Санітарно-бактеріологічне дослідження м`яса - мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень

Відео: мікробіологія

М`ЯСО І М`ЯСНІ ПРОДУКТИ
М`ясо та м`ясні продукти піддають бактеріологічному дослідженню у всіх випадках, коли передбачається обсіменіння їх збудниками інфекцій, патогенними для людини, або ж мікрофлорою, що викликає псування продуктів. Готова продукція також досліджується в порядку санітарно-бактеріологічного контролю.
взяття проб. М`ясо. Проби беруть стерильним ножем з різних частин туші. Кожну пробу м`яса або органів в кількості 200 г загортають в чисту пергаментний папір, на якій ставлять номер. Кілька проб, узятих від однієї туші, упаковують в паперовий пакет, пломбують і направляють в лабораторію. У супровідному документі позначають дату і місце взяття проб від тварини, номер туші, причину і мету дослідження. Всі ці відомості засвідчуються підписом відправника.
Ковбасні вироби. Ковбасні вироби піддаються бактеріологічному дослідженню у випадках виявлення фактів використання у виробництві підозрілого щодо доброякісності м`ясної сировини, порушення санітарно-гігієнічного режиму виробничих процесів, отримання сумнівних даних при органолептичної оцінки продукту. Відібрані зразки загортають у пергаментний папір чи ковдру (кожен з них нумерується окремо), упаковують в один пакет, опломбовують і направляють в лабораторію, приклавши акт про вилучення зразків, в якому вказується місце і дата відбору і виготовлення проби, назву продукту, його сорт , причина і мета дослідження.
Методика дослідження м`ясних продуктів. Перший день. Доставлені в лабораторію зразки м`яса і м`ясних продуктів реєструють в журналі, на зразках проставляють відповідні реєстраційні номери, розкладають по порядку і приступають до дослідження. Перш за все роблять мазок-відбиток на предметному склі і фарбують по Граму для отримання орієнтовних даних про ступінь обсіменіння і характер мікрофлори. Стерильним ножем роблять розріз шматка м`яса і прикладають до нього предметне скло, знежирене в суміші Нікіфорова. Отриманий відбиток просушують на повітрі, фіксують спиртом або сумішшю Нікіфорова і фарбують за Грамом. Дивляться під мікроскопом 5-10 полів зору, підраховують коки і палички і виводять середнє арифметичне.
Для дослідження можна застосувати метод Фельдман і ЛІШАНСЬКИЙ, який полягає в наступному. Шматок м`яса або ковбаси обливають спиртом і обпалюють. Стерильним ножем роблять розріз шматка через всю товщу. З середини і з місць, розташованих ближче до поверхні до 0,5 см, беруть навішення 10-20 г, яку подрібнюють стерильними ножицями. Ретельно розтирають в ступці з рівною кількістю фізіологічного розчину, ставлять ступку в похилому положенні на 5-10 хвилин, кашку щільно віджимають в одну сторону, а рідина в кількості 0,1 і 0,05 мл набирають мікропіпеткою і розподіляють на двох ретельно знежирених предметних стеклах , па поверхні яких олівцем по склу обводять квадрат 2X2 см, для чого під скло підкладають накреслений на папері квадрат відповідних розмірів. Препарат висушують в термостаті, фіксують спиртом і фарбують подвійний фарбою (15 крапель карболового фуксину, 8 крапель насиченого спиртового розчину метиленової сині на 20 мл дистильованої води).
Мазки фарбують протягом 20-30 секунд, обережно змивають водою, висушують і мікроскопують. При цьому чітко видно сині бактерії на рожевому тлі, ясно диференційовані від обривків тканини. Підраховують кількість мікроорганізмів в 10-20 полях зору по краях і в середині препарату і виводять середнє арифметичне (кількість мікробів в одному полі зору).
Для бактеріологічного дослідження беруть цю ж рідину і виробляють посіви на тверді кольорові середовища шпателем.
Найкраще брати 2-3 чашки з різними кольоровими середовищами (Ендо, Левіна та бактоагар Ж), одночасно засіваючи в середу збагачення (середа Мюллера, Кауфмана, Киллиана, в крайньому випадку простий бульйон). У флакон із середовищем в 40-100 мл засівають 8-10 г досліджуваного матеріалу. Проводять також посів по Шукевичу на присутність Bact. proteus vulgaris. Для цього з приготовленою емульсії пастерівської піпеткою набирають 1-2 краплі досліджуваного матеріалу і, не торкаючись до поверхні скошеного агару, засівають в конденсаційну воду (перед посівом поверхню скошеного агару зволожують конденсаційної водою, привівши пробірку в горизонтальне положення). Всі ці посіви ставлять в термостат при 37 ° на 18-24 години.
Другий день. Чашки переглядають з лупою і, якщо виявляють підозрілі колонії з групи сальмонел, беруть не менше 5 колоній (колонії неболяче, круглі, прозорі, безбарвні на середовищі Ендо, Левіна, бактоагар Ж). Кожну підозрілу колонію пересівають в конденсаційну воду скошеного агару і ставлять в термостат на 2-3 години. В кінці робочого дня або через 3 години з конденсаційної води роблять розсівання по поверхні скошеного агару і на строкатий ряд: в середовища з лактозою, сахарозою, глюкозою, манітом, мальтозою, в бульйон Хоттингера, в напіврідкий агар. Пробірки поміщають в термостат на 12-15 годин при 37 °. З залишком колонії роблять агглютинацию на склі з аглютинативна адсорбованими сальмонельозне груповими і монорецепторними сироватками. Для контролю беруть краплю фізіологічного розчину, в яку вносять залишок колонії. У разі позитивної реакції через 0,5-1 хвилину настає аглютинація, утворюються пластівці і рідина прояснюється. Особливо добре це видно при легкому погойдуванні скла-контроль залишається рівномірно каламутним. Після цього контрольну краплю висушують, фіксують на вогні і фарбують по Граму для того, щоб переконатися в наявності грамнегативних паличок. Все це дає можливість орієнтовно запідозрити присутність сальмонел.
У пробірці з посівом по Шукевичу присутність Bact. proteus характеризується суцільним ніжним вуалеподібного зростанням по поверхні агару, що складається з грамнегативних паличок.
Третій день. Посіви переглядають і враховують таким чином: 1) мазок за Грамом переконує в чистоті культури-2) за біохімічними властивостями (пробу на індол не виробляють, так як він може не утворитися за цей час і пробірку з посівом залишають ще на добу).
Якщо результати строкатого ряду і аглютинації збігаються, то роблять остаточний висновок про зараження м`яса (м`ясного продукту або ковбаси) сальмонелами.
При позитивній реакції аглютинації з декількома сироватками (групова аглютинація) точне визначення типу мікроба може бути досягнуто додатковими дослідженнями (посів на чашку з простим агаром для валообразованія, посів і середовища Гіссен з арабінозою, ксилозой і дульцітом, на середу Біттера з рамнозою, на середу Штерна ) і обов`язкової реакцією аглютинації з монорецепторними сироватками.
Дослідження ковбасних виробів проводиться так само, як і м`яса, але з додатковим дослідженням на кількість колоній. Батон ковбаси обпалюють тампоном зі спиртом, після чого з периферійної частини і з центру стерильно вирізують невеликі шматочки, поміщають в стерильний бюкс або на шматочок стерильної паперу і зважують (1-2 г). Потім кожну пробу окремо переносять в стерильну ступку і розтирають із стерильним піском, додаючи 10-20 мл фізіологічного розчину, щоб вийшло розведення 1: 10. Дають відстоятися і з верхнього шару рідини беруть 0,2 мл, виливають в стерильну чашку Гейденрейха-Петрі і заливають розплавленим і охолодженим до 45 ° агаром (для визначення загальної кількості колоній в 1 г ковбаси).
Чашки ставлять в термостат при 37 ° на 48 годин, після чого підраховують загальну кількість колоній, для цього підрахована кількість колоній множать на 5 і на ступінь розведення матеріалу. 0,1 мл цієї ж рідини наносять на поверхню середовища Ендо або Левіна (для виявлення Е. coli і сальмонел).
Чашки ставлять в термостат при 37 ° на 24 години, після чого вивчають колонії, підозрілі на ріст бактерій групи кишкової палички і сальмонел.
Присутність протея визначається за методом Шукевича. Проводять посів 0,1 мл суспензії або невеликого шматочка продукту в конденсаційну воду скошеного м`ясо-пептонного агару. Посів поміщають в термостат при 37 ° на 18-24 години.
Присутність анаеробів визначається шляхом посіву 1-3 мл суспензії в печінковий бульйон, заздалегідь прокип`ячену і швидко охолоджений до кімнатної температури. Після посіву одну з пробірок знову прогрівають при температурі 80 ° протягом 20 хвилин. Посіви поміщають в термостат при 37 ° на 5 діб.
При підозрі на наявність анаеробних бактерій (помутніння, газоутворення) проводять висів в розплавлений і охолоджений до 50 ° м`ясо-пептони агар (з 2% глюкози), налитий на 2/3 висоти пробірки. Зростання колоній в глибині цього середовища і газоутворення говорить про наявність анаеробної мікрофлори.

ДОСЛІДЖЕННЯ НА НАЯВНІСТЬ ВАС. ANTHRACIS

Відео: Про виявлення бактерій групи кишкової палички

Взяття матеріалу проводиться лікарем-бактериологом негайно після повідомлення. При дотриманні всіх запобіжних заходів матеріал доставляють у лабораторію. Для дослідження беруть набряклі частини туш, лімфатичні вузли, паренхіматозні органи і трубчасту кістку. Від полеглих і нерозітнутих тварин беруть вухо, місце розрізу припікають. У лабораторії з усіх підозрілих проб роблять 5-10 мазків, підсушують, фіксують і забарвлюють по Граму, фуксином, синню, за Романовським.
Для бактеріологічного дослідження проводять посів з підозрілого матеріалу на м`ясо-пептони бульйон і м`ясо-пептони агар. Посіви вирощують при 37 °. Якщо матеріал сильно забруднений, то роблять посів у дві пробірки з бульйоном і одну з них прогрівають на водяній бані при 80 ° протягом 20 хвилин.

ДОСЛІДЖЕННЯ НА НАЯВНІСТЬ CL. BOTULINUM

Відео: Про виявлення перевищення «соматичних клітин» в молоці

Стерильно взяті шматочки м`ясопродуктів (м`яза, печінку, мозок) засівають у дві пробірки з середовищем Кітт-Тароцці, попередньо прогріті на водяній бані 15-20 хвилин для видалення повітря і швидко охолоджені в воді. Одну із засіяних пробірок прогрівають при 80 ° протягом 20 хвилин. Вирощують до 5 діб при 37 °. Присутність грампозитивних ракеткообразних паличок в разі пророста середовища дає право проводити подальше дослідження і ставити біологічну пробу (див. Частину III, стор. 351).
Рибу і рибні вироби досліджують так само, як і м`ясо.
При виникненні токсикоінфекції досліджують всі продукти, що знаходилися в користуванні протягом останніх 2 діб (сніданки, обіди, вечері). М`ясні, рибні продукти досліджують по вищеописаному методу. Перші страви (борщ, розсольник, суп і ін.) Перед посівом перевіряють на реакцію (лакмусовим папірцем). Якщо реакція кисла, їх подщелачивают 10% розчином соди до нейтральної або слабо лужної реакції і виробляють посіви за вказаною схемою.