Санітарно-бактеріологічне дослідження продуктів на наявність стафілокока - мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень
ДОСЛІДЖЕННЯ НА НАЯВНІСТЬ стафілокок
Стафілококи найчастіше зустрічають сприятливу для розмноження середовище в харчових продуктах з великим вмістом білка і крохмалю (молоко, кремові вироби, морозиво, сир, паштети, відварна риба, м`ясо, пюре картопляне, консерви рибні під маслом).
Методика дослідження. Продукти рідкої консистенції засівають на тверді поживні середовища (1-2 краплі) і в середовища накопичення (сольові) 0,5-1 мл. Продукти густої консистенції розводять стерильною водопровідною водою, тверді - роздрібнюють і розтирають з водою в ступці. З приготовленої емульсії, або бовтанки готують мазки, фарбують за Грамом і мікроскопують, відзначаючи наявність стафілококів (поодинокі, мало, багато). Одночасно роблять посіви в накопичувальні середовища з вмістом 6,5 і 10% хлористого натрію і на чашку з желточно-сольовим агаром (середа Чистовича).
Середовище накопичення 1
М`ясо-пептони бульйон 1 л
Хлорид натрію 65 г
Агар-агар 1 »
Лактоза 15 »
Середовище накопичення 2
М`ясо-пептони бульйон 1 л
Хлорид натрію 100 г
Агар-агар 1 »
Лактоза 15 »
pH 7,4. Стерилізують при 120 ° 30 хвилин.
Середа Чистовича - желточно-сольовий агар. М`ясо-пептони агар з 10% хлористого натрію, простерилізованого при 120 ° 30 хвилин, розтопити, остудити до 45-48 °, додати 20% за обсягом желточной суспензії (один яєчний жовток на 150 мл фізіологічного розчину), добре перемішати, розлити по чашках . Середу можна готувати про запас і зберігати в холодильнику.
Посіви ставлять в термостат при 37 ° на 48 годин. В позитивних випадках на чашках з желточно-сольовим агаром патогенні стафілококи виростають з утворенням пігменту (штами, що утворюють пігмент будь-яких відтінків оранжевого і кремового кольору слід вважати золотистими) і з зоною помутніння навколо колонії (при наявності лецитинази, руйнує лецитин живильного середовища). Такі колонії пересівають: 1) на чашки з кров`яним агаром для вивчення гемолізуючих властивостей-2) на скошений агар для постановки через 16-24 години реакції плазмокоагуляціі- 3) в цукровий бульйон (на 6 годин на термостат при 37 °) для вивчення морфології ( дрібні коки, розташування гроздевідное).
Якщо через 24 години па чашках з кров`яним агаром не з`явилося гемоліз, слід залишити їх ще на 24 години при кімнатній температурі. При відсутності гемолізу роблять повторний пересівши на кров`яний агар, чашку з посівом поміщають в ексикатор з вмістом 20% С02 і ставлять в термостат при 37 °. Через 24 години росту в атмосфері С02 втрачені гемолізуючих властивості відновлюються. Для освіти СО2 на дно ексикатора 1-2-літрового обсягу поміщають чашку з двууглекислой содою (1-2 г) і через залишений отвір тонкої піпеткою наливають 16-18 мл 10% соляної кислоти.
З скошеного агару беруть петлю культури стафілокока і вносять в пробірку з розведеною 1: 4 плазмою кролячій або людської цитратной крові. Ставлять в термостат при 37 ° і протягом 1 -10 годин спостерігають щогодини поява плазмокоагуляции. У тих випадках, коли на чашках з желточно-сольовим агаром (ЖСА) немає зростання підозрілих колоній стафілокока, роблять пересів з середовищ накопичення на чашку з желточно-сольовим агаром і продовжують аналіз за вищеописаною методикою.
При обстеженні продуктів в плановому порядку можна обмежитися визначенням основних властивостей стафілокока за наведеною схемою. У випадках же харчових отруєнь проводиться більш детальне вивчення виділених штамів стафілокока, т. Е. Визначають наявність ентеротоксину і ступінь гемолітичної активності.
Біологічна проба описана в розділі «Приватна мікробіологія» (стор. 202), але можна поступити і в такий спосіб. Виділений штам стафілокока засівають на чашки з 0,75% агаром на телячу бульйоні або на бульйоні Хоттингера з 0,25% глюкози (pH 7,0). Чашки поміщають в ексикатор з 20% С02 і ставлять в термостат при 37 ° на 2 доби догори дном. Через 48 годин виймають і на поверхню агару наливають 10 мл фізіологічного розчину. Агар розчавлюють шпателем до кашкоподібної консистенції і залишають при кімнатній температурі на 2 години. Після цього екстракт переносять в пробірки і центрифугують до отримання прозорого шару, який відсмоктують. Прогрівають в киплячій водяній бані протягом 30 хвилин і вводять кішкам в вену вуха або стегнову вену в кількості 0,5 мл на 1 кг ваги. Поява блювоти і проносу або тільки блювоти, що настала в період від 30 хвилин до 3 годин, вказує на присутність ентеротоксину. Або беруть 1 2-2-місячних кошенят і вводять натще піпеткою в рот 15-20 мл Негрет токсину, змішаного з молоком чи кремом. Через 30-60 хвилин настає блювота, іноді пронос і загальна прострація. Спостереження ведеться 4-5 годин. Можна ввести токсин білим мишам через зонд в стравохід.
Для остаточного підтвердження ролі виділеного стафілокока в етіології даної харчової інтоксикації необхідно поставити реакцію аглютинації з сироваткою крові хворого. В якості антигену беруть виділений штам стафілокока. Реакція ставиться за типом реакції Відаля, починаючи з розведення 1: 50 до 1: 800. В якості контролю бажано поставити реакцію аглютинації з заздалегідь відомим токсичним штамом.
Останнім часом виробляють фаготіпірованіе патогенних стафілококів, що дозволяє встановити тотожність культур, виділених з різних об`єктів і від різних осіб, що має велике значення для санітарної служби.
