відкривши чашку, прожареним і охолодженим скляним шпателем розтирають краплю по всій поверхні, виробляючи легкі погладжують руху по всій поверхні агару (рис. 37). Чи не обпалюючи шпателя, їм же засівають другу і третю чашки з агаром.
Мал. 37. Посів шпателем.
Біологічні методи виділення чистих культур. Виділення чистих культур на основі різних біологічних властивостей бактерій широко проводиться на спеціальних поживних середовищах. Наприклад, спеціальні середовища знайшли широке застосування при виділенні збудників кишкових інфекцій. Додавання до живильного середовища малахітового або брильянтового зеленого, солей жовчних кислот, значних концентрацій кухонної солі або лимоннокислих солей пригнічує ріст кишкової палички і не впливає на розмноження патогенних бактерій кішечнотіфозной групи. Для виділення з мокротиння і слизу культури кашлюку палички до живильному середовищі додають антибіотик пеніцилін, який пригнічує ріст супутньої мікрофлори і в той же час не затримує зростання і розмноження збудника коклюшу. Для виділення холерного вібріона використовують елективну середу - пептони воду, а для виділення дифтерійної палички - згорнуту кінську сироватку.
Відео: Popular Videos - Microbiology & Chemistry
Для полегшення виділення чистих культур деяких бактерій можна скористатися і тим, що вони ростуть при різних температурних оптимумах. Як приклад можна привести метод виділення чистої культури кишкової палички з води шляхом вирощування посівів в термостаті при температурі 43 °, виділення збудника чуми із забрудненого матеріалу шляхом вирощування при 20 ° і навіть при 5 °.
Нарешті, слід вказати, що зростання деяких патогенних бактерій (пневмокок, бацили сибірки, бактерії туляремії та ін.) Можна отримати в чистій культурі, заражаючи лабораторних тварин, чутливих до того чи іншого вірусу. Наприклад, для виділення культури пневмокока з мокротиння хворої людини виробляється зараження білої миші.
термостат
Мал. 38. Термостати.
Засіяну середу поміщають в термостат, де температура найбільш сприятлива для вирощування мікробів. Для патогенних мікробів ця температура повинна відповідати температурі людського тіла, т. Е. 37 °. Електричні термостати з автоматичним регулюванням температури бувають різних розмірів-від величини невеликого ящика до величини кімнати. Термостат для звичайної бактеріологічної роботи є шафа з подвійними стінками з металу або дерева, обшитий зовні поганими провідниками тепла, наприклад, пробкою, азбестом і т. П. (Рис. 38). Термостат має подвійну дверку, зовнішню, обшиту ізолюючим шаром, і внутрішню у вигляді рамки зі склом. Усередині термостата влаштовані знімні полки з металевої сітки.
