Санітарно-бактеріологічне дослідження води - мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень
Санітарно-БАКТЕРІОЛОГІЧНА ДОСЛІДЖЕННЯ ВОДИ, НАПОЇВ, МОЛОКА ТА ІНШИХ ХАРЧОВИХ ПРОДУКТІВ
Виживання патогенних мікроорганізмів в різних об`єктах зовнішнього середовища (повітря, вода, почва- харчові продукти і т. Д.) Може сприяти в певних випадках при недотриманні необхідних санітарно-гігієнічних заходів зараження людей збудниками інфекційних захворювань (черевний тиф, дизентерія, холера, харчові отруєння та ін.).
Для попередження можливості зараження патогенними мікроорганізмами різних об`єктів зовнішнього середовища Радянським урядом було видано низку законів, в яких передбачено необхідні санітарні заходи з утримання джерел водопостачання, грунту, повітря і харчових продуктів.
У нашій країні щорічно збільшується мережа санітарних станцій і хіміко-бактеріологічних лабораторій, які покликані здійснювати контроль за якістю води, харчових продуктів, за санітарним станом повітря, грунту і т. Д.
Лабораторія здійснює повсякденний хіміко-бактеріологічний контроль за всіма джерелами водопостачання (водопровід, колодязі, річки) і харчовими продуктами. Систематично проводить контроль за обсемененностью повітря патогенними мікроорганізмами.
ВОДА
Питна вода повинна відповідати наступним бактеріологічним показникам: 1) містити в 1 мл не більше 100 мікробів 2) в 300 мл води повинна бути відсутнім кишкова палочка- 3) не повинно бути виявлено патогенних мікробів.
Взяття проби. Для виробництва аналізу води бактеріологічна лабораторія повинна мати запас стерильного посуду (пляшки ємністю 500, 250 і 100 мл). Пляшки ретельно миють, закривають ватними, обгорнутими в марлю пробками, накривають паперовими
ковпачками і зав`язують шпагатом, після чого стерилізують в автоклаві при 120 ° протягом 30 хвилин. Другу пробку, загорнуту в пакет, стерилізують прив`язаною до пляшки. Для взяття проб хлорованої води в пляшки перед стерилізацією вносять 2 мл 1,5% розчину гіпосульфіту (серноватистокислого натрію). Водопровідну воду беруть для дослідження в кількості 500 мл. Кран водопроводу обпалюють полум`ям паяльної лампи або ватним тампоном, змоченим спиртом, після чого відкривають і протягом 10-15 хвилин спускають воду. Це необхідно зробити тому, що вода в трубі може застоятися, і тоді результати дослідження будуть неточні. Пляшку розв`язують, виймають пробку разом з паперовим ковпачком і тримають в руці так, щоб не забруднити. Наповнюють пляшку водою з таким розрахунком, щоб не замочити пробку. Закривають над вогнем, зав`язують і роблять напис: звідки взята проба, адреса, дата і година взяття, мета дослідження та прізвище особи, яка взяла пробу, або ж ставлять номер, а в супровідному документі проти номера дають опис. Пляшка з досліджуваної водою повинна бути якомога швидше доставлена в лабораторію (з моменту взяття до моменту доставки проби в лабораторію повинно пройти не більше 2-3 годин). Влітку пляшки з водою рекомендується обкласти гумовими мішками з льодом, а взимку - грілками з теплою водою. Доставлену в лабораторію воду реєструють в журналі під порядковим номером і відразу ж роблять посів. При заборі води для дослідження з колодязів, відкритих водойм, басейнів і т. Д. Воду беруть з певної глибини. Для цього користуються батометрами - приладами, що представляють собою металевий каркас, усередині якого встановлена стерильна склянка з пробкою, до якої прив`язана мотузка. Батометр опускають у воду, на потрібній глибині потягіваніем за мотузку відкривають пробку, а по заповненні склянки мотузку опускають і пробка автоматично зачиняються. Під час вилучення судини з каркаса металеву пробку замінюють ватяною.
Повсякденно воду досліджують: а) на загальну кількість бактерій (мікробне число) і б) на фекальне забруднення (колі-титр). Дослідження на патогенну групу (збудників черевного тифу, холери та дизентерії) проводиться за епідемічними показаннями.
ДОСЛІДЖЕННЯ ВОДИ НА ЗАГАЛЬНУ кількість бактерій
Техніка визначення кількості мікробів у воді наступна. Стерильною піпеткою набирають 1 мл досліджуваної води і вносять у чашку Гейденрейха-Петрі. Заливають розплавленим і охолодженим до 45 ° м`ясо-пептони агаром, добре перемішують, дають застигнути агару і ставлять в термостат при 37 ° догори дном на 24 години. Воду з багатшою мікрофлорою попередньо розводять стерильною водою в 10, 100 разів і т. Д.
Мал. 120. Камера Вольфюгеля для рахунку колоній.
Мал. 121. Камера Лафара для рахунку колоній.
Рахунок колоній. Підрахунок колоній, що виросли виробляють за допомогою лупи через 24 години перебування в термостаті. У разі рясного росту - понад 50 колоній - рахунок проводиться в камері Вольфюгеля або Лафара. Чашку з посівом поміщають під скло камери Вольфюгеля (рис. 120) і підраховують число колоній в декількох квадратах, наприклад в десяти (якщо колоній трохи і вони великі, вважають у великих квадратах- якщо колоній багато і вони ростуть густо, вважають в малих квадратах) . Загальний підрахунок колоній проводиться таким чином: перелічене в 10 квадратах число колоній ділять на число квадратів, т. Е. На 10, і здобувають середню кількість колоній на один квадрат. Наприклад, якщо загальна кількість колоній для 10 квадратів було 100, то середнє число колоній на один квадрат складе 100: 10, т. Е. 10.Еще простіше вести рахунок колоній в камері Лафара. (Рис. 121). У ній кругла пластинка розділена на сектори і сегменти, причому діаметр кола дорівнює діаметру чашки, т. Е. 10 см. Сосчітиваніе колоній проводиться по секторах пластинки, що накладається на чашку так, щоб центр її збігався з центром чашки. Платівка розділена на 6 секторів, і кількість колоній бактерій, перелічене в одному секторі, множиться для всієї чашки на 6. Якщо колоній багато, тоді відраховувати колонії в маленьких трикутниках, рівних 1 см2, і, обчисливши площу чашки, відповідно множать.
ДОСЛІДЖЕННЯ ВОДИ НА КОЛИ-ТИТР
Дослідження води на колі-титр може бути вироблено: а) бродильним методом і б) посівом на мембранні фільтри.
Метод санітарно-бактеріологічного дослідження води визначається її категорією. Води централізованого водопостачання, артезіанських свердловин досліджують відповідно до ГОСТ 5216-50. Для дослідження вод відкритих водойм, стічних вод ГОСТ не передбачений, тому в залежності від якості води і умов може бути використаний дво-, трьохетапний бродильний метод і метод мембранних фільтрів.
бродильний метод
Для дослідження цим методом застосовують наступні поживні середовища.
Середа Буліра (модифікація). До звичайного м`ясо-пептонному бульйону додають 0,25% маніту і по розчиненні його встановлюють pH 6,8-7,0, кип`ятять 10-15 хвилин, додають водний насичений розчин нейтральрота до ясної вишнево-червоного забарвлення, фільтрують і розливають в колби і пробірки з поплавками (по мл середовища звичайної концентрації), стерилізують в автоклаві при 120 ° протягом 15 хвилин.
Середа Ейкман (модифікація). Основний концентрований розчин готують, змішуючи 100 мл дистильованої води, 10 г пептона, 2,5 г глюкози, 5 г хлористого натрію, кип`ятять і фільтрують (глюкозу додають після кип`ятіння і фільтрації), встановлюють pH 7,4-7,6, розливають в колби по 10 мл, а в пробірки по 1 мл, стерилізують дрібно 3 дні поспіль по 30 хвилин щодня. Для. приготування розведеної середовища до 1 частини концентрованого розчину додають 9 частин дистильованої води.
Розоловой диференціальна середовище (РДА). До 1 л м`ясо-пептонного 1,5% агару з pH (концентрацією водневих іонів) 7,4-7,6 додають 50 мл рідкої жовчі або з того ж розрахунку сухої жовчі, 10 г лактози, 1 г глюкози, 2 мл 1% розчину спиртового індикатора бромтимолового синього і 2 мл 5% спиртового розчину розоловой кислоти. Отриману середу ретельно змішують і перевіряють на буферну здатність наступним чином: 1-2 краплі приготовленої середовища поміщають на скло, чашку Гейденрейха - Петрі або білу порцелянову платівку. Коли середовище остигає, на її поверхню наносять краплю 10% розчину соляної кислоти і поруч (так, щоб не змішувалося) краплю 20% розчину їдкого натру або вуглекислого натрію. Правильно приготовлена середовище має мати з індикатором - бромтимоловим синім коричнево-червоний колір, а без індикатора - блідо-рожевий і повинна швидко змінювати колір в жовтий від кислоти і в слабомаліновий від лугу. Якщо реакція протікає повільно (неправильно встановлений pH м`ясо-пептонного агару), необхідно для отримання швидкого зміни забарвлення додати до середовища 10% розчин соляної кислоти, - якщо середовище інтенсивно малинового кольору, або 10% розчин лугу, якщо середовище сіро-жовтого кольору. Після цього треба знову перевірити pH.
Приготовану середу розливають в серологічні або вузькі бактеріологічні пробірки до 1/4 їх висоти і стерилізують під тиском 0,5 атм. 10 хвилин в такий спосіб. Середу поміщають в автоклав, попередньо нагрітий до пароутворення. Після закінчення стерилізації пар спускають і негайно ж відкривають кришку автоклава. Коли пара вийде, середу виймають і в вертикальному положенні (не допускаючи відхилення поверхні середовища) дають застигнути. Потім ставлять в термостат на 2 доби для перевірки стерильності і просушування пробок. Перед вживанням середу попередньо розплавляють і дають застигнути з невеликою скошеної поверхнею.
Примітка. РДА можна готувати і без індикатора бромтимолового синього.
Середа Краєвської. До 1 мл рідкої жовчі додають 10 г пептона, суміш кип`ятять 30 хвилин, фільтрують, додають 10 г лактози, встановлюють pH 7,8-8,2, додають 8 мл 1% водного розчину генціанвіолета, розливають в пробірки з поплавками, стерилізують при 120 ° протягом 15 хвилин. Генціанвіолет додають до середовища Краєвської як антисептик, що пригнічує ріст грампозитивної флори, а жовч вводять як захисний фактор для кишкової палички.
Мал. 122. Колба з середовищем Буліра, в яку занурена перекинута пробірка для збирання газу.
Середовище Кесслера - Свенартона. До 1 мл дистильованої води додають 10 г пептона і 50 мл бичачої жовчі, суміш кип`ятять, помішуючи, протягом 20-30 хвилин на водяній бані і фільтрують через вату. Потім розчиняють в ній 2,5 г лактози і доводять об`єм водою до 1 л. Встановлюють pH 7,4-7,6 і додають на 1 л 2 мл 1% водного розчину генціанвіолета. Розливають по 5 мл в пробірки і стерилізують в автоклаві при 120 ° протягом 15 хвилин або дрібно.
Вибір обсягу води для посіву при визначенні титру кишкової палички залежить від джерела водопостачання і ступеня передбачуваного мікробного забруднення.
Перший день. Водопровідна вода. Водопровідну воду беруть для дослідження в кількості 500 мл. Підготовляють до посіву дві пляшки ємністю 100-120 мл і 10 пробірок з основним середовищем Ейкман (або Буліра) з поплавками (рис. 122), стерильну чашку Гейденрейха - Петрі і піпетки 10 і 1 мл, Морівськ піпетки або циліндри на 50-100 мл . На пляшках і пробірках ставлять номер досліджуваної води і дату посіву.
Відкривають пляшку з досліджуваної водою над вогнем і роблять посіви: 1 мл вносять на чашку Гейденреха- Петрі (для визначення мікробного числа), відкривши кришку, чашку заливають 15 мл розплавленого до 45 ° м`ясо-пептонного агара- гарненько розмішують, обертаючи чашку на столі колоподібними рухами, дають агару застигнути і перевертають чашку догори дном. 10-мілілітрової піпеткою або циліндром засівають по мл води в 10 пробірок з основним середовищем Ейкман (або Буліра), а 50-100-мілілітрової піпеткою або циліндром засівають в 2 пляшки із середовищем Ейкман (або Буліра) по 100 мл води для визначення кіль- титру. Посіви на колі-титр ставлять в термостат на 24 години при 43 °, на мікробне число - при 37 °.
При температурі 43 ° кишкова паличка теплокровних буде розмножуватися, в той час як сапрофітна флора гине або зростання її пригнічується.
Кринична вода. Колодязну воду беруть для дослідження в кількості 200-300 мл і засівають на чашку в кількості 0,1 мл для визначення мікробного числа.
Для визначення колі-титру засівають 100 10 1 і 0,1 мл води, останні два обсягу - в пробірки з розведеною середовищем Ейкман.
Річкова вода. Річкову воду беруть в кількості 100 мл. Розведення для посівів роблять від 1: 10 до 1: 100 000. Розведення води роблять наступним чином: 1 мл досліджуваної води вносять в пробірку з 9 мл стерильної водопровідної води, гарненько перемішують, промиваючи піпетку декілька разів. Отримують розведення води 1: 10. З цього розведення беруть 1 мл і переносять в наступну пробірку. Отримують розведення води 1: 100 і т. Д. На загальне бактеріальне обсіменіння засівають не менше двох чашок від двох розведень в залежності від передбачуваного забруднення (наприклад, 1: 10 і 1: 100 або 1: 100 і 1: 1000).
На колі-титр засівають 10 1 0,001 0,0001, 0,00001 мл. Посіви в чашках ставлять в термостат температури 37 °, а пляшки і пробірки - при температурі 43 °.
Стічна вода. Стічну воду беруть в кількості 100 мл. Засівають на загальне бактеріальне обсіменіння не менше двох чашок з розведенням 1: 1000 і 1: 10 000. На колі-титр роблять посіви, починаючи з 1 мл і закінчуючи розведенням 1: 100 000 і 1: 1 000 000. Посів роблять у середу Кесслера .
Другий день. Чашки з посівами на загальну забрудненість виймають з термостата і підраховують загальну кількість колоній, що виросли.
Знайдене кількість колоній в 1 мл | результат аналізу | |
1-50 | Наводиться, як підраховано | |
51 - 100 | Округляється до найближчих | 5 |
101-250 | »» » | 10 |
251-500 | »» » | 25 |
501-1 000 | »I» | 50 |
1 001-50 000 | »» » | 100 |
10 001-50 000 | »» » | 1000 |
50 001-100 000 | »» » | 10 000 |
Пляшки і пробірки з посівом на колі-титр виймають з термостата і переглядають. У робочому журналі відзначають зростання (помутніння - газ). При відсутності росту при посіві водопровідної води закінчують аналіз і дають чітку відповідь: колі-титр більш 333. Більш забруднену (річкову, стічну) воду при відсутності росту залишають ще на добу.
З пляшок і пробірок з наявністю каламуті і газу або одного помутніння роблять пересівання на кольорові середовища Ендо або Левіна.
Третій день. Переглядають чашки з кольоровими середовищами, відзначають в робочому журналі наявність росту, характер колоній. Колонії кишкової групи будуть гладкі (червоні на середовищі Ендо та сині на середовищі Левіна) з металевим відтінком. З таких підозрілих колоній роблять мазки і фарбують по Граму. При наявності грамнегативних неспорових паличок такі колонії пересівають на другий бродильний титр (в пробірку з розведеною середовищем Ейкман і з поплавком) і ставлять в термостат при 43 °.
Прозорі безбарвні колонії отвівают на скошений агар для подальшої ідентифікації по строкатому Ряду.
Четвертий день. Враховують посів у другому бродильном титрі. При наявності помутніння і газу дають остаточний позитивну відповідь, за відсутності газу - негативний. На цьому аналіз закінчується. В журналі зазначають коли-титр або колі-індекс за табл. 29, 30, 31.
Водопровідна вода Загальний обсяг 300 мл (2 обсягу по 100 мл і 10 обсягів по 10 мл)
На 100 мл | 0 | 1 | 2 | |||
кількість | індекс | титр | індекс | титр | індекс | титр |
0 | lt; 3 | gt; 333 | 4 | 250 | 11 | 91 |
1 | 3 | 333 | 8 | 125 | 18 | 56 |
2 | 7 | 143 | 13 | 77 | 27 | 37 |
3 | 11 | 91 | 18 | 56 | 38 | 26 |
4 | 14 | 71 | 24 | 42 | 52 | 19 |
5 | 18 | 56 | 30 | 33 | 70 | 14 |
6 | 22 | 45 | 36 | 28 | 92 | 11 |
7 | 27 | 37 | 43 | 23 | 120 | 8 |
8 | 31 | 32 | 51 | 20 | 161 | 6 |
9 | 36 | 28 | 60 | 17 | 230 | 4 |
10 | 40 | 25 | 69 | 14 | gt; 230 | lt; 4 |
Позначення: знак lt; позначає менше, знак gt; позначає більше.
Таблиця 30
Вода з колодязя Загальний обсяг 111,1 мл (обсяги 100- 10- 1 і 0,1 мл)
100 | 10 | 1 | 0,1 | Coli-індекс | Coli-титр |
_ | _ | lt; 9 | gt; 111 | ||
- | - | - | + | 9 | 111 |
- | - | + | - | 9 | 111 |
- | ; | - | 9,5 | 105 | |
- | + | + | 18 | 56 | |
- | + | - | + | 19 | 53 |
- | + | + | - | 22 | 46 |
- | 23 | 43 | |||
- | + | + | + | 28 | 36 |
+ | + | 92 | 11 | ||
+ | ; | + | - | 94 | 10 |
+ | - | + | + | 180 | 6 |
+ | + | - | 230 | 4 | |
+ | + | + | 960 | 1 | |
+ | + | + | - | 2 380 | 0,4 |
+ | + | + | + | gt; 2 380 | lt; 0,4 |
Обозначенія- + наявність росту кишкової палочкі- - відсутність зростання Кишкової палички.
річкова вода
Визначення Coli-титру та Coli-індексу при посіві 10 1 0,1 і 0,01 мл
10 | 1 | 0,1 | 0,01 | -індекс | -титр |
___ | ___________ | __ | lt; 90 | gt; 11,1 | |
- | - | - | - | 90 | 11,1 |
- | - | + | - | 90 | 11,0 |
- | - | - | 95 | 10,5 | |
- | - | + | + | 180 | 5,6 |
- | + | - | + | 190 | 5,3 |
- | + | + | - | 220 | 4,6 |
+ | - | - | - | 230 | 4,3 |
- | + | + | + | 280 | 3,6 |
+ | - | - | + | 920 | 1,1 |
+ | - | + | - | 940 | 1,0 |
+ | - | + | + | 1 800 | 0,6 |
+ | + | - | - | 2 300 | 0,4 |
+ | ; | - | + | 9 600 | 0,1 |
+ | + | + | - | 23 800 | 0,04 |
+ | + | + | + | gt; 23 800 | lt; 0,04 |
Примітки до таблиць 29, 30, 31.
- При 2-й бродильной пробі отримали газоутворення і муть в одному обсязі (пляшка) - 100 мл і в 3 пробірках по 10 мл. Шукаємо в табл. 29 по вертикалі 1 і по горизонталі 3. На перетині знаходимо колі-титр 56 і колі-індекс 18.
- При посіві 100, 10, 1, 0,1 мл отримано бродіння в судинах, засіяних 100 і 0,1 мл. У табл. 30 знаходимо за двома вертикалях знак +, по горизонталі відповідь 92 і 11.
Прозорі колонії, ідентифіковані по строкатому ряду як Е. paracoli або Е. faecalis alcaligenes, відзначають в журналі як кишкову паличку.
З 1959 р введений двофазний метод визначення колітітра і коли-індексу води.
Посів води двофазним бродильним методом із застосуванням розоловой середовища (ГОСТ 5216-50 від 1959 г.).
Перший етап. Вода засівається, як було описано вище, в глюкозопептонную середу (ГПС) в тих же кількостях (водопровідна вода - дві пляшки по 100 мл і 10 пробірок по 10 мл, колодязна - 100- 10- 1 0,1 мл і т. Д .).
Другий етап. Після закінчення 7-12 годин стояння в термостаті з усіх засіяних судин незалежно від наявності ознак зростання (муть, газоутворення) роблять пересів на середу РДА наступним чином: матеріал з середовища накопичення (ГПС) беруть петлею і переносять в пробірку з РДА, злегка розтирають в конденсаційної рідини, роблять укол в стовпчик, не доводячи до дна пробірки, а при вийманні петлі нею проводять штрих по скошеної поверхні агару. Ці пересівання ставлять в термостат при 37 ° на 24 години, а первинний посів на ГГ1С залишають в термостаті при 42-43 ° до наступного дня.
Примітки. 1. Якщо при пересеве через 7-42 години зростання бактерій на РДА немає, а в середовищі ДПС через 24 години з`явиться газоутворення або муть, знову роблять пересів на середу РДА та вирощують 10-12 годин.
- Якщо терміновий відповідь не потрібно при відсутності цілодобового чергування в лабораторії, пересівши з ГПС на РДА може бути зроблений не пізніше ніж через 24 години. Якщо пересівши зроблений пізніше 16-18 годин, то первинний посів на ГПС знову в термостат не ставиться.
Третій етап. Облік посівів на середовищі РДА. Ознаки виявлення кишкової групи.
Кишкові палички. Результат дослідження вважається позитивним, якщо в ГПС є газоутворення і муть або тільки каламуть. На скошеної поверхні РДА з`являється зростання у вигляді ізольованих жовтих колоній або жовтого штриха на пожовклим середовищі, стовпчик РДА забарвлюється в жовтий колір з розривами, а конденсаційна рідина піниться. Для підтвердження наявності кишкової палички, роблять мазок і забарвлюють по Граму.
Паракішечние палички. На скошеної поверхні виростають сірі колонії або сірий штрих, колір середовища в скошеної частини не змінюється або в результаті утворення лугу зростаючими бактеріями з`являється малиновий відтінок. У стовпчику РДА серед жовтої кольору з розривами, піна в конденсаційної рідини, в мазках грамнегативні палички.
Методика посіву води на мембранних фільтрах
Дослідження води посівом на мембранних фільтрах в останні роки застосовується в більшості бактеріологічних лабораторій. У порівнянні з бродильним методом він має такі переваги:
- скорочує термін аналізу до 24 годин;
- економить середовища і час;
- дає можливість виявити найменші кількості мікробів у воді;
- дозволяє здійснювати прямий і досить точний підрахунок кількості колоній;
- дозволяє виділити кожен мікроб в чистій культурі.
Фільтри, вийняті з упаковки, переглядають. Матова сторона має позначку олівцем - точку. Ніяких дефектів (тріщини, розриви) фільтри не повинні мати. Фільтри кладуть в емальовану або фарфорову каструлю, в яку наливають теплу дистильовану воду, витримують 20-30 хвилин, зливають її і знову доливають дистильованою водою. Так надходять 3 рази. Підготовлені таким способом фільтри кип`ятять в дистильованої воді 1 хвилину, після чого воду зливають, замінюють свіжою водою і знову кип`ятять протягом 15-20 хвилин. Це робиться для того, щоб видалити хімічні речовини, що містяться в фільтрах, і уникнути їх скручування. Після того як рідина охолоне, приступають до посіву. Для фільтрування води застосовують апарат Зейтца (див. Рис. 32) або спеціальний апарат Рублевской водопровідної станції.
Після закінчення фільтрації води фільтр знімають стерильним пінцетом і накладають на середовище Ендо догори повітряної матовою поверхнею. На чашці Гейденрейха-Петрі можна помістити 4-5 фільтрів. На дні чашки проти кожного фільтра ставлять номер аналізу. Встановлюють в термостат при 37 °. На наступний день за допомогою лупи переглядають фільтри. Відсутність росту мікробів взагалі або Е. coli на фільтрах служить підставою негативної відповіді, який дають через 24 години.
Якщо ж є зростання кишкової палички, то подальший аналіз проводять наступним чином.
Підраховують колонії, типові для кишкової групи (рис. 123 на вклейці).
Мал. 123. Зростання колоній Е. coli на мембранному фільтрі.
Отже, одна кишкова паличка перебувала в 100 мл, т. Е. Коли-титр дорівнює 100, а колі-індекс (кількість кишкових паличок в 1 л) дорівнює 10.
ДОСЛІДЖЕННЯ ВОДИ НА ЗБУДНИКІВ ЧЕРЕВНОГО тифу І ДИЗЕНТЕРІЇ
Дослідження води для виявлення збудників черевного тифу і дизентерії проводиться за епідеміологічними показниками або за спеціальним вимогу.
Для ідентифікації збудників черевного тифу і дизентерії в воді застосовують такі методи:
- сигнальний (реакція наростання титру фага);
- прискорений (іммунолюмінесцентний);
- класичний, пов`язаний з виділенням збудника в чистій культурі.
Кількість патогенних мікробів у воді буває мізерно, виділити їх звичайними лабораторними методами дуже складно, тому використовують ряд методів, щоб сконцентрувати їх в невеликому об`ємі води. Це може бути досягнуто різними способами:
- Фізичним методом: а) центрифугування, б) виправними в вакуумі з сильним влагопоглотителем (H2S04 і ін.), В) фільтрацією через мембранні фільтри.
- Хімічним методом (концентрація мікроорганізмів за допомогою різних коагулянтів).
- Осадженням за допомогою специфічних агглютинирующих сироваток.
- Концентрацією за методом флотації (заснований на здатності деяких вуглеводів - ксилол, бензол адсорбувати на поверхні мікроорганізми).
- Методом позитивного хемотаксису рухомих мікробів (метод Березова).
У практиці найбільш широко застосовується метод осадження коагулянтами (спосіб Мюллера та ін.) І метод фільтрації. В обох випадках рекомендується брати велику кількість води - 5-6 л.
Метод Мюллера. До 3 л випробуваної води додають 12 мл стерильного 10% содового розчину і 5 мл стерильного полуторахлорістого заліза. Залишають на 1 годину відстоятися. Утворені при цьому пластівці осядуть на дно, захоплюючи за собою мікробів. Обережно відсмоктують прозору воду, а осад зливають в центріфужкі, центрифугують при 2000 оборотів протягом 5-10 хвилин. Зливають прозору рідину, а осад сіють на ряд кольорових чашок (краще брати кілька кольорових середовищ по 2-3 чашки), для цього осад наносять на середу
і добре втирають матеріал шпателем, переходячи з чашки на чашку. На останніх чашках спостерігається зростання одиничних колоній. Вирощують при 37 °. З підозрілих колоній виділяють чисту культуру і ідентифікують за схемою для бактерій черевного тифу і дизентерії.
Метод фільтрації. Через фільтри пропускають не менше 500 мл досліджуваної води (але краще 5-6 л) - через кожен фільтр по 25-50 мл, а можна і більше, якщо вода добре фільтрується. Половину фільтрів поміщають в середу збагачення (жовчний бульйон, середа Мюллера, селенітовий бульйон). Висів з середовища збагачення на чашку із середовищем Плоскірєва або Левіна виробляють через 18-20 годин. Решта фільтри поміщають на чашки із середовищем Вільсона-Блера (вісмутагар), а з декількох фільтрів роблять змив фізіологічним розчином і цей змив розсіюють шпателем по чашках із середовищем Плоскірєва або Левіна. Чашки ставлять в термостат при 37 ° на добу. Підозрілі колонії з чашок виділяють і ідентифікують за схемою для черевного тифу і дизентерії.
