Дослідження мікрофлори повітря - мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень

Відео: Сучасна фізико-хімічна лабораторія на варті здоров`я населення

Кількісний і особливо якісний склад мікрофлори повітря є санітарним показником ступеня забруднення повітряного середовища.
Для оцінки ступеня чистоти повітря А. І. Шафір запропонував наступні критерії. У житлових вентильованих приміщеннях в літній час повітря може вважатися чистим за умови, якщо загальна кількість мікроорганізмів в 1 м3 повітря буде менше 1500, а зеленящего і гемолітичного стрептококу менше 16, а забрудненим, якщо містить вищий за 2500 мікроорганізмів і більше 36 стрептококів. Взимку, природно, кількість мікроорганізмів в приміщеннях значно збільшується. За даними. А. І. Шафіра, для чистого повітря загальна кількість мікробів буде менше 4500, а стрептококів менше 36 в 1 м3, для забрудненого - загальна кількість мікробів більше 7000, а стрептококів більше 124.
Для визначення ступеня чистоти повітря застосовуються такі мікробіологічні методи дослідження.

1. Метод, заснований на принципі ударної дії повітряного струменя.
2. Новий метод.

Відео: Аналіз води

При будь-якому мікробіологічному методі дослідження повітря враховується як загальна кількість мікроорганізмів в певному обсязі повітря, так і їх якісний склад. Окремо враховується аеробне і анаеробна мікрофлора.
Для виявлення аеробних сапрофітів в повітрі посів проводиться на м`ясо-пептони агар, а при дослідженні на наявність стрепто- і стафілококів повітря засівають на спеціальні середовища (цукровий агар, кров`яний агар). Для виділення і підрахунку стафило- і стрептококів застосовують також м`ясо-пептони агар з додаванням 3% дефибринированной баранячої крові, 0,25% глюкози і генціанвіолета 1: 50 000-1: 500 000.
Для дослідження на наявність анаеробних бактерій повітря засівають на железосульфітную середу (середа Вільсон-Блера). Цієї середи готують наступним чином. До 100 мл розплавленого, а потім остудженого до 80 ° лужного м`ясо-пептонного агару додають 1% стерильної глюкози, 10 мл 20% сірчанокислого натрію і 1 мл 8% розчину хлорного заліза. Розчин хлорного заліза готується на стерильної дистильованої воді. Розчин сірчанокислого натрію стерилізується 1 годину текучим паром.
Метод дослідження повітря за принципом ударної струменя. Запропоновано ряд апаратів для дослідження повітря методом ударної струменя. Апарат, сконструйований радянським вченим Ю. А. Кротовим, має перевагу перед іншими (рис. 124, 125).
Апарат Кротова змонтований в одному ящику і складається з трьох частин: 1) вузла для відбору проб повітря-2) мікроманометра- 3) живить механізму, розміщеного в дерев`яному футлярі (електричної частини).

Прилад можна підключити як на 127 V, так і на 220 V, і за допомогою спеціального перемикача і реостата регулювати швидкість проходить через прилад струменя повітря. За допомогою апарату Кротова протягом 1 хвилини можна пропустити від 25 до 50 л повітря. Механізм дії апарату Кротова полягає в наступному. Досліджуваний повітря за допомогою відцентрового вентилятора, що обертається зі швидкістю 4000- 5000 оборотів в хвилину, енергійно, засмоктується через щілину кришки приладу і вдаряється об поверхню відкритої чашки Гейденрейха, залитої живильним агаром і встановленої на диску малої крильчатки. Вміщені в повітрі мікроорганізми осідають на живильному агарі чашки Гейденрейха.

Мал. 124. Прилад Кротова для мікробіологічного дослідження повітря (загальний вигляд).

Рис: 125. Прилад Кротова для мікробіологічного дослідження повітря (схема).
1 - циліндричний корпус-2 - підстава корпусу-3 - електромотор- 4 - відцентровий Вентилятор 5 - восьмілопастная крильчатка- 6 - диск-7 - пружини-8 - чашка Гейденрейха- 9 - кришкі- 10 - накидні замки- 11 - диск з плексігласа- 12 - клиноподібна щель- 13 - розрізне кільце- 14 - штуцер з діафрагмой- 15 - похідна трубка.

Для рівномірного розподілу мікроорганізмів по всій поверхні чашки столик з чашкою повинен обертатися не надто швидко (60 оборотів в хвилину). З приладу повітря виводиться через повітропровідної трубку, яка з`єднана з мікроманометром, що показує швидкість пропускання повітря через прилад. Експозиція чашки 10 хвилин, після чого мотор зупиняють. Знімають кришку приладу. Дістають чашку з посівом повітря і закривають її кришкою. Далі надходять так. При визначенні аеробного флори чашку Гейденрейха з посівом ставлять на 24 години в термостат при температурі 37 °, а потім залишають на 24 години при кімнатній температурі і проводять підрахунок всіх колоній, що виросли на поверхні агару. Потім чашку залишають ще на 24 години при кімнатній температурі, після чого (через 72 години з моменту посіву) проводять диференційований підрахунок, т. Е. Враховують окремо пігментні форми, спороносні форми і цвілеві гриби.
Для визначення кількості анаеробних мікроорганізмів чашку з посівом, вийняту з приладу Кротова, для створення анаеробних умов зростання мікробів додатково заливають 10-15 мл м`ясо-пептонного агару і ставлять в термостат при температурі 37 ° на 24 години.
На сульфитном агарі, яким залита чашка до посіву, анаеробні мікроби дадуть зростання в вигляді почорнілих колоній, по яких можна судити про ступінь забруднення повітря анаеробними бактеріями.
Бактеріальне забруднення повітря виражається загальним числом мікробів в 1 м3 його.
Приклад. Через апарат Кротова пропущено за 10 хвилин 125 л повітря, на поверхні середовища виросло 100 колоній.
Число мікробів в 1 м3 повітря
Новий метод дослідження повітря (чашковий метод). Новий метод є найбільш простим методом для вивчення мікрофлори повітря, хоча не володіє великою точністю.
Якщо застосовувати чашки одного діаметра при одному терміні експозиції, то цей метод може бути використаний для отримання порівняльних даних за бактеріального забруднення повітря. Техніка цього методу полягає в наступному. Чашки Гейденрейха-Петрі з застиглим агаром виставляють у відкритому вигляді на різних висотах в приміщенні на різні терміни (від 15 хвилин
до 1.5 годин). Потім чашки закривають і ставлять в термостат. Інкубацію посівів проводять за методикою, описаної вище.
Для перерахунку кількості мікробів на 1 м3 користуються формулою В. Л. Омелянського, який вважав, що протягом 10-хвилинної експозиції на поверхню щільного поживного середовища 100 см2 осідає стільки мікробів, скільки їх знаходиться в 10 л повітря. Їм була складена відповідна таблиця розрахунку, користуючись якою можна вирахувати загальна кількість мікроорганізмів в 1 м3 повітря. У цій таблиці дані постійні множники, на які треба помножити отримані кількості колоній в залежності від діаметра і площі чашки, де проводиться посів. Наводимо схему постійних множників для розрахунку кількості мікробів по Омелянського (табл. 34).
Таблиця 34
Розрахунок числа мікробів в 1 м3 повітря (по Омелянського)

Приклад. На чашці площею 63 см2 виросло 25 колоній. Кількість мікробів в 1 м3 повітря в даному випадку дорівнює 25X80 = 2000.

Відео: CM-6MT настільна центрифуга